2025年大学生物技术（基因克隆）试题及答案

2025年大学生物技术（基因克隆）试题及答案

（考试时间：90分钟满分100分）班级______姓名______第I卷（选择题，共40分）每题2分，每题只有一个选项符合题意，请将正确答案的序号填在括号内。1.基因克隆的核心步骤是（）A.目的基因的获取B.载体的选择C.重组DNA的构建D.重组DNA导入受体细胞2.以下哪种方法常用于从基因组文库中筛选目的基因（）A.核酸分子杂交B.聚合酶链式反应C.蛋白质免疫印迹D.双向凝胶电泳3.限制性核酸内切酶切割DNA后产生的末端类型不包括（）A.黏性末端B.平末端C.5'突出末端D.3'凹陷末端4.作为基因克隆载体的条件不包括（）A.具有多个限制酶切割位点B.具有筛选标记基因C.能自我复制D.能整合到宿主染色体上5.以下关于PCR技术的叙述，错误的是（）A.需要模板DNAB.需要引物C.需要DNA聚合酶D.反应体系中不需要dNTP6.基因克隆中常用的DNA连接酶是（）A.DNA聚合酶IB.DNA聚合酶IIIC.T4DNA连接酶D.逆转录酶7.从cDNA文库中获取的基因是（）A.基因组DNAB.编码蛋白质的基因C.调控序列D.内含子8.蓝白斑筛选法中，白色菌落表示（）A.含有重组质粒B.含有非重组质粒C.含有目的基因D.不含任何质粒9.以下哪种技术可用于鉴定重组DNA分子（）A.限制性内切酶酶切分析B.核酸序列分析C.蛋白质电泳D.细胞培养10.基因克隆中，感受态细胞的制备常用的方法是（）A.氯化钙法B.电击法C.脂质体转染法D.显微注射法11.以下关于载体的叙述，正确的是（）A.质粒是最常用的载体B.病毒载体只能用于动物细胞C.人工染色体载体不能在宿主细胞中复制D.载体的大小对基因克隆没有影响12.基因克隆中，引物设计的原则不包括（）A.长度一般为15-30bpB.碱基分布均匀C.引物自身不能形成互补配对D..引物之间可以大量互补配对13.以下哪种方法可用于扩增特定长度的DNA片段（）A.基因组文库筛选B.cDNA文库筛选C.PCRD.核酸分子杂交14.基因克隆中，重组DNA导入受体细胞后，筛选阳性克隆的方法不包括（）A.抗生素筛选B.蓝白斑筛选C.核酸序列分析D.酶切鉴定15.以下关于基因克隆的应用，错误的是（）A.生产基因工程药物B.基因治疗C.物种进化研究D.改变生物的遗传物质第II卷（非选择题，共60分）16.（10分）简述基因克隆的基本流程。17.（10分）请阐述PCR技术的原理及主要步骤。18.（10分）在基因克隆中，如何选择合适的载体和受体细胞？19.（15分）阅读以下材料：在基因克隆实验中，研究人员欲克隆某一特定基因。首先从生物样本中提取总RNA，然后反转录合成cDNA。以cDNA为模板，设计特异性引物进行PCR扩增，得到目的基因片段。将目的基因片段与载体连接构建重组DNA，再导入大肠杆菌感受态细胞。通过蓝白斑筛选，挑取白色菌落进行培养，提取质粒后进行酶切鉴定，确定阳性克隆。问题：（1）该实验中反转录合成cDNA的目的是什么？（2）PCR扩增目的基因时，设计特异性引物的依据是什么？（3）蓝白斑筛选的原理是什么？20.（15分）阅读以下材料：某研究团队致力于克隆一种植物的抗病基因。他们从感染病菌的植物组织中提取DNA，构建基因组文库。通过核酸分子杂交技术，利用已知的抗病基因探针筛选出含有目的基因的克隆。将目的基因与合适的载体连接，导入植物细胞，经过筛选和鉴定，获得了转基因抗病植株。问题：（1）构建基因组文库的目的是什么？（2）核酸分子杂交筛选目的基因的原理是什么？（3）如何鉴定获得的转基因抗病植株是否成功克隆了抗病基因？答案：1.C2.A3.D4.D5.D6.C7.B8.A9.A10.A11.A12.D13.C14.C15.D16.基因克隆基本流程：首先获取目的基因，可从生物基因组中直接分离、通过PCR扩增或从cDNA文库、基因组文库中筛选。然后选择合适载体，如质粒、噬菌体等，使其与目的基因连接构建重组DNA。接着将重组DNA导入受体细胞，如大肠杆菌等。再通过筛选标记筛选出含有重组DNA的细胞，最后对筛选出的阳性克隆进行鉴定和分析。17.PCR技术原理：以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5'末端和3'末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。主要步骤：变性，高温使模板DNA双链解开；退火，引物与模板单链互补结合；延伸，DNA聚合酶催化dNTP合成新的DNA链。18.选择载体依据：有多个限制酶切割位点便于插入目的基因；有筛选标记基因便于筛选阳性克隆；能在宿主细胞中稳定自我复制。选择受体细胞依据：能高效摄取外源DNA；对载体的复制和扩增无严格限制；便于重组DNA导入和筛选；遗传稳定性好，便于长期传代保存。19.（1）反转录合成cDNA目的是将生物样本中的mRNA转化为DNA，去除内含子等非编码序列，获得可用于PCR扩增的目的基因编码序列。（2）设计特异性引物依据是目的基因的已知序列，使引物能与目的基因两端特异性结合。（3）蓝白斑筛选原理：载体上有一段LacZ基因，当插入目的基因后LacZ基因失活。含重组质粒的菌在含X-gal的培养基上形成白色菌落，含非重组质粒的菌形成蓝色菌落。20.（1）构建基因组文库目的是将植物的整个基因组DNA切割成片段，与载体连接后导入受体菌，形成包含所有基因的文库，便于从中筛选目的基因。（2）核酸分子杂交筛