DB54T 0530-2025 青稞中恩镰孢毒素检测技术规范

ICS6515054CCSB5054西 藏 自 治 区 地 方 标 准DB54/T0530—2025青稞中恩镰孢毒素检测技术规范2025-12-20发布 2026-1-20实施西藏自治区市场监督管理局  发布DB54/T0530DB54/T0530—2025PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前言 II范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1方法提要 1试剂和材料 122测定步骤 2检出限、定量限、回收率和精密度 4附录A（资料性） 标准品基本信息 6附录B（资料性） 参考质谱条件 7附录C（资料性） 标准物质多反应监测色谱图 8前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会提出并归口。（拉萨本文件主要起草人：张唐伟、孙月、董飞、徐剑宏、次仁德吉、杨小俊、噶热多吉、刘海金、潘虎。DB54/T0530DB54/T0530—2025PAGEPAGE10青稞中恩镰孢毒素检测技术规范范围本文件规定了青稞中恩镰孢毒素检测技术的液相色谱-质谱/本文件适用于青稞中恩镰孢毒素A、恩镰孢毒素A1、恩镰孢毒素B、恩镰孢毒素B1残留量的测定和确证。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。方法提要试样中的恩镰孢毒素A、恩镰孢毒素A1、恩镰孢毒素B、恩镰孢毒素B1通过乙腈-水-甲酸提取，经QuEChERS提取包净化后，采用液相色谱-质谱/质谱仪检测，外标法定量。试剂和材料所有试剂除特殊注明外，均为分析纯，水应符合GB/T6682规定的一级水要求。乙腈、甲酸、甲醇：色谱纯。无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠、柠檬酸二钠盐：化学纯。19.9mL0.1mL80mL99.5mL0.5mLA98.0A198.0B98.0%；B198.%1A表A.。标准溶液配置AA1B、恩镰孢毒素B10.5mg/mL18℃以下避光保存。A1.0μg/mLA11.0μg/mL，恩镰孢标准品也可使用经国家认定的有证标准物质。毒素B1.0μg/mL，恩镰孢毒素B11.0μg/mL，于-18℃以下避光保存，保存时间不超过3个月。基质标准工作溶液：移取不同体积的标准工作溶液，用空白样品提取液配成不同浓度的基质标准工作溶液。现用现配。QuEChERS4.0g1.0g1.0g0.5g。测定步骤提取与净化称取2g试样（精确0.01g）于50mL离心管中，加入20mL乙腈-水-甲酸溶液，以2500r/min震荡混匀5min。加入QuEChERS提取包，以2500r/min震荡混匀2min，10000r/min离心5min。取2mL上清液于5mL离心管中，于45℃氮吹至干，加入1mL乙腈-水-甲酸溶液溶解，过0.22μm微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。测定条件液相色谱条件液相色谱条件如下：C100m，内径2.1m，粒径2.6m流速：0.4mL/min柱温：40℃进样量：2μL流动相：A相：甲酸-水（含0.5%甲酸）；B相：色谱纯甲醇。梯度洗脱条件见表1。表1 梯度洗脱条件时间，min流动相A，%流动相B，%0.070300.0170305.05050时间，min流动相A，%流动相B，%6.050507.0703010.07030质谱参考条件质谱参考条件如下：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM）；其他参考质谱条件参见附录B。定性测定表2 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分号相对离子丰度>50>20~50>10~20≦10最大允许偏差±20±25±30±50定量测定空白试验除不称取试样外，均按上述测定步骤同时开展。结果计算和表述采用外标法定量，用色谱处理器或按式（1）计算被测物的含量。计算结果应扣除空白值。��=�×�×���

……………………（1）式中：Xi（μg/k；ci—从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每升（μg/L）;V—样液最终定容体积，单位为毫升（mL）;f—稀释因子；mi（g。注：试样中测定的恩镰孢毒素乘以换算系数2.5，即得恩镰孢毒素的含量。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。检出限、定量限、回收率和精密度检出限和定量限4种恩镰孢毒素的检出限和定量限见表3。表3 方法检出限和定量限真菌毒素检出限，µg/kg定量限，µg/kg恩镰孢毒素A2.05.0恩镰孢毒素A12.05.0恩镰孢毒素B2.05.0恩镰孢毒素B12.05.0回收率样品的添加浓度及回收率的实验数据见表3。表4 样品添加浓度及回收率实验数据化合物添加浓度，μg/kg回收率，%恩镰孢毒素A574.1-82.41078.4-81.25075.3-79.2恩镰孢毒素A1585.1-90.31080.3-86.95078.6-80.8恩镰孢毒素B576.1-78.61086.6-91.45087.5-89.3恩镰孢毒素B1583.3-86.71084.9-92.15082.4-86.4精密度在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过这两个测定值算术平均值的15%。附 录 A（资料性）表A.1标准品基本信息中文名称英文名称CAS号分子式相对分子质量恩镰孢毒素AEnniatinA2503-13-1C36H63N3O9681.9恩镰孢毒素A1EnniatinA14530-21-6C35H61N3O9667.8恩镰孢毒素BEnniatinB917-13-5C33H57N3O9639.8恩镰孢毒素B1EnniatinB119914-20-6C34H59N3O9653.8附 录 B（资料性）（CU30psi氮气。（I5500V。（TE600℃。（GAS55psi氮气。（GAS60psi氮气。B.1。表B.1主要参考质谱参数化合物母离子m/z子离子m/z驻留时间minDPCXPCE/eV恩镰孢毒素A682.60210.3*101001040228.3101001040恩镰孢毒素A1668.60210.4*10841038228.110841038恩镰孢毒素B640.60196.1*10901038214.010901038恩镰孢毒素B1654.50196.1*10881040210.310881040注：表中带*附 录 C（资料性）标准物质多反应监测色谱图恩镰孢毒素A的多反应监测（MRM）色谱图见C.1。图