DB4103∕T 192-2025 羊肚菌菌种生产技术规程

ICS65.020.20

CCSB39

4103

洛阳市地方标准

DB4103/T192—2025

羊肚菌菌种生产技术规程

2025-04-25发布2025-05-25实施

洛阳市市场监督管理局发布

DB4103/T192—2025

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由洛阳市农业农村局提出并归口。

本文件起草单位：洛阳师范学院、洛阳市农林科学院、嵩县农业技术推广服务中心、涧西区农业农

村局、洛阳五丈山农业科技公司、洛阳飞振农业科技有限公司。

本文件主要起草人：韩建明、史明艳、吴孔阳、张延召、郭立、付鹏程、周晓君、王育娜、李金博、

易力、范一霖、张向月、王帅兵、张健、谢刘振、刘大齐。

I

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羊肚菌菌种生产技术规程

1范围

本文件规定了洛阳市羊肚菌菌种生产的设施设备、母种制作、原种和栽培种制作、检测、菌种标识

及储藏、对照留样检测。

本文件适用于羊肚菌母种、原种、栽培种生产技术。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB4806.7食品安全国家标准食品接触用塑料材料及制品

NY/T528食用菌菌种生产技术规程

NY/T1284食用菌菌种中杂菌及害虫的检验

3术语与定义

本文件没有可界定的术语和定义。

4设施设备

4.1菌种生产应选择地势高，通风良好，空气清新，水源近，排水通畅，交通便利的场所。菌种生产

厂房应有各自隔离的摊晒场、原材料库、配料分装库。配套有配料室、搅拌室、装袋（瓶）室、灭菌室、

冷却室、接种室、培养室（通风好，有纱窗）、菌种检测室及菌种冷藏库等各环节的设施，应符合NY/T

528规定。

4.2菌种生产需要粉碎机、电子秤、搅拌机、装袋（瓶）机、高压灭菌锅或常压灭菌锅、超净工作台

或接种箱、恒温培养箱、培养架、摇床、显微镜等设备，应符合NY/T528规定。

5母种制作

5.1培养基

推荐使用以下配方：

配方1：马玲薯提取液200g，葡萄糖20g，琼脂15g，KH₂PO₄2g，MgSO₄·7H₂O0.5g，酵母粉2

g，水1000mL。

配方2：马铃薯200g，葡萄糖或蔗糖20g，琼脂15g～20g，水1000mL。

5.2容器

1

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试管选用18mm×180mm或者20mm×200mm。

5.3分装

培养基至分装试管1/4～1/5处，用棉塞或硅胶塞封闭试管口，每5支试管为1把，用牛皮纸包扎，橡

皮筋扎紧，棉塞向上放置。棉塞应采用梳棉。

5.4灭菌

4h内完成培养基分装后立即进锅灭菌。在121℃～122℃（0.11MPa～0.12MPa）恒温灭菌25min。

灭菌完成后自然降压，待降温至（65±5）℃时取出试管，在空气清洁的室内摆斜面，要求斜面长度不

超过试管长度的2/3。

5.5灭菌效果检查

冷却后抽取3%～5%的试管，置于28℃恒温培养箱，培养48h后无微生物长出的为灭菌合格。

5.6接种

选择经过出菇试验的优良菌株进行接种。接种环境温度要求18℃以下。在超净工作台或接种箱内接

种。接种前用紫外灯照射30min，之后用75%酒精进行表面消毒。接种过程严格执行无菌操作，接种

后及时贴好标签并做好记录。

5.7培养

温度控制在16℃～18℃，避光培养。接种后第3d、第5d和长满培养基后分别进行检验，挑出未

活、污染和生长不良的不合格试管。

5.8检测

培养好的母种应经过交配型基因检测和出菇试验，检测不合格的不得使用。交配型基因检测方法见

附录A，出菇试验检测见附录B。

5.9感官要求

母种感官要求见附录C。

6原种和栽培种制作

经过检测的母种进行生产性原种制作。

6.1制作流程

培养料配制→装瓶/袋→灭菌→冷却→接种→培养→成品。

6.2培养料配方

推荐使用以下配方：

配方1：小麦粒85%、麦麸10%、石灰2%、过磷酸钙2%、石膏1%。

配方2：小麦粒80%、棉籽壳13%、麦麸5%、石灰1%、石膏1%。

配方3：小麦粒72%、玉米芯20%、麦麸5%、石灰2%、石膏1%。

配方4：小麦粒70%、棉籽壳23%、麦麸5%、石灰1%、石膏1%。

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6.3培养料配制

6.3.1泡发小麦

水里加2%的生石灰，没过小麦10cm,水温在20℃左右泡发时间30h左右，保证小麦完全泡发饱满，

无白芯。泡后把石灰冲洗干净。

6.3.2玉米芯或棉籽壳发酵

使用生石灰及麸皮发酵腐熟，发酵后若发臭或者有干芯的禁止使用。

6.3.3培养料混合

将泡发好的小麦+发酵后的玉米芯（棉籽壳），与配方中石灰粉、石膏等其他原料搅拌均匀，控制

含水量65%左右。

6.4装袋（瓶）

6.4.1原种装瓶

采用850mL以下、瓶口直径小于等于4cm、耐126℃高温的近透明塑料瓶子或玻璃瓶。

6.4.2栽培种装袋（瓶）

采用同原种要求相同的瓶子，也可采用折径为（15～17）cm×（33～35）cm耐126℃高温的聚丙烯

塑料袋。

6.4.3装袋（瓶）要求

装袋（瓶）后要求培养料上表面距瓶（袋）口距离（50±5mm），便于后续套套环、封口等操作，

然后放入专用灭菌筐内。每袋（瓶）装培养基质500g～600g。各类容器都应使用棉塞或窝口海绵塞封

口，也可用能满足滤菌和透气要求的无棉盖体套环封口。以上聚丙烯塑料袋均符合GB4806.7要求。

6.5灭菌

采用高压灭菌或常压灭菌。

原种和栽培种按每次灭菌数量随机抽取1%作为样品，挑取培养料颗粒经无菌操作接种于置于PDA

培养基中，置于28℃恒温培养箱，培养48h后无微生物长出的为灭菌合格。

6.6接种

接种环境温度要求18℃以下。可采用超净工作台、层流罩、接种箱接种。提前采用臭氧和紫外线双

重杀菌完成接种室的灭菌消杀工作，消杀时间不低于10h。接种时须关闭紫外灯，接种人员更换工作服、

戴口罩，将预冷后的菌种送入接种室，用75%的酒精把原种及接种钩等进行消毒。每支母种接种6瓶

（袋）～8瓶（袋），接种块大小12mm×15mm。

6.7培养

接种完成后送至菌种培育室，培育室温度设定16℃～18℃左右，培养20d～25d左右至菌丝长满。培

育室注意遮光，在外界温度低于18℃时进行通风。

7检测

3

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原种和栽培的检测方法同5.8，感官要求见附录C。杂菌检测按NY/T1284规定的方法检验菌种的杂

菌。

8菌种标识及储藏

经检查合格的菌种应做好标识（厂名厂址、生产日期、品种等），及时包装入菌种库。菌种库温度1℃～

4℃，避光，适当通风，定期对空间进行杀菌处理。同时做好生产各环节详细记录。

9对照留样检测

各级菌种都应留样备查，按批随机抽取样品留存，抽样量分别为该批培养量的1%，每批抽样数量

母种不少于1支、原种不少于5瓶、栽培种不少于10袋，保存于洁净的1℃～4℃冷库中。同批次栽培种

还必须同时留样出菇验证。

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附录A

（资料性）

交配型基因检测（参考）

交配型基因检测步骤如下：

a)用CTAB法提取待测菌种的菌株总DNA作为PCR扩增模板；

b)以引物对MAT1-1L/MAT1-1R（MAT1-1L:5´-TTACCTTACTGGACTGGTTC-3´,MAT1-1R:5´

-AATGCAAGTAGGTGTCATTC-3´）进行PCR扩增，获得预期0.7kb的唯一条带的菌株，说明含有MAT1-1

交配型基因；以引物对MAT1-2L/MAT1-2R（MAT1-2L:5´-TCCTATGAATGCGTAAGTTC-3´,MAT1-2R:5

´-GTATTATCACCAACCGTAGC-3´）进行PCR扩增，获得预期0.4kb的唯一条带的菌株，说明含有MAT1-2

交配型基因；

c)PCR扩增体系：2×PCRmix12.5μL，5μM的正反向引物各1μL，DNA模板20ng，ddH2O补足

至25μL；

d)扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性1min，50℃退火30sec，72℃延伸1min，35个循环；

72℃延伸10min；

e)若只检测到MAT1-1交配型和MAT1-2交配型中的任一种交配型的菌株，说明出菇能力较差或不

能出菇；若检测到MAT1-1交配型和MAT1-2两种交配型的菌株，说明具有出菇能力。

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附录B

（资料性）

菌种出菇试验

将被检母种先后制作成原种和栽培种，每个菌种栽培面积≥3m2，至少设置3个随机小区重复，进

行常规种植管理。记录母种、原种和栽培长满所需时间，出第一潮菇所需时间和产量，总产和平均产量，

第一潮菇菇形、色泽、质地，菌盖和菌柄的长短等指标，统计检验结果。同时将该母种的出发菌株设为

对照，做同样处理。对比二者的检验结果，以时间计的检验项目中，被检母种的任何一项时间校对照菌

株推迟5天以上（含5天）者，为不合格；产量显著低于对照菌株者，为不合格；菇体外观形态与对照明

显不同或畸形者，为不合格。

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附录C

（资料性）

母种、原种、栽培种感官要求

母种感官要求见表C.1。

表C.1母种感官要求

项目要求

容器完整、无损、洁净

棉塞或无棉盖体干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和过滤要求

培养基灌入量为试管总容积的1/4，培养皿高的的1/3～1/2

斜面背面外观培养基不干缩，无积水、颜色均匀、无暗斑、无色素

菌丝生长量长满斜面或平板

菌丝体特征菌丝洁白、绒毛状、生长致密、均匀、健壮

菌丝体表面均匀、舒展、平整

菌丝体分泌物无

菌落边缘整齐

杂菌菌落无

斜面背面外观培养基不干缩，无积水、颜色均匀、无暗斑、无色

原种感官要求见表C.2。

表C.2原种感官要求

项目要求

容器完整、无破损、洁净

棉塞或无棉盖体干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和滤菌要求

培养基上表面距瓶（袋）口的距离（50±5）mm

菌丝生长量长满容器

菌丝体特征菌丝体生长旺健、整齐

培养物表面菌丝体生长均匀、无高温抑制线

培养基及菌丝体紧贴瓶壁、无干缩

菌丝分泌物无、允许少量无色至棕黄色水珠

杂菌菌落无

子实体原基无

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