2025版食品中亚硝酸盐与硝酸盐测定培训

2025版食品中亚硝酸盐与硝酸盐测定培训法法法法第三法连续流动分析第三法连续流动分析-分光光度法附录内容简介方法选择与注意事项附录内容简介标准名称与编号标准全称为《食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》，标准编号为GB5009.33—2025。发布与实施日期该标准于2025年9月2日发布，2026年3月2日正式实施。发布单位由中华人民共和国国家卫生健康委员会和国家市场监督管理总局联合发布。标准重要性与适用领域作为食品安全国家标准，规定了食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定方法，适用于多种食品类型，为保障食品安全提供了重要依据。第一法、第二法的样品前处理方法均有修改，优化了样品提取和净化过程，提升检测准确性。新增检测方法第一法、第二法的样品前处理方法均有修改，优化了样品提取和净化过程，提升检测准确性。增加连续流动分析-分光光度法作为第三法，将原第三法调整为第四法，丰富了检测手段。检出限和定量限更新修改了方法的检出限和定量限，提高了方法的灵敏度和检测精度，满足更严格的检测需求。标准溶液配制与还原效率计算调整检出限和定量限更新修改了方法的检出限和定量限，提高了方法的灵敏度和检测精度，满足更严格的检测需求。第二法修改了标准溶液的配制方法和还原效率的计算方法，使实验操本标准规定了食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定方法，涵盖不同类型食品的检测需求，各方法根据食品特性和检测目标设置适用范围。标准包含四种测定方法，其中第二法和第三法适用于各类食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定，第一法和第四法则针对特定食品类别设置限制条件。第一法（离子色谱法）适用对象适用于除乳蛋白部分水解配方、乳蛋白深度水解配方、氨基酸配方及氨基酸代谢障碍配方的特殊医学用途配方食第二法（分光光度法）与第三法（连续流动分析-分光光度法）适二者均适用于所有食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定，无特殊类别限制，具有广泛适用性。专门适用于新鲜蔬菜、水果中硝酸盐的测定，针对此类样品基质特点优化检测流程。离子色谱法测定原理试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，提取净化，以氢氧化钾或氢氧化钠溶液为淋洗液，经阴离子交换柱分离，电导或紫外检测器检测，通过保留时间定性，试剂纯度与水要求除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水；关键试剂如乙酸需色谱纯。主要试剂种类包括乙酸、氢氧化钾、氢氧化钠、α-淀粉酶（酶活力≥1.5U/mg）等；需配制乙酸溶液（3%）、氢氧化钾溶液（1mol/L）、氢氧化钠溶液（1mol/L）标准品信息亚硝酸钠标准品（CAS号：7632-00-0，纯度≥99%）、硝酸钠标准品（CAS号：7631-99-4，纯度≥99%或经国家认证的标准物质。离子色谱仪（配电导检测器及抑制器或紫外检测器）、食物粉碎机、超声波清洗器、电子天平（感量0.1mg和0.01g）、离心机（转速≥10000r/min）。液体/半固体样品搅拌混匀，固体粉状样品振摇混匀，干酪研磨成泥浆状；易腐试样（水果、蔬菜等）-18℃及以下保存，其他样品按产品贮存条件保存。乳及乳制品等：称样后加水超声30min，加3%乙酸沉淀蛋白，定容后离心；高淀粉样品：加α-淀粉酶55℃酶解30min后同上述操作；其他样品：加水超声提取30min，75℃水浴5min后处取备用溶液经0.22μm滤膜、C18柱净化（氯离子高时加Ag柱和Na柱）；色谱柱用氢氧化物选择性阴离子交换柱，淋洗液浓度6-70mmol/L，流速1.0mL/min，进样体积50μL，绘制标准曲线并测定试样。），），），），<1.00mg/kg时保留2位有效数在重复性条件下，两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。液体样品（称样量10液体样品（称样量10g时）0.05mg/kg，其他样品（称样量5液体样品（称样量10液体样品（称样量10g时）0.1mg/kg，其他样品（称样量5g时）0.2mg/kg。液体样品（称样量10液体样品（称样量10g时）0.1mg/kg，其他样品（称样量5g时）0.2mg/kg。液体样品（称样量10液体样品（称样量10g时）0.2mg/kg，其他样品（称样量5g时）0.4mg/kg。分光光度法测定原理化合物，于538nm处测吸光度定量亚硝氨缓冲溶液（pH9.6-9.7）：量取30mL盐酸，加500mL水，混匀后加65mL氨水调pH，稀释至1000mL，避光保存；氨缓冲溶液稀释液：取50mL氨缓冲溶液加水稀释至500mL，）：加热溶解后棕色瓶2-6℃避光保存，有）：亚铁氰化钾溶液（106g/L）：106g三水亚铁氰化钾加水溶解并稀释至1000mL；乙酸锌溶液（220g/L）：220g二水乙酸锌加30mL冰乙酸和500mL水溶解，冷却后稀释至1000mL。电子天平（感量0.1mg和0.01g）、组织捣碎机/研磨仪、超声波清洗器、恒温干燥箱（控温±2℃)、恒温水浴锅、分光光度计、镉柱装置（含镉粒或自制镉粒，需测定还原效率）。称取试样（液体45-90g，固体1-10g加硼酸钠溶液和70℃水，沸水浴加热吸取40mL滤液于50mL比色管，加2mL对氨基苯磺酸溶液，静置3-5min，加1mL盐酸萘乙二胺溶液，加水定容，静置15min；以0mg/L亚硝酸钠标准溶液调零，1cm比色皿于538nm处测吸光度，与标准曲线比对定量。镉柱还原：25mL氨缓冲溶液稀释液冲洗镉柱（流速3-5mL/min），取20mL滤液加10mL氨缓冲溶液，流经镉柱还原，用水冲洗并定容至100mL；亚硝酸盐总量测定：吸取10-20mL还原液按亚硝酸盐测定步骤操作，总量减去亚硝酸盐含量得硝酸盐含量。（m1×V1/V₀)。其中ρ1为测定用样液中亚硝酸盐质量浓度（mg/L），V），），液体积（mL），V₀为试样处理液总）；3位有效数字1.00mg/kg保留2位。硝酸盐含量计算硝酸盐含量计算），）；结果保留位数同亚硝酸盐。在重复性条件下，两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。亚硝酸盐检出限：液体样品（称样90g）0.02mg/kg，其他样品（称样5g）0.3mg/kg；定量限：液体0.06mg/kg，其他1mg/kg。硝酸盐检出限：液体0.2mg/kg，其他3mg/kg；定量限：液体0.6mg/kg，其他10mg/kg。二胺偶合形成紫红色化合物，于硝酸盐经镉还原成亚硝酸盐后测得总量，差值计算硝酸盐含量。包括三水亚铁氰化钾、二水乙酸锌、硼酸钠、磺胺、盐酸萘乙二胺等，除另有规定外均为分析纯；水为GB/T6682规定的三级水。亚硝酸钠（CAS：7632-00-0）、硝连续流动分析仪含化学反应单元、保进样器初始化正常、蠕动泵转动平热、沉淀蛋白质（亚铁氰化钾-乙酸开机后用三级水、氯化铵缓冲溶液冲洗流路；标准曲线绘制采用0-酸盐系列标准液，试样测定时每10检验（硝酸盐标准液回收率应亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）：X1=(ρ1-ρ0））：重复性条件下两次独立测定结果绝对差值不得超过算术亚硝酸盐：液体样品0.02mg/kg（称样90g每批次样品检测后需验证硝酸盐标准液还原效率，若含量降低10%以上需更换镉柱/镉圈；不同仪器按说明书紫外分光光度法测定原理紫外分光光度法测定原理利用硝酸根离子在紫外区219nm处的特征吸收，经氨缓冲液提取、沉淀剂去除干扰后，测定吸光度。因新鲜蔬果中亚硝酸盐含量极低可忽略，结果直接反映硝酸盐含量。氨缓冲液配制氨缓冲液配制量取20mL盐酸溶于500mL水，加50mL氨水调pH至9.6-9.7，定容至1000mL。用于提取样品中硝酸根离子并维持碱性环境。沉淀剂与材料要求沉淀剂与材料要求150g/L亚铁氰化钾溶液、300g/L硫酸锌溶液用于沉淀蛋白质；粉状活性炭用于脱色；水为GB/T6682一级水，试剂均为紫外分光光度计（配1cm石英比色皿）、电子天平（感量0.1mg和0.01g）、组织捣碎机、可调式往返振荡机（200次/min）、pH计（精度样品洗净晾干后匀浆（少汁样品可加水），称取10g匀浆加100mL水、5mL氨缓冲液、2g活性炭，振荡30min。加2mL亚铁氰化钾和2mL硫酸锌溶液，定容至250mL，过滤取吸取2-10mL滤液定容至50mL，于219nm处测吸光度。标准曲线用0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.0、12.0mg/L硝酸钠溶液绘制，以浓度为横坐标、吸光度为纵坐标。硝酸盐含量计算公式X=(硝酸盐含量计算公式X=(ρ×V1×V3×1000）/（m×V2V1为提取液定容体积（250mL），V2），），精密度要求重复性条件下两次独立测定结果绝对差值不得超过算术平均值的精密度要求重复性条件下两次独立测定结果绝对差值不得超过算术平均值的10%，确保检测数检出限与定量限检出限与定量限4.0mg/kg，适用于新鲜蔬菜、水果中硝酸盐的快速检测，满足日常质量控制需求。附录A提供亚硝酸盐和硝酸盐混合标准溶液的色谱图，包括紫外检测器（图A.1）和电导检测器（图A.2）两种检测模式下的分离效果，用于定性分析时保留时通过锌片与硫酸镉溶液（40g/L）反应生成海绵状镉，经盐酸溶液（0.1mol/L）搅拌控制粒径（0.3mm~0.8mm），静置3h~4h去除气泡，制得基础镉粒。镉粒经盐酸溶液（2mol/L）活化后，加入硫酸铜溶液（20g/L，每克镉粒约需2.5mL）振荡1min，水洗至无铜沉淀，形成均匀铜镀层以增强还原效率。玻璃管内依次装入2cm高玻璃棉（排尽空气）、8cm~10cm或15cm~20cm海绵状镉粒、1cm高玻璃棉覆盖，通过敲击避免气泡，装置分带贮液漏斗（图B.1b）和常规型取20.0mL硝酸钠标准使用液（5.00mg/L），经镉柱还原后定容至100mL，取10.0mL按分光光度法测亚硝酸盐浓度，还原效率需大于95%，计算公式见式（C.1）。若还原率＜95%，将镉粒用盐酸溶液（2mol/L）振荡处理，水洗后重新装填镉柱，确保硝酸盐还原步骤的准确项殊医学用途）仅适用第一法；新鲜蔬菜、水果中硝酸盐测定适用第四法；其他食品可选第二法或连续流动分析-分光光度法（第三法）自动化程度高，适用于批量样品快速检测；分光光度法（第二法）操作简便，适合实验室常（亚硝酸盐0.05mg/kg，硝酸盐）