DB54T 0579-2026 藏猪冷冻精液

ICS62.020.3054CCSB4354西 藏 自 治 区 地 方 标 准DB54/T0579—2026藏猪冷冻精液2026-1-4发布 2026-2-5实施西藏自治区市场监督管理局  发布DB54/T0579DB54/T0579—2026PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前 言 II范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1要求 1冻精制作 2检查 2标识、贮存、运输 5前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由西藏农牧大学提出。本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会归口。DB54/T0579DB54/T0579—2026PAGEPAGE1藏猪冷冻精液范围本文件规定了要求、检查、标识、贮存、运输等技术规范要求。本文件适用于藏猪细管冷冻精液的制作、检验和判定标准。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。GB/T5458液氮生物容器GB/T32763藏猪术语和定义下列术语和定义适用于本文件。藏猪藏猪指血统纯正、体型外貌符合GB/T32763标准。要求种公猪1.5年~3年，保证无遗传病史，体质健康，无二类疫病中的任何一类。精液质量精液应为乳白色或淡乳白色。精子活力≥70%，精子密度≥2亿个/mL，精子畸形率≤10%。细管外观细管无裂痕，两端封口严实，标识清晰。剂型及剂量0.5mL细管冻精剂型，每剂剂量≥0.45mL。细管解冻后要求精子活力活力≥35%。精子畸形率精子畸形率≤20%。冻精制作藏猪冷冻精液的制作应按照以下步骤进行。将采集的鲜精液先用精液质量分析系统检测原精密度、重量、活率等指标，对符合检测要求的原精用猪冻精专用试剂在37℃等温稀释1（25℃）静置117℃恒温冰箱，平衡2h~3h。取新鲜鸡蛋，去蛋清，将完整蛋黄置于灭菌无绒吸水纸上，将剩余蛋清吸净，用注射器抽取蛋黄100mL，加入到配好的冻精专用基础液中，充分混匀，形成Ⅰ液。待鲜精充分平衡后，摇匀，防止精子假死，17℃条件下800g~900g离心10min~15min，去掉1720亿174℃冰箱或低温操作柜中降温平衡，使精液在2.5h~3h缓慢降温至4℃~5℃，并平衡0.5h~1h。待4℃平衡后，加入配好的精液冷冻剂再稀释1倍，混匀后立即在低温操作柜中进行0.5mL细管灌装操作，并在细管托架上码好。灌装完毕后，迅速将码好的细管放入冷冻仪中，启动冷冻程序，待程序跑完后取出细管装入纱布袋中侵入液氮中长期保存。检查检查分类、项目及判定检查方案、项目及方法细管检查用眼观法直接观测细管外观。结果参照4.3所规定。剂量检查主要材料离心管、剪刀、移液枪。检查方法计算方法精液剂量计算按式（1）计算：�=�1+�2�3(1)3式中：�-剂量值，单位mL；nnnmL精子活力、直线运动检查主要材料恒温显微镜、恒温水浴锅、2mL离心管、载玻片（25.4mm×76.2mm）、盖玻片（18mm×18mm）、移液枪。检查方法取三支细管冷冻精液，在38℃恒温水浴锅中解冻，用移液枪取解冻后精液1μL滴于载玻片并加上盖玻片，立即置于38℃恒温载物台上用50倍镜观测活力，每个样片选取三个视野进行观测。计算方法精液活力计算按式（2）计算：�=�1�2+�3(2)3式中：y-活力值，单位%；nnn每剂量前进运动精子数检查主要材料血细胞计数板、吸管、小试管、计数器、显微镜或电视显微装置、精液稀释液。检查方法用吸管准确吸取10μL解冻后精液，注入盛有0.99mL精液稀释液的试管内，混匀。将备好的血细胞计数板用盖玻片将计数室盖好，用吸管吸取10μL稀释精液于盖玻片边缘，使精液自行流入计数室，均每剂量前进运动精子数计算每剂量中精子数按式（3）计算：S=n×500×Q (3)式中：S—每剂量中精子数，单位为个；n—5个中方格精子数，单位为个；Q—细管剂量值,单位为ml。每剂量中前进运动精子数按式(4)计算：C=s×m (4)式中：C—每剂量中前进运动精子数，单位为个；s—每剂量中精子数，单位为个；m—活力，单位为%。精子畸形率的检查主要材料显微镜、载玻片、移液枪、蒸馏水、姬姆萨染料、中性福尔马林。主要方法精液准备精液解冻，同时检查精液活力，选取合格冷冻精液进行后续处理涂片35固定在已风干的抹片上滴加1mL~2mL中性福尔马林，固定15min后用清水缓缓冲洗，自然风干。染色将固定好的抹片反扣在带有平槽的玻璃面上，将姬姆萨染液滴于槽和抹片之间，染色1.5h后用清水冲去染液，晾干。镜检将制作好的抹片在显微镜下观察，每个抹片上观察200个以上的精子数。精子畸形率按式（5）计算：�=�1×100%（5）�Z—畸形率，单位为%；Z1—畸形精子数，单位为个；N—精子总数，单位为个。标识、贮存、运输