2025年核酸检测的测试题及答案

2025年核酸检测的测试题及答案一、单项选择题（每题2分，共30分）1.新型冠状病毒核酸检测中，RT-PCR技术的核心步骤是：A.样本采集B.逆转录（RNA→cDNA）C.琼脂糖凝胶电泳D.样本保存答案：B解析：RT-PCR（逆转录聚合酶链式反应）的核心是通过逆转录酶将病毒RNA转化为cDNA，随后进行PCR扩增，因此逆转录是关键步骤。样本采集和保存是前处理环节，电泳是传统检测方法，非RT-PCR核心。2.核酸检测样本中，上呼吸道样本的最佳采集时间通常为：A.发病前7天B.发病后1-5天C.发病后10天以上D.退热后3天答案：B解析：新型冠状病毒感染后，上呼吸道（鼻咽拭子、口咽拭子）病毒载量在发病后1-5天达到高峰，此阶段采样阳性率最高；发病前或病程后期病毒载量较低，可能出现假阴性。3.核酸检测实验室中，用于避免扩增产物污染的关键区域是：A.样本处理区（提取区）B.试剂准备区C.扩增区D.产物分析区答案：B解析：试剂准备区需在无核酸污染的环境中进行，所有试剂（如引物、酶、缓冲液）在此区域分装，避免扩增产物（如阳性样本的cDNA）污染试剂，是防止交叉污染的第一道防线。4.某样本核酸检测结果显示Ct值为38（实验室设定临界值为37），正确的报告方式是：A.阳性B.阴性C.灰区，需重复检测D.无法判断答案：C解析：Ct值（循环阈值）越接近临界值，结果可靠性越低。当Ct值在临界值±1范围内（如36-38），需视为“灰区”，通过重复检测或更换检测试剂验证，避免因扩增效率波动导致误判。5.核酸提取过程中，若误将样本A的提取液混入样本B的离心管，最可能导致的结果是：A.样本A假阴性B.样本B假阳性C.样本A假阳性D.样本B假阴性答案：B解析：样本A的提取液含病毒核酸，混入样本B后，PCR扩增时会检测到病毒核酸，导致样本B出现假阳性结果。6.用于核酸检测的病毒保存液（如胍盐类）的主要作用是：A.维持样本pH稳定B.灭活病毒，保护核酸C.促进细胞裂解D.抑制PCR抑制剂答案：B解析：胍盐类保存液通过破坏病毒包膜蛋白灭活病毒（生物安全需求），同时抑制核酸酶活性，防止RNA降解，从而保护病毒核酸的完整性。7.核酸检测实验室室内质控品的选择要求不包括：A.与待测样本基质一致B.涵盖阴性质控和阳性质控C.浓度接近检测下限D.来源于临床阳性样本答案：D解析：室内质控品需为人工制备的稳定材料（如重组RNA、灭活病毒），避免使用临床阳性样本（可能含其他病原体或不稳定）。基质一致、涵盖阴阳性质控、浓度接近检测下限是保证质控有效性的关键。8.新型冠状病毒变异株（如XBB）核酸检测的靶标设计需优先选择：A.高变异区域（如S基因）B.保守区域（如ORF1ab、N基因）C.宿主内参基因（如β-actin）D.非编码区答案：B解析：保守区域（如ORF1ab、N基因）在病毒变异中突变率低，可保证对不同变异株的检测敏感性；高变异区域（如S基因）易因突变导致引物/探针结合失败，出现漏检。9.核酸检测结果审核时，若某样本Ct值为30但熔解曲线异常（双峰），最可能的原因是：A.样本中存在PCR抑制剂B.引物二聚体或非特异性扩增C.病毒载量过高D.仪器温度校准偏差答案：B解析：熔解曲线双峰通常提示扩增产物中存在非特异性片段（如引物二聚体），与目标片段熔解温度不同；PCR抑制剂会导致Ct值升高或无扩增，病毒载量过高可能导致Ct值过低，仪器温度偏差会影响整体扩增效率。10.核酸检测样本运输时，若采用冰袋冷藏（4℃），最长可保存时间为：A.2小时B.6小时C.24小时D.72小时答案：C解析：根据《新型冠状病毒核酸检测技术指南》，上呼吸道样本在4℃条件下可保存24小时，超过24小时需-70℃以下冷冻保存，避免核酸降解。11.核酸检测实验室生物安全二级（BSL-2）的核心要求是：A.配备正压防护服B.实验区与办公区严格分隔C.空气需经HEPA过滤后直排D.所有操作在生物安全柜外进行答案：B解析：BSL-2实验室要求实验区与办公区物理分隔，设置独立的缓冲间；正压防护服为BSL-3及以上要求，空气需经HEPA过滤后循环或高空排放，样本处理（如核酸提取）需在生物安全柜内进行。12.核酸检测中，内参基因（如RNP）的主要作用是：A.评估样本采集质量B.提高检测灵敏度C.区分不同病毒D.加速扩增反应答案：A解析：内参基因（如人源RNP基因）用于检测样本中是否含有人体细胞核酸，若内参无扩增，提示样本采集失败（如未采集到上皮细胞），需重新采样。13.某实验室使用的核酸提取试剂说明书标注“提取效率≥90%”，实际检测中若某样本病毒载量为1000拷贝/μL，提取后理论上可回收的核酸量为：A.≥900拷贝/μLB.≥100拷贝/μLC.≥500拷贝/μLD.无明确关联答案：A解析：提取效率指提取后回收的核酸量与原始量的比值，因此1000拷贝/μL×90%=900拷贝/μL，实际回收量需≥900拷贝/μL。14.核酸检测结果报告时，“未检出”与“阴性”的区别在于：A.“未检出”可能因样本质量问题导致B.“阴性”表示绝对无病毒C.“未检出”需重复检测D.两者无本质区别答案：A解析：“未检出”通常指检测过程未发现目标核酸，但可能因样本采集不当、病毒载量低于检测下限等原因导致；“阴性”需结合临床症状、采样时间等综合判断，不能绝对排除感染。15.核酸检测实验室仪器校准周期通常为：A.每月1次B.每季度1次C.每半年1次D.每年1次答案：D解析：PCR仪、离心机等关键设备需每年由计量部门校准，确保温度、转速等参数准确；日常使用中需通过室内质控（如扩增阳性对照）验证仪器状态。二、多项选择题（每题3分，共30分，少选、错选均不得分）1.核酸检测样本采集时，需注意的生物安全事项包括：A.采集人员穿戴N95口罩、护目镜、手套B.每采集1人后更换手套C.样本管外壁用75%酒精擦拭D.采集后立即将样本管放入密封袋答案：ABCD解析：所有选项均为生物安全基本要求：穿戴防护装备防止暴露，更换手套避免交叉污染，擦拭样本管减少外表面污染，密封袋防止运输泄漏。2.核酸提取过程中，可能导致假阴性的因素有：A.样本保存时间过长（>72小时未冷冻）B.提取试剂失效（如磁珠无吸附能力）C.离心转速不足（未完全沉淀磁珠）D.扩增仪温度设置错误（退火温度过高）答案：ABC解析：样本保存时间过长会导致核酸降解；试剂失效或离心不足会导致核酸未被有效提取；扩增仪温度错误影响的是扩增效率，可能导致Ct值异常，但属于扩增环节问题，非提取环节假阴性主因。3.核酸检测实验室质量控制的关键环节包括：A.试剂验收（如批间差异检测）B.人员培训与考核C.室间质评（EQA）参与D.仪器日常维护记录答案：ABCD解析：质量控制覆盖“人、机、料、法、环”全要素：试剂验收确保性能稳定，人员培训保证操作规范，室间质评验证实验室能力，仪器维护保障设备状态。4.新型冠状病毒核酸检测的适用场景包括：A.疑似病例诊断B.密切接触者筛查C.入境人员健康监测D.治愈患者复查（出院后14天）答案：ABCD解析：核酸检测是病毒感染的“金标准”，适用于诊断、筛查、监测及愈后评估等全流程场景。5.核酸检测结果审核时，需重点核查的内容有：A.样本信息（姓名、编号）与检测记录一致B.阴阳性对照结果是否符合预期C.扩增曲线是否符合典型“S”型D.检测时间是否在样本保存有效期内答案：ABCD解析：审核需确保样本可追溯（信息一致）、质控有效（阴阳对照合格）、扩增过程正常（曲线形态）、样本质量可靠（保存时间合规）。6.核酸检测中，可能导致假阳性的原因有：A.扩增产物气溶胶污染B.样本间交叉污染（如加样枪未换枪头）C.阴性质控品被阳性样本污染D.病毒变异导致引物错配答案：ABC解析：气溶胶污染（扩增产物扩散）、交叉污染（操作不当）、质控品污染均会引入外源性核酸，导致假阳性；引物错配通常导致假阴性（无法结合目标序列）。7.核酸提取仪的日常维护内容包括：A.清洁磁棒（避免残留磁珠）B.校准加样针体积（误差≤5%）C.更换废液桶过滤膜（防止气溶胶扩散）D.升级仪器软件（确保程序兼容性）答案：ABCD解析：磁棒残留会导致核酸交叉污染；加样针体积误差影响提取效率；废液桶过滤膜防止有害气体泄漏；软件升级保障新试剂适配性。8.核酸检测实验室分区管理的原则是：A.单向流程（试剂准备区→样本处理区→扩增区→产物分析区）B.各区物品专用（如移液器、离心管不得跨区使用）C.空气压力梯度（试剂准备区>样本处理区>扩增区）D.各区使用不同颜色标识（如蓝色→试剂区，黄色→样本区）答案：ABCD解析：分区管理通过单向流程、专用物品、压力梯度（防止污染扩散）及颜色标识，降低交叉污染风险。9.核酸检测报告的必备信息包括：A.检测机构名称及资质B.样本类型（如鼻咽拭子）C.检测方法（如荧光RT-PCR）D.报告人及审核人签名答案：ABCD解析：报告需具备可追溯性（机构资质）、样本信息（类型）、方法学（检测技术）及责任标识（签名），确保结果法律效力。10.核酸检测应急情况下（如大规模筛查），提高检测效率的措施有：A.采用96孔板批量处理样本B.优化提取与扩增步骤衔接（如并行操作）C.使用快速检测试剂（扩增时间<60分钟）D.增加实验室班次（24小时轮班）答案：ABCD解析：批量处理、流程优化、快速试剂及增加人力均为提升效率的有效手段。三、判断题（每题1分，共10分，正确填“√”，错误填“×”）1.核酸检测样本中，痰液的病毒载量通常高于鼻咽拭子。（√）解析：下呼吸道样本（痰液、肺泡灌洗液）病毒载量高于上呼吸道（鼻咽拭子），但采集难度大，一般首选上呼吸道样本。2.核酸提取时，为节省时间，可将100份样本分5批（每批20份）提取。（×）解析：每批提取样本量需与试剂、仪器处理能力匹配，分批次可能导致批间差异；若仪器支持96孔板，应尽量批量处理，避免分批。3.核酸检测中，内参基因未扩增仅需重新检测该样本。（×）解析：内参未扩增提示样本采集失败（无细胞核酸），需重新采样，而非仅重新检测。4.扩增仪温度校准报告显示“60℃实际温度58℃”，不影响检测结果。（×）解析：退火温度偏差会影响引物与模板结合效率，导致Ct值异常（如温度过低可能非特异性扩增，过高可能漏检）。5.核酸检测实验室需每日进行环境核酸污染监测（如用阴性拭子擦拭台面后检测）。（√）解析：环境监测可及时发现气溶胶污染，是实验室生物安全的重要环节。6.新型冠状病毒核酸检测试剂的最低检测限（LOD）为500拷贝/mL时，可检测所有临床样本。（×）解析：部分早期感染或恢复期样本病毒载量可能低于500拷贝/mL，导致漏检，因此LOD越低（如100拷贝/mL）越敏感。7.核酸检测结果“阳性”可直接作为临床治疗依据，无需结合其他检查。（×）解析：需结合临床症状、影像学检查等综合判断，避免因假阳性导致过度治疗。8.核酸提取过程中，磁珠法比柱提法更易受PCR抑制剂影响。（×）解析：柱提法通过离心柱过滤杂质，对PCR抑制剂（如血红蛋白、黏液）的去除能力弱于磁珠法（磁珠特异性吸附核酸，可通过洗涤步骤去除抑制剂）。9.核酸检测实验室废弃的阳性样本需高压蒸汽灭菌后按医疗废物处理。（√）解析：阳性样本含感染性物质，需先灭活（高压灭菌）再处理，防止污染环境。10.核酸检测报告中，“未检出”等同于“排除感染”。（×）解析：“未检出”可能因采样时间过早（病毒未复制）、载量过低等导致，需结合流行病学史和重复检测判断。四、简答题（每题6分，共30分）1.简述新型冠状病毒核酸检测的完整流程。答案：完整流程包括：（1）样本采集（鼻咽/口咽拭子、痰液等）；（2）样本转运（4℃冷藏或-70℃冷冻，24小时内送检）；（3）样本接收与前处理（核对信息、56℃灭活30分钟）；（4）核酸提取（磁珠法/柱提法分离病毒RNA）；（5）PCR体系配制（加入引物、探针、酶等）；（6）扩增检测（荧光RT-PCR，监测Ct值及熔解曲线）；（7）结果分析（核对质控、判断阴阳性）；（8）报告审核与发放（双人审核，信息完整）。2.列举3种核酸检测中常见的PCR抑制剂及其来源。答案：（1）血红蛋白：来源于血液污染的样本（如采样时损伤黏膜）；（2）黏液蛋白：来源于痰液、鼻咽拭子中的呼吸道分泌物；（3）胍盐残留：核酸提取时未彻底洗涤，残留的胍盐可抑制Taq酶活性；（4）EDTA：样本保存液中过量的EDTA（金属离子螯合剂）可抑制PCR反应。3.说明核酸检测实验室“三区两缓”的具体设置及作用。答案：“三区”指试剂准备区、样本处理区（提取区）、扩增及产物分析区；“两缓”指试剂准备区与样本处理区之间的缓冲间，样本处理区与扩增区之间的缓冲间。作用：（1）分区防止交叉污染（如试剂准备区无核酸，避免扩增产物污染试剂）；（2）缓冲间作为过渡区域，减少不同区空气流通；（3）单向流程（试剂→样本→扩增）确保污染不逆向扩散。4.简述核酸检测结果“灰区”的处理原则。答案：（1）定义：Ct值接近实验室设定的临界值（如临界值37，灰区36-38）；（2）处理原则：①重复检测原样本（使用同一试剂）；②若重复结果仍为灰区，换用不同检测试剂（靶标不同）重新检测；③结合临床症状、流行病学史综合判断；④必要时采集新样本（如深咳痰液）再次检测；⑤记录灰区样本的处理过程，存档备查。5.列举核酸检测质量控制的5项关键指标。答案：（1）阴性质控符合率（100%无扩增）；（2）阳性质控符合率（Ct值在预期范围内）；（3）内参基因扩增率（≥95%样本内参阳性）；（4）批间差异（不同批次试剂检测同一样本Ct值差≤2）；（5）检测限验证（最低检测限样本阳性率≥95%）；（6）环境核酸污染率（环境监测样本阴性率100%）。五、案例分析题（共20分）案例：某社区医院核酸检测实验室在大规模筛查中发现，连续3批样本的阴性质控均出现