CN114478455A 一种大麻黄酮类化合物的制备方法 （德义制药有限公司）

(19)国家知识产权局(71)申请人德义制药有限公司地址650000云南省昆明市西山区昆明宏盛达月星商业中心1-2幢2幢单元9层916室(72)发明人罗军禄牟洪涛杜业松谭昕王曙宾张平平蓝蓝(74)专利代理机构北京领科知识产权代理事务所(特殊普通合伙)11690专利代理师张丹(54)发明名称一种大麻黄酮类化合物的制备方法本发明公开了一种大麻黄酮类化合物的制备方法，此制备方法具有原料价廉易得、反应步骤少、生产周期短、操作简便等优点。该方法包括：先将4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮和碳酸二乙酯(DEC)在碱性条件下缩合得到4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯；再将1,3,5-三羟基苯与溴代异戊烯在碱性条件下发生得到2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯；最后将4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯和2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯在高温下缩合生成大麻黄酮B和/或大麻黄酮B异构体，再经分离纯化得到大麻黄酮B纯品和大麻黄21.一种大麻黄酮类化合物的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：反应得到大麻黄酮类化合物；所述大麻黄酮类化合物的结构为通式I:优选地，R₂为羟基；优选地，R4为羟基；优选地，R₇为羟基；优选地，R6为甲氧基；优选地，R₃2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：将和碳酸二乙酯在碱性条件下缩合得到卤代物(R将将3所述大麻黄酮类化合物的结构为通式Ⅱ:I烯基。3.根据权利要求1-2任一项所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯；步骤(2)将1,3,5-三羟基苯和溴代异戊烯在碱性条件下反应得到2-异戊烯基-1,3,5-步骤(3)将4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯与2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯反应得到大麻黄酮B和/或大麻黄酮B异构体。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)包括4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮与碳酸二乙酯反应的步骤；所述反应是在无氧的环境下进行的；所述反应是在碱性5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)无氧的环境为惰性气体保护的反应环境；所述碱为无机碱；所述无机碱与4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮的质量摩尔比为50-1000g/mol;所述4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮与碳酸二乙酯的摩尔比为1:3-3:1;所述反应温度为80-130℃;所述反应时间为2-12h;所述4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮是滴加到碳酸二乙酯中的。6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)包括如下步骤：在惰性气甲氧基苯乙酮与甲苯的混合液，搅拌，反应，然后将反应液经后处理得到4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯；所述后处理包括淬灭步骤；所述淬灭包括：向反应容器中加入酸调整混合液pH=4.0-7.0;所述酸为无机酸，选自：醋酸的无机酸纯品或其水溶液中的一种或多种的混合物。7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)包括1,3,5-三羟基苯与溴代异戊烯反应的步骤，所述反应是在碱性条件下进行的；所述反应体系中还包括溶剂，所48.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的碱为无机碱；所述无机碱与溴代异戊烯的质量摩尔比为50-1000g/mol;所述1,3,5-三羟基苯与溴代异戊烯的摩尔比为1:1-3:1;所述反应温度为0-25℃;所述反应时间为8-24h;所述溴代异戊烯是滴加到1,3,5-三羟基苯中的。9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)包括如下步骤：向反应容然后将反应液经后处理得到2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯；所述后处理包括淬灭步骤；所述淬灭步骤包括：向反应容器中加入淬灭溶剂，再加入酸调整混合液的pH=4.0-所述酸为无机酸，选自：盐酸的无机酸纯品或其水溶液中的一种或多种的混合物。10.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)包括4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯与2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯反应的步骤，所述反应是在无氧的环境下进行的。11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)无氧的环境为惰性气体保护的反应环境；所述反应温度为150-230℃;所述反应时间为2-8h;所述4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯与2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯的摩尔比为12.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)包括如下步骤：在惰性气体保护下，向反应容器中加入4’-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯和2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯，搅拌，加热，反应，然后将反应液经后处理得到大麻黄酮B和/或大麻黄酮B异构13.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：将4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮和碳酸二乙酯在碱性条件下缩合得到4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯；向反应容器中加入水和氢氧化钾，搅拌，再加入1,3,5-三羟基苯，降温，滴加溴代异戊在惰性气体保护下，向反应容器中加入4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯和2-异戊黄酮B异构体。14.一种4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯在制备化合物中的应用，其特征在于，所述的化合物为大麻黄酮类化合物；优选地，所述大麻黄酮类化合物为大麻黄酮B和/或大麻黄酮B异构体。5一种大麻黄酮类化合物的制备方法技术领域[0001]本发明属于化学合成领域，具体涉及一种大麻黄酮类化合物的制备方法，特别是大麻黄酮B和大麻黄酮B异构体的制备方法。背景技术[0002]200多种大麻生物活性化合物中，大麻素和萜烯一直是最受关注的，但是大麻还产生了另一种重要化合物——大麻黄酮类化合物，它们约占这些已知化合物的10%,其中约有20种已知存在于大麻中，这些类黄酮没有精神活性。[0003]大麻黄酮B(CannflavinB)早在1985年就已经被研究证实具有抗炎作用，且抗炎效果是乙酰水杨酸(以阿司匹林的形式出售)高出近30倍。与其他止痛药相比，该成分不会让患者对药物产生依赖性，发生上瘾的风险。[0004]Moreau等在FlavonoidDerivativeofCannabisDemonstratesTherapeuticPotentialinPreclinical.Front.Oncol,2019,9:660)报道了研究人员使用色谱法，从牙买加一种地方性大麻(CannabisSativaL.)菌株中发现的大麻黄酮B中，提取了一种新黄酮类化合物，大麻黄酮B异构体(Caflanone或FBL-03G或IsocannflavinB),它是大麻黄酮B的异构体。研究人员先后进行了体外实验和体内实验。体内实验结果显示，在使用智能放射治疗生物材料持续提供的FBL-03G时，在胰腺癌动物模型中延迟局部和转移性肿瘤进展的治疗效果。与对照组相比，反复试验也显示胰腺癌动物的存活率显著增加。研究结果表明，大麻黄酮B异构体(Caflanone或FBL-03G或IsocannflavinB)在胰腺癌治疗中具有重要的治疗潜力，包括放射增敏和肿瘤转移治疗潜力。这些结果为进一步研究优化临床实验的治疗结果提供了依据。2019年9月FDA授予大麻黄酮B异构体(Caflanone或FBL-03G或IsocannflavinB)孤儿药[0005]大麻植物中的类黄酮含量远小于1%,平均小于0.14%,大麻中的大麻黄酮B的含量是极低的，大麻黄酮B异构体(Caflanone或FBL-03G或IsocannflavinB)的含量就更低了。因此，单纯依靠大麻植物提取来获取这些成分是不可行的。研究人员目前正在基于生物系统致力于制备这些活性因子，这将为大麻黄酮创造了大量的机会。[0006]Rea等在BiosynthesisofcannflavinsAandBfromCan([J].Phytochemistry,2019,134,162-171)报道了通过使用苜蓿中华根瘤菌的芳香异戊二烯基转移酶催化二甲基烯丙基二磷酸，合成大麻黄酮B。但是该生物合成的方法成本高且不易工业放大。[0007]专利文献WO2017091837公开了一种以2,4,6-三羟基苯乙酮为起始反应物，使用化学合成已知的技术进行合成，得到大麻黄酮类化合物的主链，再经过共轭闭环形成三环结构，最后进行一系列酶促修饰得到大麻黄酮B和黄酮类化合物。[0008]Minassi等在ARegiodivergentSynthesisofRingAC-Prenylflavones.([J].0rg.Lett.,2008,10(11),2267-2270)报道了利用保护基策略和改进的Robinson黄酮6合成法，在温和的条件下，将异戊二烯化的二甲硅烷基苯甲酮区域选择性的合成大麻黄酮B和/或大麻黄酮B异构体。[0009]LiWei等在RegioselectivesynthesisofC-prenylatedflavonoidsviaintramolecular[1,3]or[1,5]shiftreactioncatalyzedbyacidicclays.(.TetrahedronLetters,2019,60,151138)报道了以香叶木素或槲皮素为起始反应物，通过弗罗里硅土或蒙脱土K10催化异戊烯基类黄酮的分子内[1,3]或[1,5]转移反应，高效且区域选择性地合成大麻黄酮B和/或大麻黄酮B异构体。[0010]已经公开的化学合成方法存在合成步骤长、多步反应需要硅胶柱层析纯化、不易酮B和/或大麻黄酮B异构体的新方法。发明内容[0011]本发明提供了一种大麻黄酮类化合物的制备方法。此制备方法具有原料价廉易[0012]本发明的目的是提供一种大麻黄酮类化合物的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：[0013]将和碳酸二乙酯在碱性条件下缩[0014]将和卤代物(R₃-X)在碱性条件下反应得到[0016]所述大麻黄酮类化合物的结构为通式I:7[0023]将和碳酸二乙酯在碱性条件下缩[0024]将和卤代物(R₃-X)在碱性条件下反应得到[0025]将反应得到大麻黄酮类化合物；[0026]所述大麻黄酮类化合物的结构为通式Ⅱ:异戊烯基。[0031]本发明的目的还在于提供一种以1,3,5-三羟基苯和4’-羟基-3’-甲氧基苯乙酮为起始原料制备大麻黄酮B和/或大麻黄酮B异构体的方法，所述方法包括：[0032]步骤(1)将4’-羟基-3’-甲氧基苯乙酮和碳酸二乙酯在碱性条件下缩合得到4’-羟基-3’-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯；[0033]步骤(2)将1,3,5-三羟基苯和溴代异戊烯在碱性条件下发生C烷基化反应得到2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯；[0034]步骤(3)将步骤(1)得到的4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯和步骤(2)得到的2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯在高温下缩合生成大麻黄酮B和/或大麻黄酮B异构体，再经分离纯化得到大麻黄酮B纯品和大麻黄酮B异构体纯品。[0035]步骤(2)反应方程如下：8为反应体系中包括碱，如无机碱，所述无机碱选自：氢氧化钾的无机碱纯品或其水溶液中的一种或多种的混合物；在本发明的一个实施例中，所述无机碱为氢氧化钾。[0038]更优选地，所述碱与溴代异戊烯的质量摩尔比为50-1000g/mol,进一步优选为100-150g/mol,进一步地，碱与溴代异戊烯的质量摩尔比为100g/mol、110g/mol、120g/mol、本发明的一个实施例中，所述溶剂为水。[0040]优选地，所述步骤(2)中，1,3,5-三羟基苯与溴代异戊烯的摩尔比为1:1-3:1,进一[0041]优选地，所述步骤(2)中，反应温度为0-25℃,进一步地，反应温度为0℃、5℃、10[0042]优选地，所述步骤(2)中，反应时间为8-24h,进一步地，反应时间为8h、12h、16h、[0043]优选地，所述步骤(2)中，所述溴代异戊烯是[0044]在本发明的一个实施例中，所述步骤(2)包括如下具体步骤：向反应容器中加入水液经后处理得到2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯。[0046]更优选地，所述淬灭包括如下具体步骤：向反应容器中加入淬灭溶剂，再加入酸调整混合液的pH=4.0-7.0。或多种；在本发明的一个实施例中，所述淬灭溶剂为乙酸乙酯。[0048]更优选地，所述酸为无机酸，选自：盐酸的无机酸纯品或其水溶液中的一种或多种[0049]优选地，所述后处理在淬灭步骤后还包括萃取步骤。或多种；在本发明的一个实施例中，所述萃取溶剂为乙酸乙酯。[0051]更优选地，所述萃取的温度为5-40℃,进一步优选为15-25℃。[0052]在本发明的一个实施例中，所述萃取步骤包括如下具体步骤：向反应液中加入萃[0053]优选地，所述后处理在萃取步骤后还包括蒸馏步骤；更优选地，所述蒸馏步骤包括常压蒸馏和减压蒸馏步骤。[0054]优选地，所述减压蒸馏温度为20-50℃,真空度为-0.1～-0.05MPa。[0055]优选地，所述后处理在蒸馏步骤后还依次包括柱层析步骤；更优选地，所述柱层析步骤包括正相柱层析和反相柱层析。[0056]更优选地，所述柱层析为正相柱层析，所述柱层析中的洗脱剂溶液选自：石油醚、剂溶液为石油醚(PE)和乙酸乙酯(EA),洗脱剂的配比为PE:EA=8:1→2:1。9各步骤的具体操作和条件如本发明上述。[0058]在本发明的一个具体实施例中，所述2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯的制备方法包括如下步骤：[0060](2-2)控制步骤：向(2-1)的混合液中加入乙酸乙酯，并加入盐酸调节pH=4.0-[0061](2-3)将步骤(2-2)的浓缩物经柱层析(硅胶200-300目，PE:EA=8:1→2:1)分离，得到橙色油状物2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯。[0062]步骤(3)反应方程式如下：体保护的反应环境；在本发明的一个实施例中，所述反应环境为氮气保护的反应环境。[0065]优选地，所述步骤(3)中，反应发明的一个实施例中，所述反应时间为3h。[0067]优选地，所述步骤(3)中，4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯与2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯的摩尔比为1:2-3:1,进一步地，4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯与2-异戊[0068]在本发明的一个实施例中，所述步骤(3)包括如下具体步骤：向反应容器中加入后将反应液经后处理得到大麻黄酮B和/或大麻黄酮B异构体。[0069]优选地，所述后处理包括柱层析步骤；更优选地，所述柱层析步骤包括正相柱层析和反相柱层析。[0070]更优选地，所述柱层析步骤包括：将反相硅胶柱层析。石油醚和乙酸乙酯，洗脱剂的配比为PE:EA=10:1→2:1,所述反相硅胶柱层析的洗脱剂溶液为水和甲醇，洗脱剂的配比为水：甲醇=8:2→3:7。[0072]优选地，所述后处理在柱层析步骤后还包括重结晶步骤；更优选地，所述的重结晶步骤包括溶解和降温析出步骤。[0073]更优选地，所述溶解的溶剂选自：甲苯、甲醇、丙酮、水等中的一种或多种的混合[0074]更优选地，所述溶解的温度为40-100℃;进一步优选为60-100℃;在本发明中的一个实施例中，所述溶解温度为65℃。[0075]更优选地，所述降温析出步骤包括降温至1-30℃;在本发明的一个实施例中，所述降温析出步骤包括降温至18-22℃。[0076]在本发明的一个实施例中，所述重结晶步骤包括：加入溶剂，升温至40-100℃,固[0077]优选地，所述后处理在重结晶步骤后还包括干燥步骤。[0078]更优选地，所述干燥步骤为真空干燥；进一步优选地，其真空度为-0.08--[0079]更优选地，所述干燥温度为45-65℃。各步骤的具体操作和条件如本发明上述。[0081]在本发明的一个具体实施例中，所述大麻黄酮B和/或大麻黄酮B异构体的制备方[0082](3-1)反应步骤：在氮气保护下，向反应容器中加入向反应容器中加入4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯和2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯，搅拌，加热至150-230℃,反应[0083](3-2)降至室温，混合液经过多次正相硅胶柱层析，再经过多次反相硅胶柱层析，产物蒸干；[0084](3-3)向步骤(3-2)所得蒸干物加入甲醇，升温至65℃,固体全部溶解，降温至18-[0085](3-4)将步骤(3-3)所得滤饼在50-55℃下真空干燥。[0086]步骤(1)反应方程式如下：为反应体系中包括碱，如无机碱，所述无机碱选自：氢化钠的无机碱纯品或石蜡油包裹的氢化钠中的一种或多种的混合物；在本发明的一个实施例中，所述无机碱为石蜡油包裹的氢化钠。[0089]更优选地，所述碱与4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮的质量摩尔比为50-1000g/mol,进一步优选为100-150g/mol,进一步地，碱与4'-羟基-3’-甲氧基苯乙酮的质量摩尔比为本发明的一个实施例中，所述溶剂为甲苯。[0091]优选地，所述步骤(1)中，4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮与碳酸二乙酯的摩尔比为1:3-3:1,进一步地，4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮与碳酸二乙酯的摩尔比为1:3、1:2、1:1、1.5:11体保护的反应环境；在本发明的一个实施例中，所述反应环境为氮气保护的反应环境。12h,最优选为4h。[0095]优选地，所述步骤(1)中，所述4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮是滴加到碳酸二乙酯中[0096]在本发明的一个实施例中，所述步骤(1)包括如下具体步骤：在氮气保护下，向反应容器中加入60%NaH和甲苯，搅拌，再加入碳酸二乙酯，加热，滴加4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮与甲苯的混合液，搅拌，反应，然后将反应液经后处理得到4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯。[0098]更优选地，所述淬灭包括如下具体步骤：向反应容器中加入酸调整混合液pH=[0099]更优选地，所述酸为无机酸，选自：醋酸的无机酸纯品或其水溶液中的一种或多种[0100]优选地，所述后处理在淬灭步骤后还包括萃取步骤。或多种；在本发明的一个实施例中，所述萃取溶剂为乙酸乙酯。[0102]更优选地，所述萃取的温度为5-40℃,进一步优选为15-25℃。[0103]在本发明的一个实施例中，所述萃取步骤包括如下具体步骤：向反应液中加入萃[0104]优选地，所述后处理在萃取步骤后还包括蒸馏步骤；更优选地，所述蒸馏步骤包括常压蒸馏和减压蒸馏步骤。[0105]优选地，所述减压蒸馏温度为20-50℃,真空度为-0.1～-0.05MPa。[0106]优选地，所述后处理在蒸馏步骤后还依次包括洗涤；更优选地，所述洗涤溶剂选步骤的具体操作和条件如本发明上述。[0108]在本发明的一个具体实施例中，所述4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯的制备方法包括如下步骤：[0109](1-1)反应步骤：在氮气保护下，向反应容器中加入60%NaH和甲苯，搅拌，再加入[0110](1-2)控制步骤：向(1-1)的混合液中加入醋酸调节pH=4.0-7.0,再加入乙酸乙[0111](1-3)将步骤(1-2)的浓缩物加入正己烷，搅拌2-12h,过滤得到4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯。[0112]本发明还提供一种大麻黄酮类化合物的制备方法，其包含本发明上述2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯的制备步骤。[0113]本发明还提供一种4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯在制备化合物中的应用，所述的化合物为大麻黄酮B和/或大麻黄酮B异构体。[0114]优选地，所述4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯由如下步骤制备：将4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮和碳酸二乙酯在碱性条件下缩合得到4’-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙[0115]本发明中采用的原料价廉易得，合成路线简单，操作简便，生产周期短，合成成本具体实施方式[0116]应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。[0117]实施例1、4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯的合成[0119]反应瓶中加入60%NaH(6.00g,150mmol),氮气保护下，加入甲苯(60mL)和DEC(11.82g,100mmol),搅拌，加热回流。滴加4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮(12.82g,50mmol)的甲液(150mL),水相用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相依次用饱和氯化铵水溶液(100mL烷(50mL)搅拌过夜。过滤，得4’-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯(15.43g,93.9%),为橙黄[0120]实施例2、2-异戊烯基-1,3,5-三羟基苯的合成[0122]反应瓶中加入水(80mL)和氢氧化钾(4.