布鲁氏菌病CF-ELISA抗体检测技术

ICS11.220

CCSB41

团体标准

T/CVMAXXXXX—XXXX

布鲁氏菌病CF-ELISA抗体检测技术

（酶标补体C1q多克隆抗体法）

CF-ELISAantibodydetectiontechnologyforbrucellosis(Enzymelabeled

complementC1qpolyclonalantibodymethod)

征求意见稿

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国兽医协会发布

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布鲁氏菌病CF-ELISA抗体检测技术（酶标补体C1q多克隆抗体法）

1范围

本标准规定了用于布鲁氏菌病CF-ELISA抗体检测技术（酶标补体C1q多克隆抗体法）的试剂器材、

操作方法及结果判定标准。

本标准适用于动物血清中布鲁氏菌病抗体检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则。

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法。

GB19489-2008实验室生物安全通用要求。

NY/T541-2016兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4符号和缩略语

下列缩略语适用于本文件。

CF-ELISA：补体结合酶联免疫吸附试验（Complementfixation-EnzymeLinkedImmunosorbent

Assay）

HRP：辣根过氧化物酶（HorseradishPeroxidase）

OD：光密度（OpticalDensity）

PBS：磷酸盐缓冲液（Phosphate-BufferedSaline）

TMB：四甲基联苯胺（Tetramethylbenzidine）

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5试剂与材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂，试验用水符合GB/T6682-2008的要求。

5.1布鲁氏菌病CF-ELISA抗体检测（酶标补体C1q多克隆抗体法）试剂盒主要组分：

5.1.1包被抗原：布鲁氏菌LPS。

5.1.2补体：豚鼠血清或鸭等动物血清。

5.1.3酶标抗体：HRP标记的C1q多克隆抗体。

5.1.4阳性对照血清：布鲁氏菌病阳性血清。

5.1.5阴性对照血清：布鲁氏菌病阴性血清。

5.1.6抗原包被液。

5.1.7洗涤液。

5.1.8封闭液。

5.1.9样品稀释液。

5.1.10双组分TMB显色液。

5.1.11终止液。

5.2耗材

5.2.1移液器吸头：10μL-1000μL。

5.2.22mL离心管。

6仪器设备

6.1微量移液器：10μL-1000μL（±2%）。

6.2冰箱：2℃~8℃，-20℃以下。

6.3离心机。

6.4恒温培养箱。

6.5振荡器。

6.6酶标检测仪。

7样品的采集与处理

7.1总则

样品采集、保存与运输按照NY/T541-2016执行，实验室生物安全要求按照GB19489-2008的规定。

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7.2血液样品采集与处理

按常规方法采集和分离血清。

样品信息应记录完整，确保可追溯性。

样品采集人员应注意采取佩戴口罩、手套，着长袖工作服等防护措施。

8操作方法

8.1稀释：用样品稀释液将待检血清、补体作1：100稀释。用样品稀释液将酶标补体C1q多克隆抗体

按标定效价稀释。用纯化水将浓缩洗涤液稀释至工作浓度。

8.2对照：每次试验设置阳性对照与阴性对照各2孔。

8.3对照孔分别加入50μL阳性血清与阴性血清，检测孔加入50μL稀释后样品血清，再在每孔加入

50μL稀释后补体血清。置37℃孵育30min。

8.4甩掉孔中液体，加入洗涤液200μL/孔洗涤，反复洗涤5次，拍干。每孔加入工作浓度的酶标抗

体100μL，置37℃孵育30min。

8.5甩掉孔中液体，同上方法洗涤5次，拍干后每孔加入双组分TMB显色液100μL，室温避光孵育10

分钟（至阴性孔变色），每孔加终止液50μL终止反应。

8.6检测：30min内在波长为450nm处用酶标仪读出各孔的OD值。

9结果判断

9.1试验成立条件

阴性对照平均OD450nm值≤0.3，阳性对照平均OD450nm值≥1.0时，试验成立。否则,试验结果无效，

需重新试验。

9.2计算待检血清S/N、S/P值

S/N值=样品OD450nm值÷阴性对照平均OD450nm值

S/P值=（样品OD450nm值-阴性对照OD450nm平均值）÷（阳性对照平均OD450nm值-阴性对

照OD450nm平均值）

9.3结果判定

阳性：S/N值≥2.1，同时S/P值≥0.3。

阴性：S/N值＜2.1，或S/P值＜0.3。

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