检验检测机构流感病毒样本安全管理

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人2025年12月16日流感病毒样本安全管理概述样本运输与接收管理样本采集规范与质量控制样本处理与检测安全操作CONTENTS目

录02040103样本保存与毒株管理质量控制与应急管理生物安全防护体系建设CONTENTS目录05070601流感病毒样本安全管理概述保障检测结果准确性的基石样本管理的规范操作直接影响流感病毒检测结果的准确

性，如规范的采集、保存和运输能有效避免因样本质量问题导致的假阴性或假阳性结果，确保实验室数据可靠。流行病学监测与防控决策的关键支撑规范管理的流感病毒样本及其相关信息，是开展病毒变

异监测、流行趋势分析和疫苗研发的基础数据来源，为

制定科学有效的流感防控策略和临床治疗方案提供关键

依

据

。防止病毒扩散与生物安全的核心环节流感病毒具有传染性，样本管理不当可能导致实验室感

染或病毒泄露。严格的样本管理流程，包括生物安全防

护、灭活处理和规范运输，是防止病毒扩散、保障实验

室及公共卫生安全的核心。国家及地方标准的明确要求流感病毒样本管理需严格遵循国家及地方相关法规与标

准，如《江西省地方标准

DB36/T2025—2024流感网

络实验室管理规范》及国家流感中心标准操作规程等，

确保各项操作有章可循、合规合法。流感病毒样本管理的重要性与法规依据02040103相关标准与规范体系框架国家层面核心标准行业技术操作指南

地方实施细则补充

生物安全专项规范针对流感病毒操作的

生物安全，明确诊断

性实验在BSL-2实验室、病毒分离培养在

BSL-3实验室进行，个人防护需达到相应

级别，并遵循世界卫

生组织《实验室生物

安全手册(第三版)》

推荐方案。国家流感中心发布《标准操作规程(修订版)》,涵盖标本

采集、病毒分离(如

MDCK细胞培养、鸡胚

接种)、核酸检测(RT-PCR

、Real-time

PCR)

等关键技

术的详细步骤与质量

控制标准。以江西省《流感网络

实验室管理规范(DB36/T

2025—2024)》为例，细化

了网络实验室工作职

责、样本管理流程(采集、处理、运输)

及毒株保存、销毁记

录等区域性管理要求。依据《中华人民共和

国传染病防治法》及

《实验室生物安全通用要求

(GB1989-2004)》,明确流感

病毒检测的生物安全

底线，规定了实验室

分级、个人防护及操

作规范等基础要求。风险等级核心差异BSL-2主要针对样本的初步检测和诊

断

，BSL-3则针对病毒的分离培养等

高风险操作，两者在设施要求、防护

级别和操作规范上有显著区别。BSL-2实验室适用范围适用于流感疑似病例临床标本的诊断

性实验工作，所有样本操作均应在生

物安全柜内进行，并遵循生物安全三级个人防护。BSL-3实验室适用范围用于流感病毒分离培养工作，需在BSL-3实验室内进行，并严格遵循生

物安全三级个人防护要求，以应对更高的感染风险。实验室生物安全风险等级划分02样本采集规范与质量控制重点采样对象主要针对甲型H1N1流感疑似病例，

包括发热、咳嗽、喉咙痛等症状

者；密切接触者也应采样以排除

传播风险。采样频率建议对于持续发热或症状加重者，建

议每3-5天采集一次样本，连续

采集3-5次，以便观察病毒载量

变化和治疗效果。最佳采样时机疑似病例出现症状后48小时内采集，以获取最佳病毒载量；重症

患者尽可能在发病初期采集样本。采样时机与对象选择要求鼻咽拭子采集规范使用合成纤维拭子(如聚酯纤维),避免棉拭子

和木柄。将拭子轻轻插入鼻腔深处至鼻甲(离鼻

孔约2.0cm～2.5cm),

贴鼻腔壁旋转3次后取出，

立即置于含3ml病毒保存液的采样管中。采集前注意事项采样前30分钟内避免进食、饮水、漱口。告知患

者采样流程，指导配合发“噢”声(咽拭子)或

保持头部稳定(鼻咽拭子),减少操作不适感。咽拭子采集规范用无菌拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，避免触及舌部，旋转3-5次后将拭子头部浸入病毒保存液。

确保采集到足够分泌物，采样过程严格无菌操作

防污染。采集后处理要求采样后立即旋紧采样管盖子，检查密封性。标签

注明患者信息、采样日期、样本类型，置于冰袋

或4℃冰箱保存，24小时内送检；如需延迟检测，应-70℃冷冻保存。鼻咽拭子与咽拭子采集操作指南采样时机选择应在疑似病例出现症状后的48小时内

采集样本，以获取最佳病毒载量。发

病时间超过48小时可能导致病毒数量

减少，影响检测灵敏度。采样前准备与患者配合采样前30分钟内患者应避免进食、饮

水。对于咽喉分泌物采集，应指导患

者发“噢”声以暴露咽后壁；痰液采

集需确保为深部咳出的第一

口痰液，

避免混杂唾液。采样部位与方法规范鼻咽拭子采集应深入鼻咽部，旋转一

周后取出；咽拭子需擦拭双侧咽扁桃

体及咽后壁，避免触及舌部。采集过

程需轻柔且有一定力度，确保样本充

分接触病毒。质量控制与人员培训定期对采样人员进行操作培训与考核，

确保无菌操作规范，避免交叉污染。每批次采样需包含阳性和阴性对照，

验证采样过程及试剂有效性。采样器具与保存液选择推荐使用头部为合成纤维(如聚酯纤

维)的拭子，不使用棉拭子和木柄拭

子。采集后样本应立即置于含病毒保

存液的采样管内，以减少病毒降解。样本采集质量影响因素及控制措施个人防护装备

(PPE)选择与穿戴需使用一次性连体防护服，覆盖全身皮肤，检查完整性避免破损；佩戴N95及以上

级别口罩并进行密合性测试；护目镜完全覆盖眼部，防止飞溅物接触；穿戴内层医

用乳胶手套、外层加厚丁腈手套，袖口压入外层手套内：配备防水高至膝盖的鞋套，

与防护服裤脚密封衔接。采样操作环境与行为规范采样应在生物安全柜内或通风良好区域进行，严格无菌操作，避免样本间交叉污染。

操作中禁止触摸面部、口鼻，采样后立即对操作台和使用过的器具进行消毒。采样

完毕，按规定流程脱卸PPE,避免污染自身及环境。样本采集后即时处理与污染控制采集后立即将样本置于含病毒保存液的无菌采样管中，旋紧盖子确保无泄漏。使用

过的采样拭子等废弃物放入专用医疗废物袋，按感染性废物处理。采样区域用含氯

消毒剂(有效氯浓度1000mg/L)

擦拭台面，作用时间不少于30分钟，必要时进行紫

外线照射消毒。采样过程生物安全防护要点03样本运输与接收管理UN2814包装运输标准实施要求生物安全与合规性疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本列为A

类，需严格遵循UN2814包装运输标准。运输过

程需符合《病原微生物实验室生物安全管理条

例》,确保全程可追溯。标识与文件要求塑料管上用油性记号笔注明病毒名称、样本编

号、患者信息及采样日期。需单独填写“流感

/人禽流感毒株送检单”,置于防水袋中，与

标本分开放置。温度控制与运输时效新鲜临床标本在4℃条件下24小时内运送至网

络实验室；未能及时运送的标本需置-70℃或

以下保存。冻存标本需在低温条件下运输，避

免反复冻融。包装材料与结构规范病毒标本须使用带螺旋盖内有橡胶圈的耐低温

塑料管，确保无泄漏。推荐使用螺口细胞保存

管，外层需包裹吸水和缓冲材料，放入专用运

输箱或疫苗冷藏包。温度监控设备要求运输过程中应使用经过校准的温度记录仪，确保数据实时

采集与存储，温度波动需控制在允许范围内(2-8℃运输时

波动不超过±1℃,-70℃运输时波动不超过±5℃),设备

电池续航能力需覆盖整个运输时长。异常温度处理流程若运输过程中出现温度异常(如超出2-8℃或-70℃规定范

围),应立即停止运输并评估样本质量，对不可挽回的样

本需按生物安全规定销毁并记录原因，同时启动应急预案，

重新采集或调配样本以保障检测工作的连续性。温度监控范围与标准流感病毒样本运输需全程监控温度，短期运输(≤24小时)

保持2-8℃,超过24小时或需长期运输的样本应维持-70℃

及以下低温，避免样本在运输过程中因温度不当导致病毒

活性丧失或核酸降解。温度记录与追溯管理运输全程需完整记录温度数据，包括起始温度、运输途中

每隔1小时的温度读数及到达终点时的温度，记录需由专人

审核并签字确认，保存期限不少于2年，确保样本运输的可

追溯性与合规性。运输温度监控与记录规范患者身份信息严格匹配严格核对样本标签与申请单上的患者姓名、性别、年龄、唯一标识码等关

键信息，确保数据一致性，避免样本

混淆或误检。标准化信息录入与登记使用实验室信息管理系统

(LIMS)详

细记录样本接收时间、送检科室、检

测项目、样本状态及操作人员信息，

确保全程可追溯。样本完整性与质量评估检查样本容器密封性、标签清晰度及

样本量是否达标，如咽拭子是否湿润、

血清有无溶血或脂血等异常情况。检测项目与申请单确认核查申请单所列检测项目是否符合流

感检测标准，包括核酸、抗原或抗体

检测类型，防止漏检或重复检测。样本接收核查与信息登记流程不合格样本判定标准样本容器密封性破损、标签信息模糊或缺失、患者身

份信息不匹配、样本量不足(如咽拭子未湿润)、血清样本严重溶血或脂血等情况，均判定为不合格样本。样本追溯信息记录建立完善的样本追溯系统，记录样本从采集、运输、接收、处理到最终处置的全流程信息，包括采集人、

采集时间、运输条件、接收人、不合格原因及处理方

式等，确保每一份样本的流向可查、责任可追。不合格样本反馈与改进定期汇总分析不合格样本的类型及原因，形成报告反

馈给相关科室和采集人员，针对性开展培训，优化采

样操作规范和运输条件，持续降低样本不合格率，提

升检测前质量控制水平。不合格样本处理流程对于不合格样本，应立即标注“不合格”状态，详细

记录不合格原因，并及时通知送检部门或采集人员。样本需在生物安全柜内进行规范处置，如高压灭菌后按医疗废物处理，严禁随意丢弃。不合格样本处理与追溯机制04样本处理与检测安全操作日常维护与定期验证每日记录安全柜运行参数，包括

温度、湿度、压差。每周清洁HEPA过滤器进风口和出风口格栅。

定期(至少每年一次)由专业机

构进行生物安全柜性能验证，包括气流速度测试、气流模式可视

化检测、高效过滤器完整性测试

及噪声和照度检测，确保符合BSL-2或更高等级实验室要求。样本操作核心规程样本处理需在安全柜内进行，避免手臂频繁进出影响气流。操作

时物品摆放有序，感染性材料置

于工作区中央，利器使用后立即

放入专用防刺破容器。操作结束

后，用75%乙醇或含氯消毒剂(有效氯浓度1000mg/L)

擦拭柜

内表面及物品，作用时间不少于

30分钟。操作前准备与检查操作前需确认生物安全柜运行正

常，包括风机运转、气流指示、

HEPA过滤器状态。检查柜内清洁无杂物，工作台面铺设一次性防

水垫。操作人员应穿戴好个人防

护装备，如N95口罩、护目镜、防护服及双层手套。生物安全柜操作规范与验证灭活效果验证要求抽取5%已灭活样本进行阴性/阳性对照检测，

验证灭活处理对病毒感染性的破坏效果及

对后续核酸检测试剂稳定性的影响，确保灭活合格。灭活处理基本原则样本灭活需确保病毒失去感染性，同时保

留核酸完整性以供后续检测。操作需在生

物安全柜内进行，严格遵循无菌操作规程，

防止交叉污染。灭活后样本处理与记录灭活后的样本按检测需求分装至无菌EP管，

标注样本信息、灭活日期及操作人员。完整记录灭活方法、温度、时间等关键参数，

存档备查。常用灭活方法及操作采用56℃水浴处理样本30分钟，或使用专

用灭活剂进行化学灭活。灭活过程中需监

控温度和时间参数，确保灭活效果。灭活

后样本需进行涡旋震荡混匀并离心去除杂

质。样本灭活处理技术规程耗材与试剂管理规范使用一次性无菌无核酸酶耗材，试剂分

装为小份避免反复使用。阳性对照与样

本提取严格分开操作，防止扩增产物污

染试剂。污染监测与应急处理定期进行环境表面核酸检测(如台面、

地面、设备),设置阴性对照监控污染

情况。发现污染立即停用相关区域，用

10%次氯酸钠或专用核酸清除剂处理，验证合格后方可恢复使用。实验分区与空间隔离严格划分试剂准备区、样本处理区、核

酸扩增区，各区专用设备与耗材，避免

交叉污染。样本处理需在生物安全柜内

操作，确保气流方向正确。环境与人员防护措施每日实验前后对生物安全柜进行紫外线

消毒≥30分钟，定期监测HEPA过滤器效

率。操作人员穿戴一次性防护服、手套、

N95口罩，每操作1批次样本更换手套。操作流程标准化控制实验前用75%乙醇或1000mg/L含氯消毒

剂擦拭台面与设备，操作时遵循“单一

方向流程”(从试剂准备到产物分析)。

加样枪使用带滤芯吸头，避免气溶胶产

生

。核酸提取过程污染防控措施试剂与耗材质量管控严格核查试剂批号、有效期及储存条件，确保符合试剂盒说明书要求。采用磁性

纳米颗粒或硅胶膜离心柱法等高效核酸提取技术，避免使用过期或性能不稳定试

剂

。扩增程序参数优化与验证设置合理的预变性(如95℃持续30秒)、循环扩增(如95℃变性5秒，60℃退火/

延伸30秒，共40个循环)等参数。荧光信号采集应选择对应通道，确保扩增效率

符合要求，定期验证仪器性能。扩增曲线与Ct值判读标准扩增曲线需呈现典型

“S”

形，基线平稳，指数增长期斜率及平台期荧光值符合

标准。阈值线设置在指数增长期中后段，阳性结果判定需Ct

值≤预设截断值(如

Ct≤38),灰区样本(如38<Ct≤40)需复检并结合临床综合判断。反应体系配制标准化操作按照试剂盒说明精确配制反应混合液，包括逆转录酶、DNA聚合酶、dNTPs、荧

光

探针及特异性引物。配制过程需在无核酸污染区域进行，严格避免交叉污染，分

装后立即置于-20℃避光保存。质控样本设置与结果监控每批次检测需包含阳性对照、阴性对照和内参基因。阳性对照应接近检测下限以

验证灵敏度，阴性对照监控污染风险，内参基因确保核酸提取和扩增过程有效性，

Ct

值差异应≤1.5。PCR检测体系质量控制要求040301020505样本保存与毒株管理样本分级保存温度与时效控制短期保存(2-8℃)规范中期保存(-70℃及以下)要求

特殊样本备份与存储策略重要临床样本或科研样本需双重备份，

分别存储于不同设备，质控样本等关

键材料建议在-80℃低温环境中保存，

并定期检查样本活性变化及存储设备

运行状态。适用于采集后24-48小时内可完成检

测的样本，如鼻咽拭子、咽拭子样本

在此条件下保存通常不超过48小时，

病毒核酸易降解，需避免光照和剧烈

温度波动。用于需延迟检测或长期保存的样本，

如病毒分离阳性标本应在-70℃保存6

个月以备复核，长期存储需分装后置

于-70℃超低温冰箱，避免反复冻融。鸡胚分离技术要求选用9-11日龄SPF鸡胚，尿囊腔和羊膜

腔接种标本，33-35℃孵育48-72小时，

每日观察胚体活力，收获尿囊液和羊膜液进行后续鉴定。RT-PCR核酸分型确认针对流感病毒NP、HA、NA等基因设计特异性引物，通过RT-PCR扩增并测序，

可精确区分病毒类型和亚型，是鉴定

的关键确认步骤。培养需在BSL-2及以上实验室生物安全

柜内进行，使用含胎牛血清的D-MEM生

长液，严格控制消化时间与细胞密度，

确保单层细胞形成。使用特异性抗血清进行抑制试验，根

据抑制效价判定病毒型别及亚型，操

作中需设置阳性和阴性对照，确保结

果准确性。毒株分离与鉴定操作规范可采用鸡胚和/或MDCK细胞进行流感病

毒分离。具备相应条件的网络实验室在收到标本后24小时内进行病毒接种。制备1%鸡红细胞悬液，与病毒分离物

混合后观察凝集现象，阳性结果提示

病毒存在，为后续鉴定提供初步依据。红细胞凝集试验初筛

红细胞凝集抑制试验分型鉴定病毒分离培养方法选择MDCK细胞分离操作要点毒株保存记录规范所有阳性流感病毒株保存需填写“流感毒株保存记录表”,

详细记录病毒名称、代数、保存日期、保存位置及操作人

员信息。液体毒株与干燥毒株应分别记录，确保可追溯性。毒株销毁审批与执行记录毒株销毁需填写“流感阳性样本及毒株销毁记录表”,注

明销毁毒株名称、数量、销毁方法(如高温灭活、化学消

毒等)、销毁日期及审批人、执行人信息。销毁过程需符

合生物安全规定，确保彻底灭活无残留。毒株使用与流转记录毒株的领用、使用需进行书面登记，记录使用目的、使用

量、剩余量及归还/处理情况。用于科研目的的毒株，需

经相关人员书面签字同意后方可提供，严禁私自带出实验室或向其他单位/国家提供。记录存储与管理要求所有毒株保存、使用、销毁记录应长期妥善保存，电子记

录需定期备份，纸质记录应归档存放。记录保存期限应符

合生物安全与质量管理规范，便于监管部门核查与追溯。毒株保存与销毁记录管理质控样本制备规范从临床样本中分离病毒，经纯化和浓度测定确保活性稳

定。制备全程采用无菌技术，

避免交叉污染，并通过多次

检测确认病毒载量与活性。质控样本使用操作使用时需严格执行实验室操

作，包括样本解冻、稀释和

检测步骤。每次使用前后记

录样本状态，确保检测结果

的准确性和可重复性。质控样本存储要求通常需在-80℃低温环境保存，避免反复冻融。存储容

器选用耐低温、密封性良好

的材料，并定期检查样本活

性变化。质控样本质量评估实验室应定期对质控样本进

行活性和浓度复测，结合检

测结果的准确性和可重复性

进行综合评估，确保其持续

符合标准。质控样本制备与使用标准06生物安全防护体系建设生物安全柜

配置要求实验室需配备Ⅱ级或以上生物安全柜，

用于样本处理、核酸提取等操作，确

保操作过程中产生的气溶胶得到有效

containaent,防止实验人员暴露和环

境污染。实验室分级

与适用范围流感病毒诊断性实验工作应在BSL-2实

验室内进行，所有样本操作均应在生

物安全柜(HSC)

内进行，并遵循生物

安全三级个人防护。病毒分离培养工作需在BSL-3实验室内进行。消毒与废弃

物处理设施配备专用的高压灭菌器，用于污染废

弃物和实验器材的灭菌处理，设置防渗漏、耐消毒的实验台面和地面，便

于实验后清沽消毒，降低交叉污染风

险

。压力控制与

监测实验室应维持相对室外的负压状态，

压力梯度需符合相关标准，并有实时

压力监测和报警装置，确保负压状态

稳定，防止气溶胶扩散。通风与空气

净化系统应配备负压环境及HEPA过滤系统，每小时换气次数≥12次，确保实验室空

气定向流动，防止污染空气外泄，保

障实验室内外环境安全。BSL-2实验室设施要求核心装备穿戴流程穿戴顺序：先戴N95口罩并进行密合性测试，再穿连体防护服，确保

袖口与手套边缘紧密衔

接，最后佩戴护目镜或

面屏，检查无皮肤暴露。脱卸操作生物安全要求脱卸需在指定区域进行，

遵循“由外至内、层层

消毒”原则，每脱卸一

步均需使用75%乙醇消毒手部，防护服和手套

按感染性废物规范处理。装备完整性检查要点穿戴前核查防护服有无

破损、手套密封性、口

罩无变形；使用中实时

监控装备状态，发现污

染或破损立即按流程更

换，避免气溶胶渗透风

险。防护装备分级选择标准根据流感病毒操作风险

等级选择装备：常规检

测操作需N95口罩、护

目镜、防护服及双层手

套；高风险操作(如病

毒培养)需额外配备正

压面罩或生物安全柜。个人防护装备选择与穿戴规范工作台面消毒规范空气净化与通风管理设备表面消毒要求实验前后需用含氯消毒剂(有效氯实验室应采用高效空气过滤器离心机、移液器等高频接触设备需浓度1000mg/L)擦拭台面，作用时(HEPA)循环净化，每小时换气次用75%乙醇擦拭消毒，金属部件改间不少于30分钟，重点处理样本接数≥12次。操作结束后可使用气溶用异丙醇以避免腐蚀。生物安全柜触区域。操作结束后可辅助紫外线胶喷雾器喷洒过氧化氢消毒剂，密内壁需在每次实验后执行消毒，使照射消毒，时长不低于1小时。闭空间2小时后通风，确保空气质

量符合生物安全要求。用专用消毒剂浸泡的无纺布清洁。环境监测频率与指标实时监控实验室环境温湿度、二氧

化碳浓度及洁净度，定期对空气、

物体表面进行微生物采样检测。每

月至少进行一次全面环境监测，记

录数据并形成报告，确保消毒效果

持续有效。实验室消毒与环境监测程序07质量控制与应急管理质控数据记录与趋势分析详细记录质控样本的Ct

值、OD值、扩增曲

线形态等参数，定期绘制Levey-Jennings质控图。分析数据趋势偏移或失控原因，如发现阳性对照Ct值异常或阴性对照出现

扩增，需立即排查试剂、设备及操作环节。异常结果处理与报告机制对异常结果(如阴性对照阳性、阳性对照

阴性或样本Ct

值处于灰区)立即复检，排

除操作失误或交叉污染。确认系统性问题

后，暂停检测并上报质量控制部门，完整

记录异常现象、处理步骤、最终结论及预

防措施。内部质控样本设置与管理设置弱阳性、中阳性和强阳性等不同浓度

水平的内部质控样本，覆盖检测方法线性

范围，确保各浓度病毒均能被准确识别。

每批次检测必须同步运行内部质控样本，

抽取5%预处理样本进行阴阳性对照检测，

验证预处理效果及试剂稳定性。外部质量评价参与规范积极参与通过国际或国家认证的外部质评

计划，如CAP

、CLIA等。