2025年核酸pcr实验室考试题及答案

2025年核酸pcr实验室考试题及答案一、单项选择题（每题2分，共30题，计60分）1.核酸PCR实验室分区中，产物分析区的核心功能是？A.样本接收与处理B.扩增反应体系配制C.PCR扩增产物检测D.核酸提取与纯化答案：C2.下列关于PCR引物设计的描述中，错误的是？A.引物长度建议18-25个核苷酸B.引物GC含量应控制在40%-60%C.引物3'端避免连续3个G/CD.引物5'端必须与模板严格互补答案：D3.实时荧光PCR实验中，Ct值的定义是？A.荧光信号达到设定阈值时的循环数B.扩增曲线平台期的荧光强度值C.基线期的平均荧光值D.扩增效率达到90%时的循环数答案：A4.核酸提取过程中，使用异硫氰酸胍的主要作用是？A.裂解细胞膜并抑制核酸酶B.沉淀蛋白质C.中和溶液pH值D.提高核酸溶解度答案：A5.PCR实验室空气流向应严格遵循？A.产物分析区→扩增区→制备区→样本处理区B.样本处理区→制备区→扩增区→产物分析区C.制备区→样本处理区→扩增区→产物分析区D.产物分析区←扩增区←制备区←样本处理区答案：D6.检测新型冠状病毒核酸时，选择ORF1ab和N基因双靶标的主要目的是？A.提高检测灵敏度B.降低检测成本C.避免引物二聚体干扰D.减少假阴性概率答案：D7.以下哪种情况会导致PCR实验出现假阴性结果？A.样本核酸提取时被污染B.扩增仪温度校准偏差（退火温度偏高）C.引物浓度过高D.荧光探针标记错误答案：B8.实时荧光PCR仪的荧光通道校准应至少多久进行一次？A.每周B.每月C.每季度D.每半年答案：C9.核酸检测实验室生物安全柜使用完毕后，需保持紫外灯照射的时间是？A.5分钟B.15分钟C.30分钟D.60分钟答案：C10.下列关于PCR反应体系配制的操作规范中，错误的是？A.使用带滤芯的移液器吸头B.不同批次试剂混合使用前需做兼容性验证C.配制完成后立即进行扩增D.试剂从冰箱取出后直接使用答案：D11.检测样本保存温度要求为-20℃时，正确的保存方式是？A.短期保存（<7天）可置于普通冰箱冷冻层B.长期保存需使用-80℃超低温冰箱C.反复冻融不超过3次D.保存容器可使用普通离心管答案：B12.扩增产物污染的主要来源是？A.样本间交叉污染B.气溶胶扩散C.试剂污染D.仪器残留污染答案：B13.评价PCR检测方法特异性的金标准是？A.与已验证方法的符合率B.检测不同病原体的交叉反应C.最低检测限（LOD）D.重复性试验CV值答案：B14.核酸提取仪日常维护中，需要重点检查的项目不包括？A.机械臂运动精度B.磁珠残留量C.加样针堵塞情况D.实验室温湿度答案：D15.新型冠状病毒核酸检测中，弱阳性样本的处理流程是？A.直接报告阳性B.重新提取原样本核酸并复检C.稀释样本后再次检测D.报告阴性答案：B16.PCR实验室压差控制要求中，相邻区域压差应至少达到？A.5PaB.10PaC.15PaD.20Pa答案：B17.下列关于内参基因（内标）的描述中，错误的是？A.用于监控核酸提取效率B.应与靶基因扩增效率一致C.可使用人源管家基因（如GAPDH）D.内参阴性提示样本可能被污染答案：D18.扩增仪温度均匀性验证时，应选择的检测点数量是？A.3个（中心+四角任选2个）B.5个（中心+四角）C.7个（中心+上下左右前后）D.9个（3×3矩阵）答案：B19.核酸检测实验室医疗废物处理时，感染性废物的包装应使用？A.黄色医疗废物袋，双层包装B.黑色普通垃圾袋，单层包装C.红色危险废物袋，单层包装D.蓝色可回收袋，双层包装答案：A20.实时荧光PCR实验中，基线范围通常设定为？A.1-3循环B.3-15循环C.15-30循环D.30-40循环答案：B21.下列关于引物二聚体的描述中，正确的是？A.会导致Ct值假性降低B.扩增曲线呈典型S型C.溶解曲线显示单一峰D.可通过提高退火温度减少答案：D22.核酸提取过程中，75%乙醇洗涤的主要目的是？A.裂解细胞B.沉淀核酸C.去除盐离子和杂质D.灭活病毒答案：C23.PCR实验室人员培训的重点内容不包括？A.生物安全法律法规B.仪器操作SOPC.实验室管理体系文件D.临床疾病诊断知识答案：D24.检测结果出现“N基因阳性，ORF1ab基因阴性”时，正确的处理方式是？A.报告阳性B.报告阴性C.重新检测并核查试剂有效性D.稀释样本后复检答案：C25.扩增仪升降温速率的验证应使用？A.实时温度计B.温度验证仪（如FLUKE）C.水银温度计D.红外测温枪答案：B26.核酸检测室内质控的要求是？A.每批次检测至少1份阳性对照B.每批次检测至少1份阴性对照C.阳性对照Ct值应在均值±2范围内D.阴性对照允许出现微弱荧光信号答案：C27.样本接收时发现溶血，可能对检测结果的影响是？A.无影响B.导致假阳性C.抑制PCR反应D.提高检测灵敏度答案：C28.下列关于PCR试剂保存的描述中，错误的是？A.酶类试剂应-20℃保存B.荧光探针应避光保存C.缓冲液可在4℃长期保存D.解冻后的试剂应避免反复冻融答案：C29.实验室发生扩增产物泄漏时，应急处理措施不包括？A.立即停止实验B.使用75%乙醇擦拭污染区域C.用含1000mg/L有效氯的消毒液覆盖30分钟D.记录污染事件及处理过程答案：B30.评价PCR检测方法精密度的指标是？A.准确率B.重复性（CV值）C.特异性D.灵敏度答案：B二、多项选择题（每题3分，共10题，计30分，少选得1分，错选不得分）1.核酸PCR实验室必须设置的功能区域包括？A.样本处理区B.试剂准备区C.扩增区D.产物分析区答案：ABCD2.导致PCR实验污染的可能原因包括？A.移液器未定期校准B.实验室气流方向错误C.使用带滤芯吸头D.扩增产物开盖操作答案：ABD3.实时荧光PCR实验中，需要记录的关键信息包括？A.样本编号B.试剂批次C.扩增仪型号D.操作人员姓名答案：ABCD4.核酸提取质量的评价指标有？A.浓度（OD260）B.纯度（OD260/280）C.完整性（电泳条带）D.扩增效率（内参Ct值）答案：ABCD5.PCR实验室生物安全防护的要求包括？A.穿防护服、戴手套B.样本处理在生物安全柜内进行C.实验结束后消毒台面D.废弃标本按感染性废物处理答案：ABCD6.影响PCR扩增效率的因素有？A.模板浓度B.引物退火温度C.镁离子浓度D.循环次数答案：ABC7.新型冠状病毒核酸检测结果判读的注意事项包括？A.阴性结果需结合临床综合判断B.阳性结果需复核原样本C.临界值样本需重复检测D.内参阴性提示检测无效答案：ABCD8.扩增仪日常维护内容包括？A.清洁反应槽B.校准荧光通道C.检查加热模块D.更换风扇滤网答案：ACD9.核酸检测实验室质量控制的关键环节包括？A.样本采集与运输B.核酸提取效率C.扩增反应体系配制D.结果审核与报告答案：ABCD10.下列关于PCR引物设计的原则中，正确的是？A.避免引物内部形成二级结构B.引物之间避免互补配对C.靶序列选择保守区域D.引物长度越长特异性越高答案：ABC三、判断题（每题1分，共10题，计10分）1.PCR实验室各区域可共用一套实验仪器。（×）2.核酸提取时，磁珠残留会影响扩增效率。（√）3.阳性对照可以使用临床阳性样本替代。（×）4.扩增仪温度偏差±1℃不会影响检测结果。（×）5.实验室空气消毒可使用紫外线灯或过氧化氢汽化。（√）6.样本保存超过有效期后，可通过延长提取时间补救。（×）7.荧光探针降解会导致检测灵敏度下降。（√）8.实验记录只需保存电子版本。（×）9.移液器校准周期为6个月。（√）10.出现假阳性结果时，应首先排查扩增产物污染。（√）四、简答题（每题10分，共5题，计50分）1.简述PCR实验室分区管理的核心要求及各区域的主要功能。答：核心要求：严格分区、单向流动、物理隔离。四个功能区：①试剂准备区：进行PCR反应体系的配制，需避免外来核酸污染，配备超净工作台；②样本处理区：完成样本接收、核酸提取，需生物安全柜，防止样本间交叉污染；③扩增区：进行PCR扩增反应，需专用扩增仪，避免产物污染前区；④产物分析区：分析扩增结果（如电泳或荧光检测），是污染风险最高区域，严禁与前区物品交叉使用。各区物品专用，人员按试剂准备区→样本处理区→扩增区→产物分析区单向流动，空气压力梯度为前区高于后区（≥10Pa）。2.列举5项PCR实验中常见的质量控制措施，并说明其意义。答：①阴阳性对照设置：阴性对照（无模板水）监控试剂污染，阳性对照（已知阳性样本）验证扩增有效性；②内参基因检测：监控核酸提取效率，排除假阴性（如提取失败导致的靶基因未检出）；③扩增仪温度校准：确保各孔温度一致性，避免因温度偏差导致扩增效率差异；④试剂批间验证：不同批次试剂使用前需与当前批次比对，保证检测结果一致性；⑤重复实验：对临界值样本或可疑结果重复检测，减少随机误差。3.简述新型冠状病毒核酸检测中“假阴性”结果的可能原因及预防措施。答：可能原因：①样本采集不规范（如咽拭子未触及咽后壁）；②样本保存不当（运输温度过高导致核酸降解）；③核酸提取效率低（磁珠吸附不充分或洗涤过度）；④扩增反应抑制（样本中存在PCR抑制剂如血红蛋白、肝素）；⑤引物/探针与病毒变异株不匹配（如病毒基因发生突变）。预防措施：规范采样操作（培训采样人员）、使用专用保存液（如病毒保存液）、优化提取参数（调整磁珠用量和洗涤次数）、添加内参基因监控提取过程、定期更新引物探针（根据病毒变异株调整）。4.说明实时荧光PCR实验中“扩增曲线异常”的常见类型及可能原因。答：常见类型及原因：①无扩增曲线（Ct值无）：模板浓度过低（低于检测限）、引物/探针失效、扩增仪荧光通道故障；②扩增曲线呈“平台期缺失”：模板浓度过高（超过线性范围）、dNTP或酶量不足；③扩增曲线“拖尾”（非特异性扩增）：引物二聚体形成（退火温度过低）、Mg²+浓度过高；④扩增曲线“跳跃”（基线期荧光波动）：反应体系中有气泡（影响荧光信号）、扩增仪孔位污染；⑤阴性对照出现扩增（假阳性）：扩增产物气溶胶污染、移液器交叉污染、试剂被污染。5.阐述PCR实验室生物安全管理的主要内容。答：主要内容包括：①人员防护：实验人员需穿戴防护服、N95口罩、护目镜、双层手套，样本处理在生物安全柜（Ⅱ级）内进行；②样本管理：样本接收时核对信息，运输使用专用密封容器（符合UN3373标准），保存按《病原微生物实验室生物安全管理条例》要求；③废物处理：感染性废物（如样本管、吸头）使用双层黄色医疗废物袋包装，高压蒸汽灭菌（121℃，30分钟）后按医疗废物处理；④环境消毒：实验结束后用1000mg/L有效氯消毒液擦拭台面，空气消毒使用紫外线灯（≥30分钟）或过氧化氢汽化；⑤应急预案：制定泄漏处理流程（如泼洒时用消毒液覆盖30分钟后清理）、职业暴露处理（如黏膜接触样本时立即用生理盐水冲洗）；⑥培训与准入：人员需通过生物安全培训考核，掌握《实验室生物安全通用要求》（GB19489）。五、案例分析题（20分）某实验室开展新型冠状病毒核酸检测时，连续3批次实验出现以下情况：①阴性对照Ct值为32（正常应无扩增）；②部分临床样本Ct值较前批次升高2-3个循环；③扩增仪温度验证显示反应槽边缘孔位温度比设定值低1.5℃。问题：1.分析上述异常现象的可能原因。（10分）2.提出针对性的解决措施。（10分）答案：1.可能原因分析：①阴性对照出现扩增（Ct=32）：最可能原因为扩增产物气溶胶污染（如产物分析区与前区气流交叉、开盖操作未在生物安全柜内进行）；其次可能是试剂被污染（如配制体系时使用了被扩增产物污染的移液器）。②样本Ct值升高：提示扩增效率下降，可能原因包括核酸提取效率降低（如磁珠失效或洗涤过度）、扩增试剂效价下降（如酶活性降低）、扩增仪温度偏差（边缘孔温度偏低导致退火不充分，延长扩增时间）。③扩增仪边缘孔温度偏低：说明仪器温度均匀性下降，可能是加热模块老化、风扇故障导致散热不均，或未定期进行温度校准。2.解决措施：①针对污染问题：立即停止实验，对实验室进行全面消毒（过氧化氢汽化或紫外线照射4小时）；更换移液器滤芯，使用新批次试剂；检查实验室压差（确保前区压力高于后区≥10Pa），调整通风系统；产物分析区操作时需在生物安全柜内进行，避免开盖。②针对Ct值升高