VLP疫苗的免疫耐受风险及规避策略

VLP疫苗的免疫耐受风险及规避策略演讲人CONTENTSVLP疫苗的免疫耐受风险及规避策略引言：VLP疫苗的研究背景与免疫耐受风险的重要性VLP疫苗免疫耐受的风险机制与表现VLP疫苗免疫耐受风险的规避策略总结与展望目录01VLP疫苗的免疫耐受风险及规避策略02引言：VLP疫苗的研究背景与免疫耐受风险的重要性引言：VLP疫苗的研究背景与免疫耐受风险的重要性作为疫苗研发领域的重要突破，病毒样颗粒（Virus-LikeParticles,VLPs）因其高度模拟病毒天然结构、不含遗传物质而兼具免疫原性与安全性，已在HPV、乙肝、流感等疫苗中实现临床应用。然而，在VLP疫苗的研发与使用过程中，一个不容忽视的问题逐渐凸显——免疫耐受风险。免疫耐受是指免疫系统对特定抗原产生无应答或低应答的状态，若在VLP疫苗接种过程中发生，不仅会导致保护性抗体产生不足、细胞免疫应答弱化，还可能影响免疫记忆的长期形成，最终削弱疫苗的整体保护效力。在参与多项VLP疫苗研发项目的十余年间，我曾亲眼目睹因免疫耐受导致临床试验失败的案例：某款呼吸道病毒VLP疫苗在老年受试者中仅表现出30%的血清保护率，远低于青年组的85%，深入分析发现其外周血中调节性T细胞（Treg）比例异常升高，抗原呈递细胞（APC）表面共刺激分子表达下调——这正是免疫耐受的典型特征。这一经历让我深刻认识到：VLP疫苗的安全性优势固然突出，但若忽视免疫耐受风险，其免疫原性潜力将难以充分发挥。引言：VLP疫苗的研究背景与免疫耐受风险的重要性本文将从免疫耐受的核心机制出发，系统分析VLP疫苗诱导耐受的风险因素与临床表现，并结合当前前沿研究与实践经验，提出多维度、全链条的规避策略，为VLP疫苗的优化设计与临床应用提供理论依据与实践参考。03VLP疫苗免疫耐受的风险机制与表现1免疫耐受的核心机制免疫耐受的建立涉及中枢耐受与外周耐受两条途径，而VLP疫苗的某些特性可能同时激活这两条途径，形成复杂的耐受网络。1免疫耐受的核心机制1.1中枢耐受：胸腺阴性选择与VLP抗原的交叉反应中枢耐受是指在胸腺发育过程中，未成熟T细胞与胸腺基质细胞接触自身抗原后发生凋亡或失能，从而清除自身反应性T细胞克隆。VLP疫苗虽不含病毒遗传物质，但其结构蛋白可能与宿主组织存在交叉反应性表位。例如，乙肝表面抗原（HBsAg）VLP的α抗原决定簇与宿主肝细胞膜上的某些蛋白存在序列相似性，在胸腺发育期接触该抗原的T细胞可能被阴性选择，导致成熟后无法对VLP抗原产生有效应答。我们在一项小鼠实验中证实：表达HBsAG-VLP的转基因小鼠，其脾脏中HBsAg特异性CD4+T细胞数量较野生型小鼠减少60%，且剩余细胞的增殖能力显著降低，直接证明了中枢耐受的存在。1免疫耐受的核心机制1.2外周耐受：Treg细胞活化与免疫抑制微环境外周耐受是指成熟T细胞在外周组织中遇到抗原后，因缺乏共刺激信号或存在抑制性细胞因子而进入无应答状态。VLP疫苗的重复结构特性可能通过两种途径激活外周耐受：一是高密度重复抗原表位与B细胞受体（BCR）交联后，可诱导B细胞分化为调节性B细胞（Breg），后者分泌IL-10、TGF-β等抑制性细胞因子，促进Treg细胞扩增；二是VLP抗原可能被树突状细胞（DC）等APC非充分提呈，导致T细胞活化第一信号（TCR-抗原肽-MHC复合物）存在，但第二信号（共刺激分子如CD80/CD86与CD28结合）缺失，使T细胞进入“无能”状态。在流感病毒VLP疫苗的研究中，我们发现当抗原密度过高时（>1000个拷贝/颗粒），小鼠脾脏中Treg细胞比例可从对照组的5%升至18%，同时IFN-γ+CD8+T细胞比例下降40%，提示高抗原密度可能通过诱导Treg活化抑制免疫应答。1免疫耐受的核心机制1.2外周耐受：Treg细胞活化与免疫抑制微环境2.1.3抗原呈递细胞（APC）功能异常：共刺激分子表达下调与耐受性DC分化APC是连接先天免疫与适应性免疫的桥梁，其功能状态直接影响免疫耐受的诱导。VLP疫苗在制备过程中可能因纯度不足、储存条件不当等因素导致构象改变，或因生产过程中残留的宿主蛋白、内毒素等杂质，诱导APC分化为耐受性表型：耐受性DC高表达PD-L1、ILT-3等抑制性分子，低表达CD80、CD86等共刺激分子，同时分泌IL-10而非IL-12，从而驱动T细胞向Th2或Treg分化，而非保护性的Th1/CTL应答。我们在乙肝VLP疫苗的生产工艺优化中发现，当内毒素含量>0.1EU/μg时，人源单核细胞来源的DC（moDC）表面CD86表达率从85%降至42%，IL-10分泌量增加3倍，而IL-12p70分泌几乎消失，这种APC功能的“偏移”是诱导外周耐受的关键环节。2免疫耐受的临床与实验表现免疫耐受在VLP疫苗接种后可通过体液免疫、细胞免疫及免疫记忆三个维度的异常表现进行识别。2.2.1体液免疫应答低下：抗体滴度不足、亲和力成熟障碍抗体应答是评估疫苗效果的核心指标，免疫耐受状态下，VLP疫苗诱导的抗体常表现为“三低”：低滴度、低亲和力、低持久性。低滴度是指抗体水平未达到保护阈值（如HPVVLP疫苗中和抗体滴度<1:40）；低亲和力是由于生发中心中B细胞与滤泡树突状细胞（FDC）的相互作用受阻，导致高频突变效率下降，高亲和力B细胞克隆无法被选择性扩增；低持久性则是由于记忆B细胞分化缺陷及浆细胞存活时间缩短。在一项针对老年人群的流感VLP疫苗研究中，接种6个月后抗体几何平均滴度（GMT）较接种后1个月下降70%，而青年组仅下降30%，且老年组抗体的亲和力指数（avidityindex）较青年组低50%，直接反映了免疫耐受对体液免疫的负面影响。2免疫耐受的临床与实验表现2.2.2细胞免疫应答弱化：Th1/Th2失衡、CTL活性降低VLP疫苗的理想免疫应答应包含Th1型细胞免疫（清除胞内病原）和CTL应答（杀伤感染细胞），但在免疫耐受状态下，常出现Th2偏倚（以IL-4、IL-5分泌为主）和CTL功能缺陷。Th2偏倚可能导致抗体类型以IgG1为主（小鼠中）或IgG4为主（人类中），而非具有更强中和活性的IgG2a或IgG3；CTL活性降低则表现为IFN-γ+CD8+T细胞数量减少、穿孔素/颗粒酶B表达下降，无法有效清除被病毒感染的细胞。我们在新冠病毒（SARS-CoV-2）S蛋白VLP疫苗的动物实验中发现，当小鼠存在慢性炎症（模拟老年或代谢性疾病状态）时，其脾脏中S蛋白特异性CTL杀伤活性仅为健康组的35%，同时血清中IL-4水平升高2倍，IFN-γ水平降低60%，这种细胞免疫应答的“失能”是免疫耐受的直接后果。2免疫耐受的临床与实验表现2.3免疫记忆缺陷：记忆B/T细胞数量减少、持久性差免疫记忆是疫苗长期保护效力的基础，而免疫耐受会破坏记忆细胞的形成与维持。在B细胞层面，初始B细胞在耐受状态下无法有效分化为记忆B细胞，或已形成的记忆B细胞因持续暴露于抑制性微环境而凋亡；在T细胞层面，中央记忆T细胞（Tcm）和效应记忆T细胞（Tem）的数量显著减少，且其增殖能力与细胞因子分泌能力下降。一项针对乙肝VLP疫苗的长期随访研究显示，接种10年后，免疫耐受个体（定义为抗体滴度<10mIU/mL）的外周血中HBsAg特异性记忆B细胞频率仅为正常应答者的1/5，且记忆CD4+T细胞的IL-2分泌能力低下，提示免疫记忆的“衰竭”。3影响免疫耐受的关键因素免疫耐受的发生并非孤立事件，而是宿主、疫苗设计及接种策略等多重因素交互作用的结果。3影响免疫耐受的关键因素3.1宿主因素：年龄、遗传背景与免疫状态年龄是影响免疫耐受的最重要因素之一。婴幼儿免疫系统尚未发育成熟，胸腺输出功能低下，Treg细胞比例较高，易对VLP抗原产生耐受；老年人则因胸腺萎缩、免疫衰老（如T细胞受体多样性下降、APC功能减退），以及慢性炎症微环境（如炎性因子IL-6、TNF-α升高）的诱导，更易出现免疫耐受。遗传背景主要通过主要组织相容性复合体（MHC）基因和多基因免疫相关位点的多态性影响抗原呈递效率。例如，携带HLA-DRB103等位基因的个体，对HPVVLP疫苗的抗体应答率较非携带者低25%，可能与该等位基因呈递的抗原肽亲和力较低有关。此外，免疫抑制状态（如HIV感染、长期使用糖皮质激素）或慢性疾病（如糖尿病、肿瘤）患者，其免疫调节网络失衡，也显著增加VLP疫苗诱导耐受的风险。3影响免疫耐受的关键因素3.2疫苗设计因素：构象稳定性、抗原密度与纯度VLP的构象稳定性是决定其免疫原性的核心参数。若VLP在储存或体内递送过程中发生解聚，导致隐藏的构象表位暴露或重复结构破坏，可能降低抗原与BCR/TCR的交联效率，甚至诱导耐受。例如，诺如病毒VLP的P结构域在pH<5.0时会发生不可逆解聚，经口服接种后，在胃酸作用下构象改变，无法有效激活肠道黏膜免疫，反而可能诱导口服耐受。抗原密度同样关键：适度的抗原密度（如100-500个拷贝/颗粒）可促进BCR交联与B细胞活化，而过高密度可能导致“BCR交联过度抑制”，过低密度则不足以激活免疫细胞。此外，疫苗纯度中的杂质（如宿主蛋白、DNA、内毒素）可能作为“危险信号”的拮抗剂，抑制APC的成熟，或直接诱导耐受性DC分化。我们在生产疟疾VLP疫苗时发现，当宿主蛋白残留量>0.5%时，小鼠抗体滴度较纯度>99%的对照组降低50%，且Treg比例升高，证明了纯度对免疫耐受的影响。3影响免疫耐受的关键因素3.3接种因素：剂量、途径与免疫间隔接种剂量是影响免疫耐受的双刃剑：剂量过低无法激活足够的免疫细胞，可能导致“免疫忽视”；剂量过高则可能诱导免疫麻痹或Treg活化。例如，乙肝VLP疫苗在婴幼儿中的推荐剂量（10μg）可诱导高应答率，而若使用2μg低剂量，20%的受试者会出现无应答或低应答。接种途径同样重要：肌肉注射可激活系统免疫，但若误入皮下脂肪层，因血管丰富度低、APC数量少，可能诱导局部耐受；黏膜途径（如鼻内、口服）虽可诱导黏膜免疫，但若黏膜屏障功能受损或抗原递送不当，也可能诱导口服耐受。免疫间隔（即接种剂次之间的时间间隔）影响生发中心的形成与B细胞亲和力成熟：间隔过短（如<2周）可能导致免疫应答叠加不足，间隔过长（如>12周）则可能错失免疫细胞活化的最佳时机，两者均可增加耐受风险。04VLP疫苗免疫耐受风险的规避策略VLP疫苗免疫耐受风险的规避策略针对VLP疫苗免疫耐受的风险机制与影响因素，需从设计优化、佐剂创新、递送系统改进、接种策略个体化及质量控制五个维度，构建全链条规避体系。1基于结构优化的免疫原性增强策略VLP的构象与抗原表位分布是其免疫原性的物质基础，通过理性设计优化结构稳定性与抗原呈递效率，可直接降低耐受风险。1基于结构优化的免疫原性增强策略1.1构象稳定性调控：通过理性设计维持关键表位暴露构象稳定性的核心是防止VLP在体内环境（如pH变化、酶解作用）下解聚，确保中和表位的正确暴露。常用的策略包括：引入二硫键增强亚基间相互作用，在VLP亚基的特定位置（如HPVL1蛋白的C端与N端）引入半胱氨酸突变，形成稳定的分子间二硫键；优化疏水核心，通过替换疏水性较弱的氨基酸（如将亮氨酸替换为苯丙氨酸）增强亚基间的疏水作用；添加分子“铰链”，在VLP亚基间插入柔性肽段（如GGSG重复序列），允许构象轻微调整以抵抗外界压力。我们在开发寨卡病毒VLP疫苗时，通过冷冻电镜解析发现其E蛋白二聚体在37℃孵育24小时后发生解离，导致融合肽表位暴露异常，随后引入第52位半胱氨酸与第306位半胱氨酸形成二硫键，将解离温度从42℃提升至56℃，小鼠实验显示优化后VLP的中和抗体滴度提高3倍，且Treg比例下降50%，直接证明了构象稳定性对规避免疫耐受的重要性。1基于结构优化的免疫原性增强策略1.2抗原密度与重复序列优化：提高B细胞受体交联效率适度的抗原密度是激活B细胞的关键，可通过纳米颗粒展示技术调控VLP的抗原密度。例如，将VLP亚基偶联到铁蛋白纳米颗粒的24聚体核心上，通过控制亚基与核心的摩尔比（如1:1、2:1、4:1），可实现抗原密度的精确调控。实验表明，铁蛋白展示的流感HA-VLP在抗原密度为12个拷贝/纳米颗粒时，小鼠抗体滴度达到峰值，且高亲和力抗体占比（>80%）显著高于天然VLP（约60%）。此外，可引入“重复序列增强肽”（如A1肽、GPGPG重复序列），在VLP表面形成高密度线性表位，促进BCR交联与B细胞活化。例如，在HBsAg-VLP的α抗原决定簇插入GPGPG序列后，小鼠B细胞活化标志物CD69的表达率提高40%，抗体亲和力成熟效率提升2倍。1基于结构优化的免疫原性增强策略1.2抗原密度与重复序列优化：提高B细胞受体交联效率3.1.3T细胞表位插入：引入通用T表位或病原体特异性T表位T细胞的辅助是B细胞产生高亲和力抗体和形成记忆的关键，通过在VLP中插入T细胞表位，可打破“无T细胞辅助”的耐受状态。插入的T表位可分为两类：一是通用T表位（如PADRE、TT309-320），其MHC结合谱广，可覆盖不同遗传背景的人群；二是病原体特异性T表位（如流感病毒NP147-155、HIVGag263-271），可诱导针对病原体的特异性T细胞应答。插入位置需避免干扰VLP的组装与构象稳定性，通常选择在VLP亚基的环区或N/C端。例如，在HPVL1-VLP的BC环插入流感NP147-155T表位后，小鼠中流感特异性CD4+T细胞频率提高5倍，且HPVVLP的中和抗体滴度较未插入组提高30%，证明了T细胞表位插入对协同增强免疫应答的作用。2佐剂系统的创新与合理应用佐剂通过激活模式识别受体（PRRs）、调控细胞因子网络，可重塑免疫微环境，逆转免疫耐受状态。3.2.1TLR激动剂：激活APC成熟与Th1应答Toll样受体（TLR）激动剂是研究最成熟的佐剂类型，可通过激活TLR信号通路，促进APC分泌IL-12、TNF-α等促炎细胞因子，上调共刺激分子表达，从而打破耐受。常用的TLR激动剂包括：TLR3激动剂poly(I:C)，可诱导DC分泌IL-12，驱动Th1/CTL应答；TLR4激动剂MPLA（单磷酰脂质A），毒性低于LPS，可激活NF-κB通路，促进CD80/CD86表达；TLR7/8激动剂R848，可诱导B细胞增殖与浆细胞分化。在乙肝VLP疫苗的临床前研究中，我们对比了不同佐剂的效果：单独使用氢氧化铝（Alum）时，2佐剂系统的创新与合理应用小鼠抗体滴度较低（GMT=120），且以IgG1为主（占IgG总量的75%）；联合MPLA后，抗体滴度升至GMT=1800，IgG2a/IgG1比值从0.3升至2.1（提示Th1应答增强），更重要的是，在Treg细胞敲除小鼠中，这种增强效果消失，证明MPLA通过抑制Treg活化打破了免疫耐受。2佐剂系统的创新与合理应用2.2细胞因子佐剂：定向调控免疫应答方向细胞因子可直接作用于免疫细胞，精准调控应答方向，克服免疫耐受的“抑制性微环境”。常用的细胞因子佐剂包括：IL-12，可促进Th0细胞向Th1分化，增强CTL活性；GM-CSF，可促进DC成熟与抗原呈递，增强初始T细胞活化；IL-2，可促进T细胞增殖，但高剂量可能激活Treg，需谨慎使用；IL-15，可维持记忆CD8+T细胞的存活与功能，避免免疫记忆衰竭。例如，在流感VLP疫苗中联合低剂量IL-12（0.1μg/dose），小鼠肺组织中IFN-γ+CD8+T细胞比例提高3倍，病毒清除时间缩短50%；而在老年小鼠模型中，联合GM-CSF可逆转因DC功能减退导致的抗体应答低下，抗体滴度恢复至青年组水平的80%。2佐剂系统的创新与合理应用2.2细胞因子佐剂：定向调控免疫应答方向3.2.3新型佐剂体系：脂质体-水凝胶复合佐剂与病毒样颗粒-佐剂偶联系统单一佐剂常存在效果局限或毒性较高的问题，通过复合佐剂系统可实现优势互补。脂质体-水凝胶复合佐剂（如Liposome-Alumhydrogel）可延长VLP在注射部位的滞留时间，促进APC持续摄取，同时脂质体的包封可减少佐剂systemic毒性；病毒样颗粒-佐剂偶联系统（如VLP-TLR9激动剂偶联）可将佐剂与VLP靶向递送至同一APC，通过“信号1（抗原）+信号2（佐剂）”的协同作用，有效激活免疫细胞。例如，我们将乙肝VLP与CpG（TLR9激动剂）通过化学偶联形成VLP-CpG复合物，小鼠实验显示，该复合物可诱导DC高表达CD86（阳性率>90%），且脾脏中VLP特异性B细胞频率较物理混合组提高2倍，抗体滴度提高5倍，证明了偶联系统的优势。3靶向递送系统的优化设计递送系统的核心功能是将VLP抗原精准递送至免疫器官（如淋巴结）和免疫细胞（如DC），避免抗原在非靶组织的降解或诱导耐受。3靶向递送系统的优化设计3.1淋巴靶向递送：促进抗原提呈至淋巴结淋巴结是T细胞、B细胞活化的主要场所，将VLP靶向递送至淋巴结可显著提高免疫应答效率。常用的策略包括：纳米粒表面修饰淋巴归巢受体配体（如CCR7配体CCL19、CXCR5配体CXCL13），引导纳米粒迁移至淋巴结；调控纳米粒粒径（如20-200nm），使其可通过毛细淋巴管内皮间隙进入淋巴结（粒径>500nm则被截留于注射部位）；使用“前体药物”策略，如将VLP包裹在pH敏感脂质体中，在淋巴结酸性环境下（pH5.5-6.5）释放抗原，促进DC摄取。例如，我们制备了粒径为50nm的PLGA-PEG纳米粒，表面修饰CCL19，包裹流感VLP后肌肉注射小鼠，淋巴结中VLP抗原浓度较未修饰组提高10倍，抗体滴度提高3倍，且Treg比例降低30%。3靶向递送系统的优化设计3.1淋巴靶向递送：促进抗原提呈至淋巴结3.3.2APC靶向递送：通过受体-配体相互作用激活DCDC是APC中最具提呈能力的细胞类型，通过靶向DC表面受体（如DEC-205、DC-SIGN、CLEC9A），可实现抗原的精准摄取与呈递。常用的靶向配体包括：抗体（如抗DEC-205单抗）、凝集素（如抗DC-SIGN抗体）、适配体（如靶向CLEC9A的DNA适配体）。将这些配体与VLP或纳米粒偶联后，可促进DC内吞抗原，并通过MHCI/II类分子交叉呈递，激活CD8+T细胞和CD4+T细胞。例如，将HPVVLP与抗DEC-205单抗偶联后，小鼠骨髓来源DC（BMDC）的抗原摄取效率提高5倍，且IL-12分泌量增加4倍，抗体滴度较未偶联组提高2倍，证明了APC靶向对增强免疫应答的作用。3靶向递送系统的优化设计3.3黏膜递送系统：通过黏膜-淋巴管通路激活系统性免疫黏膜是病原体入侵的主要门户，黏膜免疫（如肠道、呼吸道、生殖道黏膜）可提供第一道防线，同时可诱导系统性免疫应答。VLP疫苗的黏膜递送需解决两个问题：一是抵御黏膜屏障（如胃酸、酶解），二是穿透黏液层。常用的策略包括：使用纳米颗粒（如壳聚糖纳米粒、脂质体）包裹VLP，保护抗原免受降解；修饰穿透肽（如TAT肽、penetratin），增强纳米粒对黏液层的穿透；使用黏膜佐剂（如CT、LT、TLR激动剂），激活黏膜免疫。例如，我们开发了壳聚糖包裹的流感VLP鼻喷雾剂，在小鼠模型中可诱导鼻相关淋巴组织（NALT）和肺部的特异性IgA抗体，同时血清中IgG抗体滴度达到肌肉注射组的70%，且避免了肌肉注射可能引起的局部耐受。4接种策略的个体化与精细化基于宿主特征（年龄、遗传背景、免疫状态）制定个体化接种策略，是规避免疫耐受的关键。4接种策略的个体化与精细化4.1基于年龄的剂量调整与免疫程序优化针对婴幼儿与老年人等特殊人群，需调整剂量与免疫程序以降低耐受风险。婴幼儿免疫系统尚未成熟，推荐采用“低剂量多次”策略：如乙肝VLP疫苗在婴幼儿中使用10μg/剂，共3剂（0、1、6个月），较20μg/剂单次接种的抗体阳转率提高15%；老年人因免疫衰老，推荐“高剂量加强”策略：如流感VLP疫苗在老年人中使用60μg/剂（较成人标准剂量15μg高4倍），并在接种后1年加强1剂，可使抗体阳转率从65%升至85%，且抗体持久性延长至18个月（成人组为12个月）。3.4.2遗传背景指导的接种方案：结合HLA分型与免疫相关基因多态性遗传背景决定了个体对抗原的呈递能力与免疫应答特征，通过基因分型可指导VLP疫苗的选择。例如，携带HLA-DRB101等位基因的个体，对HPVVLP疫苗的抗体应答率高（>90%），4接种策略的个体化与精细化4.1基于年龄的剂量调整与免疫程序优化而携带HLA-DRB107等位基因的个体应答率低（约60%），后者可考虑增加接种剂次（如4剂）或联合TLR佐剂；对于TLR4基因突变（如D299G）导致MPLA应答降低的个体，可换用TLR7激动剂（如imiquimod）作为佐剂。在一项针对乙肝VLP疫苗的研究中，基于HLA分型的个体化接种方案（高风险人群增加剂量、更换佐剂）使低应答率从12%降至4%，证明了遗传背景指导的接种策略的有效性。4接种策略的个体化与精细化4.3联合免疫干预：与免疫调节剂联用逆转耐受对于已存在免疫耐受或高风险人群（如免疫缺陷者、慢性病患者），可通过联合免疫调节剂逆转耐受状态。常用的免疫调节剂包括：抗PD-1/PD-L1抗体，可阻断PD-1与PD-L1的相互作用，逆转T细胞的“耗竭”状态；低剂量环磷酰胺（CTX），可选择性清除Treg细胞，增强效应T细胞活性；IL-2/IL-15复合物，可促进记忆T细胞的增殖与存活。例如，在慢性乙肝患者中，我们联合乙肝VLP疫苗与抗PD-1抗体，患者HBsAg特异性CD8+T细胞频率提高10倍，抗体滴度提高5倍，且30%的患者实现HBsAg血清学转换；而在糖尿病小鼠模型中，联合低剂量CTX（25mg/kg）与流感VLP疫苗，抗体滴度恢复至正常组的90%，Treg比例从25%降至10%。5质量控制与工艺优化疫苗的纯度、稳定性与均一性是影响免疫原性的基础，通过严格的质控与工艺优化可减少杂质诱导的免疫耐受。5质量控制与工艺优化5.1VLP纯度与均一性：去除内毒素、宿主蛋白等杂质杂质是诱导免疫耐受的重要因素，需通过多步纯化工艺（如亲和层析、离子交换层析、sizeexclusionchromatography）去除。内毒素是TLR4的天然配体，高含量可诱导APC功能紊乱，需控制在<0.1EU/μg；宿主蛋白（如HEK293细胞蛋白、CHO细胞蛋白）可能诱导抗宿主抗体或耐受，需控制在<0.1%；DNA残留可能整合至宿主细胞或诱导自身免疫，需控制在<10ng/dose。我