DB23∕T 3051-2021 溪荪组培繁殖技术规程

ICS65.020.20

CCSB05

DB23

黑龙江省地方标准

DB23/T3051—2021

溪荪组培繁殖技术规程

2021-12-24发布2022-01-23实施

黑龙江省市场监督管理局发布

DB23/T3051—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规

定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由黑龙江省林业和草原局提出。

本文件起草单位：东北林业大学、绥棱县国有林场三吉台林场、海伦市森林资源保护中心、国营明

水县明水林场。

本文件主要起草人：王玲、付海静、弓悦、孙振明、李诚、王磊、叶王斌、史恭发、闫蕾、吕汝彤、

赵蕊阳、刘桂伶、杨娟、裴艳春。

Ⅰ

DB23/T3051—2021

溪荪组培繁殖技术规程

1范围

本文件规定了溪荪（IrissanguineaDonn.exHorn.）组培繁殖的环境与设备消毒、培养基配制、

培养条件、无菌苗培育、外植体获取和处理、愈伤组织诱导、愈伤组织增殖、不定芽分化、生根培养、

炼苗、移栽和生产档案。

本文件适用于溪荪组培繁殖。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用性文

件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用

于本文件。

LY/T1882—2010林木组织培养育苗技术规程

NY/T2306—2013花卉种苗组培快繁技术规程

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4环境与设备消毒

4.1接种室消毒

接种室消毒按NY/T2306—2013中8.6的规定执行。

4.2培养室消毒

培养室消毒按NY/T2306—2013中8.7的规定执行。

4.3超净工作台消毒

超净工作台消毒按NY/T2306—2013中8.5和8.6的规定执行。

4.4接种器具消毒

接种器具按NY/T2306—2013中8.4的规定执行。

5培养基配制

5.1母液配制

培养基母液配制按NY/T2306—2013中7.3的规定执行。

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5.2培养基配制

5.2.1培养基配方

培养基配制成分如下：

a)初代培养基为添加30 g/L蔗糖+3 g/L琼脂粉的MS培养基，灭菌前培养基pH值调为5.8；

b)继代培养基为添加30 g/L蔗糖的MS固体培养基，灭菌前培养基pH值调为5.8～6.0；

c)愈伤组织诱导培养基为添加6-BA 1.0mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L+蔗糖30 g/L的MS

固体培养基，灭菌前培养基pH值调为5.8～6.0；

d)愈伤组织增殖培养基为添加6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L的MS固体培养基，

灭菌前培养基pH值调为5.8～6.0；

e)分化培养基为添加6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L的MS固体培养基，灭菌前培养

基pH值调为5.8～6.0；

f)生根培养基为添加NAA 0.5 mg/L+活性炭 1.0 g/L+蔗糖30 g/L的MS固体培养基，灭菌前培

养基pH值调为5.8～6.0。

5.2.2培养基配制方法

培养基配制方法按NY/T2306—2013中7.4的规定执行。

5.3培养基灭菌及保存

培养基灭菌及保存方法按LY/T1882—2010中4.2的规定进行。

6培养条件

光照周期14h/d、光照强度3000Lux～5000Lux，培养温度24℃～26℃，空气相对湿度60%～80%。

7无菌苗培育

7.1种子消毒

挑选颗粒饱满的种子，用稀释50倍的洗洁剂水溶液搅拌清洗后，流水冲洗干净，在室温下用初始

温度为80 ℃的水浸泡种子24h，倒掉水后吸干。在超净工作台内，将种子用75 %乙醇浸泡30 s，无

菌水冲洗3遍～5遍，再用4％次氯酸钠水溶液浸泡并摇动20 min，用无菌水冲洗5次并浸泡10 min，

水倒掉后将种子放到滤纸上吸干备用。

7.2无菌接种

消毒后的种子接入初代培养基上培养。

8外植体获取和处理

种子萌发幼苗具3片～4片叶时，在无菌条件下将根部剪掉，叶片保留2.0 cm～3.0 cm长，接种

到继代培养基中萌发根系，剪取带有二级须根的一级须根，切除二级须根后备用。

9愈伤组织诱导

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DB23/T3051—2021

将须根切至长度为1.0 cm～1.5 cm，接入愈伤组织诱导培养基中培养。

10愈伤组织增殖

从根段上切取黄色、颗粒明显的愈伤组织接入愈伤组织增殖培养基中。对产生内生菌的愈伤组织，

可转到添加了100 mg/L青霉素G钠的增殖培养基上培养。待内生菌消失后，再移回增殖培养基中。

11不定芽分化

将增殖后的愈伤组织分割成直径5 mm的小块，接入分化培养基中培养。

12生根培养

当不定芽高度≥3 cm时，将不定芽单独切离下来，转入生根培养基中培养。

13炼苗

当组培苗根系长度≥3 cm时，打开组培瓶炼苗3 d，炼苗期间应对叶表面喷洒自来水保湿。炼苗后

可在温室内移栽。

14移栽

14.1移栽准备

将高温消毒的草炭土与蛭石按照1:1的比例混合后装入50孔穴盘中，并将穴盘底部浸入水中至盆

中土壤湿润。

14.2移栽

取出组培苗，用清水洗净基部培养基，修剪根，保留2cm，移栽至穴盘中，浇透水。

14.3移栽后管理

移栽初期，保持空气湿度≥80%，适时浇水，保持基质湿润，温度控制在18℃～25℃，逐步增加光

照。在5月中旬～8月中旬可进行室外移栽，移栽后2周内保持土壤湿润。

15生产档案

应建立生产档案，内容包括：环境与