CN111189942A 一种测定工业大麻花叶中六六六、滴滴涕残留的方法 （云南绿新生物药业有限公司）

(10)申请公布号CN111189942A(21)申请号202010084591.0(71)申请人云南绿新生物药业有限公司地址655000云南省曲靖市沾益区城西工业园区(72)发明人王钲霖刘胜贵马海悦付彬彬李智高孔令羽(54)发明名称一种测定工业大麻花叶中六六六、滴滴涕残留的方法(57)摘要本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种测定工业大麻花叶中六六六、滴滴涕残留的方法。本方法用正己烷超声提取，然后取上层有机相，弗罗里硅土固相萃取小柱净化，浓缩定容，用配备电子捕获检测器(ECD)的气相色谱仪检测，外准确测定工业大麻花叶中六六六、滴滴涕残留2(1)样品的采集：新鲜工业大麻花叶采集后，60℃下烘干(至水分含量不超过10%),并(2)样品的前处理：称取1g样品于50mL具塞锥形瓶中，精确至0.01g;加入10mL正己烷，置于超声波发生器中，超声提取30min;然后加入2g无水硫酸钠振荡，转移至50mL离心管中，出组分合并收集，在旋转蒸发仪上浓缩至1mL,过滤，供气相色谱测定；(3)标准工作溶液的配置：配制八种六六六、滴滴涕混合标准工作溶液浓度分别为1ng/(4)利用GC-ECD对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品处理液进行测定，确认在目标物出峰时间处是否出峰，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲(5)GC-ECD仪器条件：①色谱柱为石英弹性毛细管柱HP-5(30m×0.32mm×0.25μm),柱温在50℃保持1min后，先以25℃/min程序升温至150℃,再以5℃/min程序升温至260℃,后以10℃/min程序升温至290℃,保持15min;④检测器为电子捕获检测器(ECD),温度为300℃。2.根据权利要求1所述的一种测定工业大麻花叶中六六六、滴滴涕残留的方法，其特征在于，所述六六六、滴滴涕包括α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、p,p'-DDE、p,p'-3.根据权利要求1所述的一种测定工业大麻花叶中六六六、滴滴涕残留的方法，其特征4.根据权利要求1所述的一种测定工业大麻花叶中六六六、滴滴涕残留的方法，其特征在于，所述超声功率为250W,工作频率为40kHz。5.根据权利要求1所述的一种测定工业大麻花叶中六六六、滴滴涕残留的方法，其特征在于，所述弗罗里硅土固相萃取小柱规格为500mg/3mL。6.根据权利要求1所述的一种测定工业大麻花叶中六六六、滴滴涕残留的方法，其特征7.根据权利要求1所述的一种测定工业大麻花叶中六六六、滴滴涕残留的方法，其特征在于，所述标准对照品工作溶液配置方法为：(1)单一标准储备液：分别称取0.01g每种农药标准品(纯度大于99%)到各自的10mL容量瓶中，精确至0.0001g,用正己烷稀释定容，配制成浓度约为1000μg/mL的单一农药标准储备液；(2)混合储备液：移取各农药单一标准储备液1mL于100mL容量瓶中，用正己烷稀释定3容，得到各农药标准品浓度约为10μg/mL的混合储备液；(3)校准曲线：将混合储备液逐级稀释为500ng/mL、250ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、4一种测定工业大麻花叶中六六六、滴滴涕残留的方法技术领域[0001]本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种测定工业大麻花叶中六六六、滴滴涕残留量的方法。背景技术[0002]六六六和滴滴涕曾经是风靡一时的农药明星，人们最开始推崇六六六和滴滴涕，是因为它们的杀虫能力强，并且化学稳定性非常高，能够杀死一些人们之前对之束手无策的害虫。但反过来说，杀虫能力强，说明具有非常高的毒害作用，很容易对其他生物造成误伤，且残留在自然界和生物体内的时间较长，会对生态环境造成不利影响。鉴于六六六、滴滴涕等化学农药对生态环境的巨大危害，很多国家在1970年后开始禁用六六六和滴滴涕，我国也在1983年停止了它们在农业上的使用。[0003]即使已被禁用30多年，却时常发现它们的蛛丝马迹。六六六中的主要异构体α-六六六的氢解半衰期为26年，水解半衰期为64年，而它却是六六六所有异构体中最不稳定、降解速率最快的一种。另外，滴滴涕在自然环境中降解95%则需要30年。尽管它们已被禁用30多年，但是至今在我国部分地区的土壤、水体和生物中仍然维持着一定量的残留水平。这些残留在自然环境中的农药，不仅污染环境，还能通过生物的富集作用，危害动植物、甚至通过食物链危害人类健康。[0004]工业大麻(Hemp)的是指THC(四氢大麻酚)含量低于0.3%的大麻，工业大麻中的点，大麻素类物质主要通过大麻花叶提取而得，如果种植土壤、水体中存在六六六、滴滴涕农药残留，则有可能通过生物富集作用富集于大麻植株中，进而可能存在大麻提取物中，危害人体健康。因此有必要开发大麻花叶中六六六、滴滴涕残留的检测方法，确定大麻花叶中是否有六六六滴滴涕残留及其含量，但目前未见相关文献报道。发明内容[0005]本方法用正己烷超声提取六六六、滴滴涕，弗罗里硅土固相萃取小柱净化，用配备电子捕获检测器(ECD)的气相色谱仪检测，外标法定量。能够准确测定工业大麻花叶中六六一种测定工业大麻花叶中六六六、滴滴涕残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：①样品的采集：新鲜工业大麻花叶采集后，60℃下烘干(水分含量不超过10%),并过60[0007]②样品的前处理：称取1g样品于50mL具塞锥形瓶中，精烷，至于超声波发生器中，提取30min,加入2g无水硫酸钠振荡，转移至50mL离心管中，5烷预淋洗弗罗里硅土固相萃取小柱。将浓缩液转移上柱，即刻开始收集流出组分。取10mL正己烷分多次清洗浓缩瓶内壁，并转移上柱，流出组分合并收集。再取5mL正己烷淋洗小柱，流出组分合并收集。在旋转蒸发仪上浓缩至1mL,过滤，供气相色谱测定。[0008]③标准工作溶液的配置：配制八种六六六、滴滴涕混合标准工作溶液浓度分别约[0009]④利用GC-ECD对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品处理液进行测定，确认在目标物出峰时间处是否出峰，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品中待测组分的浓度，进而计算得其含量。a.色谱柱为石英弹性毛细管柱HP-5(30m×0.32mm×0.25μm),柱温在50℃保持1min后，先以25℃/min程序升温至150℃,再以5℃/min程序升温至260℃,后以10℃/min程序升温至290℃,保持15min。[0011]b.载气为氮气，恒流模式，流速为1.2mL/min。[0012]c.进样口温度210℃,不分流进样，进样量2μL。[0013]d.检测器为电子捕获检测器(ECD),温度为300℃。[0015]进一步的，步骤(1)中所述正己烷为色谱纯，无水硫酸钠为优级纯。[0016]进一步的，步骤(1)所述超声功率为250W,工作频率为40kHz。[0017]进一步的，步骤(1)中所述过滤所用滤膜为0.45μm的有机系针头滤膜。[0018]进一步地，所述标准对照品工作溶液配置方法为：①单一标准储备液：分别称取0.01g,每种农药标准品(纯度大于99%)到各自的10mL容量瓶中，精确至0.0001g,用正己烷稀释定容，配制成浓度约为1000μg/mL的单一农药标准储备液。[0019]②混合储备液：移取各农药单一标准储备液1mL于100mL容量瓶中，用正己烷稀释定容，得到各农药标准品浓度约为10μg/mL的混合储备液。[0020]③校准曲线：将混合储备液逐级稀释为500ng/mL、250ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、[0021]本发明的优点：①本发明建立了一种利用GC-ECD检测工业大麻花叶中六六六、滴滴涕残留量的方法，为确定工业大麻花叶中是否存在六六六、滴滴涕残留，以及残留量快速检测提供科学依据。[0022]②本方法操作简单易行，稳定性好，准确性高。附图说明[0023]图1六六六、滴滴涕标准对照品图谱。[0024]图2实施例1样品处理液图谱。6具体实施方式[0025]以下实施例仅是对本发明予以解释说明，并未对本发明的保护范围进行任何限制。对于本领域技术人员而言，凡未脱离本发明技术精神所作的同等实施方式或变更均在本发明的保护范围之内。[0026]实施例1工业大麻花叶中六六六、滴滴涕残留的测定步骤：(1)样品的采集：新鲜工业大麻花叶采集后，60℃下烘干(水分含量不超过10%),并过60[0027](2)样品的前处理：称取1g样品于50mL具塞锥形瓶中，精确至0.01g,做两个平行样。加入10mL正己烷，至于超声波发生器中，提取30min,加入2g无水硫酸钠振荡，转移至50mL离心管中，10000r/min下离心10min,取上清液5mL左右。取5mL正己烷预淋洗弗罗里硅土固相萃取小柱。将浓缩液转移上柱，即刻开始收集流己烷淋洗小柱，流出组分合并收集。在旋转蒸发仪上浓缩至1mL,用0.45μm的有机系针头滤DDE、p,p'-DDD、p,p'-DDT、o,p'-DDT的混合标准工作溶液浓度分别约为1ng/mL、5ng/mL、[0029]①单一标准储备液：分别称取0.01g八种农药标准品(a-六六六、β-六六六、γ-六0.0001g,用正己烷稀释定容，配制成浓度约为1000μg/mL的单一农药标准储备液。[0030]②混合储备液：移取各农药单一标准储备液1mL于100mL容量瓶中，用正己烷稀释定容，得到各农药标准品浓度约为10μg/mL的混合储备液。[0031]③混合标准工作溶液：将混合储备液逐级稀释为500ng/mL、250ng/mL、100ng/mL、[0032](4)利用GC-ECD对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品处理液进行测定，确认在目标物出峰时间处是否出峰，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标①色谱柱为石英弹性毛细管柱HP-5(30m×0.32mm×0.25μm),柱温在50℃保持1min后，先以25℃/min程序升温至150℃,再以5℃/min程序升温至260℃,后以10℃/min程序升温至290℃,保持15min。[0036]④检测器为电子捕获检测器(ECD),温度为300℃。[0037]六六六、滴滴涕各标准工作溶液的线性方程、相关系数见表1。[0038]表1六六六、滴滴涕的线性方程、相关系数化合物线性方程7实施例1样品检测结果见表2。[0039]表2实施例1样品检测结果物质含量(mg/kg)[0040]实验例加标回收及重复性实验选用空白样品(样品中本身不含目标物),加标后进行方法回收率验证。加标量为0.2mg/kg,添加方法是使用已知浓度的混合标准溶液加入空白试样，平衡24h后，按照实施例1方法进行提取、净化、检测。做6个平行样，得到样