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文档简介
固定化细胞法制备L-天冬氨酸《生物制药工艺》主讲人:方绪凤L-天冬氨酸(L-asparticacid,L-Asp),含一个氨基两个羧基,分子式C4H7NO4,相对分子量为133.10。湖北生物科技职业学院理化性质:L-天冬氨酸
别名:丁氨二酸、L-天冬酸、L-天门冬氨酸或L-氨基琥珀酸。L-Asp是氨基酸输液的重要组成部分。L-天冬氨酸钾和L-天冬氨酸镁是钾、镁的有效补充剂,可用于心脏病的治疗,也可作为肝功能促进剂和氨解毒剂,对洋地黄等强心苷类中毒引起的心律失常也有较好治疗作用,并可解除恶心、呕吐等中毒症状,还可用于维生素B6及抗肿瘤药物的合成。湖北生物科技职业学院理化性质:L-天冬氨酸(L-Asp)湖北生物科技职业学院提取原理:酶催化延胡索酸转化生成天冬氨酸HOOC-CHHC-COOHNH2-CH-COOHCH2-COOHNH3天冬氨酸酶延胡索酸(富马酸)L-天冬氨酸大肠杆菌AS1.881菌种+湖北生物科技职业学院提取原理:固定化细胞法生产L-天冬氨酸
以卡拉胶为包埋材料固定化高天冬氨酸酶活性的大肠杆菌细胞。将固定化大肠杆菌细胞制成生物反应器实现L-天冬氨酸的连续生产。湖北生物科技职业学院制备方法:L-天冬氨酸固定化生产工艺流程图湖北生物科技职业学院制备方法:步骤一大肠杆菌细胞活化及扩大培养菌种活化扩大培养湖北生物科技职业学院制备方法:步骤二大肠杆菌细胞收集湖北生物科技职业学院制备方法:步骤三大肠杆菌细胞的固定化1g卡拉胶20ml无菌生理盐水45℃,5g/L的大肠杆菌悬浮液混匀固化洗涤切块固定化大肠杆菌细胞加热、溶解再降温至45℃100mL0.3mol/LKCl溶液浸泡4h4℃冷藏30min湖北生物科技职业学院制备方法:步骤四固定化反应器转化及产物分离纯化延胡索酸+铵pH9.01mmol/LMgCl2固定化生物反应器(15cm×30cm)转化率95%转化液37℃活化24h1.0mol/L恒速流过湖北生物科技职业学院制备方法:步骤五转化产物的分离纯化酶反应液脱色液L-天冬氨酸晶体结晶、抽滤、干燥富马酸调pH至等电点活性炭脱色L-Asp是氨基酸输液的重要组成部分。用于蛋白质摄入不足、吸收障碍等氨基酸不能满足机体代谢需要的患者。亦用于改善手术后病人的营养状况。湖北生物科技职业学院扩展知识:L-天冬氨酸产品临床应用①无需进行酶的分离和纯化,减少酶的活力损失,同时大大降低了成本;②对于活细胞来说,保持了酶的原始状态,酶的稳定性更高,对污染的抵抗力更强;③细胞生长停滞时间短,细胞多,反应快等等。湖北生物科技职业学院课后思考:通过固定化细胞技术生产的L-天冬氨酸有优势有那些?卡拉胶优良无毒机械性能较好操作方便稳定性较好
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