临床寄生虫学检验完整教材

临床寄生虫学检验完整教材绪论一、临床寄生虫学检验的定义与范畴临床寄生虫学检验是临床医学检验的核心分支，通过病原学检测、免疫学分析、分子生物学技术等手段，识别人体感染的寄生虫（原虫、蠕虫、医学节肢动物），明确感染类型、虫种及感染阶段，为临床诊断、治疗及防控提供关键依据。其范畴涵盖寄生虫形态学鉴定、感染标志物检测、流行规律分析及抗寄生虫药物疗效监测，是感染性疾病诊疗体系的核心环节。二、学科地位与临床价值寄生虫感染（如疟疾、血吸虫病、包虫病）在全球（尤其热带、亚热带地区）具有高发病率与隐匿性，临床寄生虫学检验的价值体现于：精准诊断：区分寄生虫感染与其他感染性/非感染性疾病（如阿米巴痢疾与细菌性痢疾的鉴别）；指导治疗：明确虫种以选择针对性抗寄生虫药物（如疟原虫虫种与青蒿素类药物敏感性的关联）；防控预警：通过群体筛查（如血吸虫病疫区粪检）评估流行态势，为公共卫生干预提供数据支持。三、发展历程与技术演进从17世纪列文虎克首次观察到阴道毛滴虫，到21世纪分子诊断技术的应用，临床寄生虫学检验经历了“形态学主导→多技术融合”的发展阶段：传统阶段（19世纪~20世纪中期）：依赖显微镜观察虫卵、滋养体/包囊（如改良加藤法检测肠道蠕虫虫卵）；免疫检测阶段（20世纪后期）：利用抗原-抗体反应实现微量检测（如疟原虫快速诊断试纸）；分子诊断阶段（21世纪至今）：基于核酸扩增与测序技术，实现虫种精准分型（如区分疟原虫不同亚种），甚至在“无虫体可查”时（如隐性感染）确诊。第一章寄生虫学检验基础第一节人体寄生虫的分类与生活史一、分类体系人体寄生虫按生物学分类分为：原虫（单细胞真核生物）：如疟原虫（孢子虫纲）、溶组织内阿米巴（叶足虫纲）、蓝氏贾第鞭毛虫（鞭毛虫纲）；蠕虫（多细胞无脊椎动物）：包括线虫（蛔虫、钩虫）、吸虫（肝吸虫、血吸虫）、绦虫（猪带绦虫、包虫）；医学节肢动物：作为传播媒介（蚊传播疟原虫）或病原体（疥螨），如昆虫纲（蚊、蝇）、蛛形纲（蜱、螨）。二、生活史要点寄生虫生活史包含感染阶段（对人体具感染性的虫期）、体内移行（如蛔虫幼虫经肺移行至小肠）、繁殖方式（如疟原虫的裂体增殖、配子生殖）及传播途径（经口、经皮肤、经媒介昆虫）。理解生活史是选择检验方法的关键（如血吸虫感染需检测粪便/血清，因虫卵随粪排出、成虫寄生于血管）。第二节寄生虫的致病机制寄生虫对人体的损害包括：机械性损伤：虫体移行（如蛔虫性肠梗阻）、虫卵沉积（如血吸虫卵致肝纤维化）；毒性与免疫损伤：虫体代谢产物（如疟原虫裂殖子释放的毒素）、免疫复合物沉积（如疟疾的肾小球肾炎）；掠夺营养：如钩虫吸血致缺铁性贫血，蓝氏贾第鞭毛虫竞争肠道营养。第三节检验的基本要求一、标本采集原则时效性：如疟原虫血片需在发热高峰（疟原虫裂殖体释放时）采集；无菌性：组织活检标本（如皮肤利什曼病的皮肤刮取物）需避免污染；针对性：如怀疑蛲虫感染，需于清晨便前采集肛周拭子（因蛲虫夜间产卵）。二、标本保存与运输原虫标本（如粪便中的阿米巴包囊）需用3.8%甲醛或生理盐水保存；血清标本（用于免疫学检测）需分离后4℃短期保存，-20℃长期保存；运输时需防标本泄漏、避免温度剧烈变化（如疟原虫血片需干燥后运输）。第二章常见人体寄生虫的检验第一节原虫检验一、疟原虫（*Plasmodium*）形态特征：血涂片中可见环状体（早期滋养体）、大滋养体、裂殖体、配子体（雌配子体呈新月形，雄配子体呈腊肠形）；检验方法：病原学：薄血膜（虫种鉴定）+厚血膜（提高检出率）染色（姬姆萨或瑞氏染色）；免疫学：快速诊断试纸（RDT）检测疟原虫抗原（HRP-2或pLDH）；分子生物学：PCR检测疟原虫18SrRNA基因，区分间日疟、恶性疟等亚种；临床意义：恶性疟易致脑型疟，间日疟可复发（因肝内休眠子）。二、溶组织内阿米巴（*Entamoebahistolytica*）形态特征：滋养体（含吞噬红细胞的空泡）、包囊（1~4核，核仁居中）；检验方法：病原学：粪便生理盐水涂片（查滋养体，需新鲜标本）、碘液染色（查包囊）；免疫学：ELISA检测血清阿米巴抗体（需结合临床，因抗体阳性可能为既往感染）；临床意义：滋养体侵袭肠壁致阿米巴痢疾，可经血行播散至肝（肝脓肿）。第二节蠕虫检验一、蛔虫（*Ascarislumbricoides*）形态特征：虫卵分受精（宽椭圆形，蛋白质膜凹凸不平）、未受精（长椭圆形，蛋白质膜薄）；检验方法：改良加藤法（定量检测虫卵，评估感染度）、直接涂片法（定性）；临床意义：幼虫移行致肺部炎症（蛔蚴性肺炎），成虫掠夺营养、阻塞肠道。二、日本血吸虫（*Schistosomajaponicum*）形态特征：虫卵（椭圆形，侧棘短小，易被漏检）、尾蚴（叉尾型，具感染性）；检验方法：病原学：粪便毛蚴孵化法（需新鲜粪便，观察尾蚴）、直肠黏膜活检（查虫卵，区分活卵/死卵）；免疫学：ELISA检测循环抗原（评估现症感染）；临床意义：虫卵沉积致肝、肠纤维化，晚期可发展为巨脾、腹水。第三节医学节肢动物检验一、疥螨（*Sarcoptesscabiei*）形态特征：成虫（圆形，4对足，后2对足短）、卵（椭圆形，透明）；检验方法：皮肤刮片（取隧道末端组织，显微镜下查虫体/卵）；临床意义：引起疥疮，表现为皮肤隧道、夜间瘙痒剧烈。第三章检验技术与质量控制第一节病原学检验技术一、直接涂片法应用：粪便查原虫滋养体/包囊、蠕虫虫卵（如蛔虫卵）；操作要点：粪便标本取黄豆粒大小，与生理盐水混匀，涂片厚度以“透过涂片看清报纸文字”为宜。二、浓集法沉淀法（如改良加藤法、醛醚离心法）：用于提高虫卵检出率（如血吸虫卵、肝吸虫卵）；浮聚法（如饱和盐水浮聚法）：用于比重轻的虫卵（如钩虫卵、蛲虫卵）。三、培养法应用：如溶组织内阿米巴的体外培养（区分致病与非致病阿米巴）、阴道毛滴虫的培养（提高检出率）；培养基：如Robinson培养基（滴虫）、NNN培养基（利什曼原虫）。第二节免疫学检验技术一、酶联免疫吸附试验（ELISA）应用：检测寄生虫抗体（如血吸虫抗体）、抗原（如疟原虫HRP-2）；优势：灵敏度高，可批量检测；局限性：抗体阳性可能为既往感染，需结合病原学结果。二、免疫荧光试验（IFA）应用：疟原虫抗原检测（荧光标记抗体识别虫体抗原）；优势：可观察虫体形态，兼具定性与定位价值。第三节分子生物学检验技术一、聚合酶链反应（PCR）应用：虫种分型（如区分间日疟与卵形疟）、微量感染检测（如隐性疟原虫感染）；靶序列：18SrRNA（原虫）、线粒体DNA（蠕虫）。二、基因芯片技术应用：同时检测多种寄生虫（如疟原虫、弓形虫、锥虫）；原理：探针与靶核酸杂交，通过荧光信号判断感染类型。第四节质量控制一、标本采集质控培训临床医护人员规范采集（如疟原虫血片的采血部位、时间）；建立标本接收标准（如粪便标本需无尿液污染）。二、试剂与仪器质控定期校准显微镜（油镜分辨率≤0.2μm）；验证ELISA试剂盒的批内/批间差（变异系数＜15%）。三、人员操作质控定期考核形态学识别能力（如盲法读片，正确率≥90%）；规范操作流程（如PCR防污染的分区操作）。第四章临床应用与案例分析第一节诊断流程与思路以“发热伴贫血”为例，鉴别诊断需考虑：1.疟原虫感染：血涂片查疟原虫，结合RDT与PCR；2.钩虫感染：粪便查钩虫卵，血常规示缺铁性贫血；3.利什曼原虫感染：骨髓涂片查无鞭毛体，ELISA检测抗体。第二节典型案例分析案例1：慢性腹泻伴营养不良患者：5岁儿童，长期稀便、体重不增；检验：粪便直接涂片（碘液染色）见蓝氏贾第鞭毛虫包囊（4核，椭圆形）；诊断：贾第虫病，予甲硝唑治疗后症状缓解。案例2：肝区疼痛伴黄疸患者：渔民，肝区隐痛、黄疸；检验：粪便改良加藤法见肝吸虫卵（形似灯泡，有卵盖），血清ELISA肝吸虫抗体阳性；诊断：肝吸虫病，予吡喹酮治疗，同时建议避免生食淡水鱼虾。第五章前沿进展与展望第一节分子诊断技术的突破宏基因组测序（mNGS）可直接从血液、脑脊液中识别寄生虫核酸，解决“无虫体可查”的疑难感染（如罕见锥虫、弓形虫脑炎）。第二节人工智能辅助诊断AI算法（如卷积神经网络）可自动识别血涂片中的疟原虫，准确率达95%以上，缩短诊断时间（尤其在基层实验室）。第三节疫苗与药物研发的检验支撑寄生虫感染标志物（如疟原虫PfEMP1蛋白）的检测，可评估疫苗效力（如RTS,S疟疾疫苗的临床试验），指导抗寄生虫药物的耐药性监测（如疟原虫K13基因检测预测青蒿素敏感性）。附录：常用试剂与器材显微镜：光学显微镜