【《文冠果根腐病病原鉴定及根腐病防控药剂筛选研究》开题报告2700字】

PAGE开题报告论文题目文冠果根腐病病原鉴定及根腐病防控药剂筛选研究1.立题依据（包括研究背景、理论依据及立题意义）2019年6月在文冠果根腐病在新疆阿克苏地区的沙雅县、昌吉州木垒县和新疆林科院院内的文冠果苗圃内严重发生，造成近20%文冠果苗木枯萎，同时也造成在周边少数的成龄树枯死，严重威胁新疆文冠果产业的健康发展。该根腐病害主要及次要致病病原菌是什么？该病原菌主要生物学特性是怎样的？病原菌生长条件与环境间关系如何？如何有效防控该根腐病害？这些学术研究对农业生产实践又有着及其重要的作用，也是促使我们对该根腐病着手相关研究。本研究主要针对文冠果根腐病相关病根、土壤进行分离纯化获得疑似病原物，准确鉴定文冠果根腐病的致病病原种类，并对其开展主要生物学特性研究，最后筛选出抑菌效果明显的高效防控药剂2-3种，为田间大面积防控提供备选药剂。目前，国内外尚未见有关文冠果根腐并病原菌鉴定、生物学特性和药剂筛选等方面相关研究报道，本研究将从上述研究中依次展开，为进一步了解文冠果根腐病侵染规律与快速蔓延关键因子以及开展综合防控措施奠定基础。因此，本研究通过明确文冠果根腐病致病病原菌，以及该病原菌主要生物学特性并筛选出有效的防控药剂，在此基础上建立并完善科学防病技术及封锁防控关键技术体系，对确保新疆文冠果产业的安全具有重要意义。2.研究内容及方案（包括研究目标、论文提纲、预期达到的研究结果和创新点、完成论文需具备的条件以及参考文献等）.研究目标：（1）采用感病组织常规分离技术、诱饵法（分离腐霉菌）、稀释土壤平板法分离纯化病原菌，并获取疑似病原菌，并进行致病性试验、形态学鉴定及分子生物学鉴定相结合的方法，准确鉴定文冠果根腐病致病病原菌，明确病原种类和分类地位。（2）通过在不同类型培养基、不同温度、不同pH条件下，对该病害致病病原菌进行生物学特性研究，明确病原菌的主要生物学特性，为病害发生条件和规律，以及为病害制定有效防控策略奠定基础。（3）通过室内毒力测定实验，筛选出可有效防治文冠果根腐病药剂，为田间有效防控提供预选药剂。论文提纲：第1章前言第2章文冠果根腐病病原分离与鉴定2.1材料与方法2.1.1供试材料实验样品采集学院种植园发生的文冠果根腐病根部病样和病株周围土壤样本，采土深度为5-10厘米，用无菌自封袋中备用。所有采集样品置于4℃冰箱保存2.1.2供试培养基马铃薯葡萄糖培养基（PDA）:土豆200g、葡萄糖20g、琼脂粉20g、蒸馏水1000ml、121℃高压灭菌锅20min、P5ARP[85]:匹马霉素5ppm、利福平10ppm、氨苄青霉素250ppm、五氯硝基苯100ppm2.1.3仪器及试剂镊子，灭菌滤纸，电磁炉，解剖刀，上皿电子天平，高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，刀片，电磁炉，光学显微镜，冰箱，微波炉，温度计，智能人工气候箱，恒压恒流电泳仪（keebio-600N），PCR扩增仪（T100ThermalCycler），电泳图像分析系统（FR-980B），高速冷冻离心机（TGL-16），马克笔，接种针，火柴，一次性培养皿（Φ=90mm），试管，酒精灯，打孔器，移液枪，液氮，75%乙醇，1%-2%次氯酸钠溶液，DNAsecure新型植物基因DNA提取试剂盒（TIANGEN）2.1.4病原菌的分离植物中的分离参考方中达《植病研究方法》植物组织分离法，土壤中的分离采用诱饵法和稀释土壤平板法相结合分离土壤中腐霉菌和相关病原菌2.1.5病原菌的纯化取多个菌落，在超净工作台中，采用尖端菌丝挑取法进一步纯化2.1.6病原菌致病性实验通过柯赫氏法则对病原菌进行致病性检测，采用健康大小均匀文冠果植株，进行致病性验证2.1.7病原菌传统形态学观察将所纯化的4种菌株分别取3个代表菌株接种至PDA平板上，25℃培养1-5d后观察分离菌株的形态特征。根据《真菌鉴定手册》、赵思峰和从丽丽等的描述进行检索、观察菌落形态及孢子等形态，进行初步形态学鉴2.1.8病原菌分子生物学鉴定病原菌DNA提取将分离纯化后的菌株接种在PDA平板上25℃条件下培养5-7天，刮取菌丝；病原菌PCR扩增和序列分析采用常规PCR，对所提取的腐霉DNA进行rDNA-ITS、β-tubulin、coxⅡ序列的扩增，2.2结果与分析2.2.1田间病害症状描述与观察2.2.2病原菌的分离和纯化2.2.3病原菌致病性检测2.2.4病原菌形态学鉴定2.2.5病原菌分子生物学鉴定第3章文冠果根腐病防控药剂筛选3.1材料与方法3.1.1供试菌株供试菌株：XJ-PA、XJ-FP、XJ-FR、XF-FS，实验样品采集于学院种植园发生的文冠果根腐病根部病样和病株周围土壤样品中分离纯化获得。3.1.2培养基含药PDA培养基：将不同浓度药剂与熔化并冷却至40℃的PDA培养基按1∶9比例(总体积10mL)配制成含药培养基。3.1.3供试药剂结合当前农林生产种防治作物根腐类的常用药剂，筛选出12种供试药剂3.1.412种杀菌剂对病原菌的抑菌效果将菌株XJ-PA、XJ-FP、XJ-FR、XF-FS在PDA培养基上培养24h、5d后用直径为5mm的无菌打孔器打取菌落。将各供试药剂分别以推荐使用浓度为参考，通过稀释分别从高到低设置8个药剂浓度梯度。3.2结果与分析3.2.112种杀菌剂对4种病原菌的抑菌效果3.3小结与讨论第4章结论预期达到的研究结果：筛选出相关常用药剂，并通过室内毒力测定实验，筛选出可有效防控文冠果根腐病的药剂。为今后进一步开展文冠果根腐病的研究工作和建立病害防控防治体系提供相应的理论依据论文需具备的条件：实验样品采集于阿克苏地区沙雅县、昌吉州木垒县和新疆林业科学院种植园发生的文冠果根腐病根部病样和病株周围土壤样本，采土深度为5-10厘米，用无菌自封袋中备用。所有采集样品置于4℃冰箱保存。参考文献[1]高俊臣,张帅,王艳兵.文冠果“根腐”难题研究进展[J].山西林业,2019(02):32-33.[2]闫强,丁佩,张勤雪,等.绿豆根腐病病原菌分离和致病力鉴定[J].江苏农业科学,2021,49(06):86-92.[3]沈宝宇,孙文松,张天静,等.白鲜根腐病病原菌分离与鉴定[J].分子植物育种,2021,1-14.[4]骆丹,田慧,张彩霞,方香玲.植物立枯丝核菌根腐病研究进展[J].中国植保导刊,2020,40(03):23-31.[5]张丙红.文冠果颈腐病病原菌的分离鉴定[D].山东农业大学,2021.[6]李瑞,张瑞,梁鸡保,等.不同来源文冠果成品苗造林表现[J].北方果树,2020(03):19-20.[7]柳晓东.辽西地区文冠果造林关键技术[J].现代农业科技,2020(09):153+157.[8]李永德,罗广军.浅析文冠果的经济价值及效益[J].现代园艺,2022,45(01):48-49.[9]宋美华,梁宝银,王茹,等.不同处理方法对文冠果大田播种出苗率和苗期生长的影响[J].西部林业科学,2021,50(04):41-45+59.[10]赵晓姝.文冠果栽培技术及其价值分析[J].种子科技,2018,36(12):59+61.[11]刘玉兰,郭莹莹.不同产地原料和不同工艺制取文冠果油的综合品质研究[J].粮食与油脂,2020,33(06):1-6.[12]卢凯,齐军山,祁凯,等.大豆根腐病腐霉病原鉴定[J].中国油料作物学报,2021:1-7.[13]谢安娜,徐浩飞,张志林,等.致病镰刀菌的研究进展[J].湖北工程学院学报,2020,40(06):37-41.[14]伍晓丽,