山东省部分地区规模化猪场伪狂犬病的流行病学调查与防控策略研究

山东省部分地区规模化猪场伪狂犬病的流行病学调查与防控策略研究一、引言1.1研究背景与意义山东省作为我国重要的农业大省，生猪养殖业在其农业经济中占据着举足轻重的地位。近年来，随着环保要求的逐步提高和市场竞争的日益加剧，山东生猪专业育肥模式逐渐走向成熟，“南繁北育”模式为山东的育肥场提供了稳定的仔猪来源。据相关数据显示，山东省生猪存栏量和出栏量均位居全国前列，年出栏生猪超过4000万头，占全国总出栏量的近10%，已然成为全国首个专业育肥大省。生猪专业育肥模式通过技术创新、分工协作与产业整合，不仅有效破解了传统养殖的多重困局，更构建起绿色高效的现代养殖体系，为全国生猪产业转型升级提供了可复制的“山东样本”。然而，在山东生猪养殖业蓬勃发展的背后，猪伪狂犬病的威胁始终如影随形。猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病毒引起的一种急性传染病，该病毒又称猪疱疹病毒I型。此疾病主要侵害哺乳仔猪、繁殖母猪等，可导致妊娠母猪流产、死胎，公猪不育，新生仔猪大量死亡，育肥猪呼吸困难、生长停滞等症状，是危害全球养猪业的重大传染病之一。特别是15日龄以内仔猪感染后的死亡率高达100%，断奶仔猪发病率为20%-40%，死亡率为10%-20%。倘若母猪群的伪狂犬疫苗免疫效果不佳，商品猪在5-15日龄时，会出现体温升高、呕吐腹泻等症状，用药对症治疗效果不理想，死亡率较高；在40-60日龄时，保育猪表现为采食量下降、体温升高、以腹泻为主，夹杂有部分猪表现呼吸困难等症状，仔猪整齐度差，药物治疗效果不明显。自2011年起，国内陆续有学者发现临床中流行的猪伪狂犬病毒发生了较大变异，大量经过猪伪狂犬病免疫的养猪场出现了伪狂犬疫情的暴发，给我国的养猪业造成了巨大的经济损失。山东作为养猪大省，同样难以幸免。一旦猪伪狂犬病在猪场中暴发，不仅会导致猪只的大量死亡和生长性能下降，增加养殖成本，还可能引发整个猪群的免疫力下降，使其他疾病更容易乘虚而入，进一步加重养殖损失。而且，由于生猪及其产品的流通，猪伪狂犬病的传播范围可能会不断扩大，对整个地区乃至全国的生猪产业安全构成严重威胁。因此，对山东省部分地区规模化猪场伪狂犬病进行流行病学调查具有至关重要的意义。通过深入了解猪伪狂犬病在山东省规模化猪场的流行现状，包括感染率、发病特点、传播途径等信息，可以为制定针对性的防控策略提供科学依据。这有助于及时发现疫情隐患，采取有效的防控措施，降低猪伪狂犬病的发生率和危害程度，保障山东省生猪养殖业的健康稳定发展，维护养殖户的经济利益，对于稳定全国生猪市场供应也具有重要的支撑作用。1.2国内外研究现状在国外，猪伪狂犬病的研究起步较早。自1902年Aujeszky首次报道该病以来，众多学者围绕猪伪狂犬病毒的生物学特性、致病机制、流行病学以及防控措施等方面展开了深入研究。在病毒生物学特性研究方面，明确了猪伪狂犬病毒属于疱疹病毒科α-疱疹病毒属，其基因组结构复杂，编码多种蛋白，这些蛋白在病毒的吸附、侵入、复制以及致病过程中发挥着关键作用。例如，gE蛋白是病毒的非必需糖蛋白，但其在病毒的毒力和传播过程中具有重要作用，缺失gE基因的疫苗株可用于区分疫苗免疫动物和野毒感染动物。在致病机制研究领域，国外学者通过大量的动物实验和细胞实验，揭示了猪伪狂犬病毒感染宿主后，如何通过逃避宿主的免疫防御机制，在体内进行复制和扩散，进而导致宿主出现一系列临床症状的过程。研究发现，病毒首先感染呼吸道上皮细胞，随后通过神经轴突逆行运输，侵入中枢神经系统，引发非化脓性脑炎，这是导致仔猪出现神经症状和高死亡率的主要原因。在流行病学研究方面，国外对猪伪狂犬病的流行规律、传播途径以及风险因素等进行了广泛的调查和分析。通过对不同地区、不同养殖规模猪场的监测数据进行分析，发现猪伪狂犬病在全球范围内均有分布，且在规模化养殖场中更容易传播和暴发。同时，明确了猪是该病的主要自然宿主，病毒可通过直接接触、空气传播、精液传播以及垂直传播等多种途径在猪群中传播。此外，养殖环境、猪群的免疫状态、饲养管理水平等因素也与猪伪狂犬病的发生和流行密切相关。在防控措施研究方面，国外已经建立了一套相对完善的猪伪狂犬病综合防控体系。疫苗接种是防控猪伪狂犬病的关键措施之一，目前国外已经研发出多种类型的疫苗，包括弱毒疫苗、灭活疫苗、基因工程疫苗等。其中，基因工程疫苗因其具有安全性高、免疫效果好、可鉴别诊断等优点，成为研究和应用的热点。除了疫苗接种，加强生物安全措施、严格的引种检疫制度以及定期的血清学监测等也是防控猪伪狂犬病的重要手段。通过实施这些综合防控措施，一些国家和地区已经成功地控制了猪伪狂犬病的流行，实现了该病的净化。在国内，猪伪狂犬病的研究也取得了丰硕的成果。特别是在2011年国内猪伪狂犬病毒出现变异，导致疫情大面积暴发后，国内学者加大了对该病的研究力度。在病毒变异研究方面，通过对国内不同地区流行的猪伪狂犬病毒株进行全基因组测序和分析，发现变异株与经典毒株在基因组序列上存在一定差异，这些差异主要集中在一些关键基因上，如gE、gB、gD等基因，这些基因的变异可能导致病毒的抗原性、毒力以及传播特性发生改变。在流行病学研究方面，国内学者对不同地区规模化猪场猪伪狂犬病的感染率、发病特点以及流行趋势等进行了大量的调查研究。研究结果表明，我国猪伪狂犬病的感染率在不同地区和不同养殖规模的猪场之间存在较大差异，总体呈现南方地区高于北方地区、规模化猪场高于散养户的特点。同时，发现近年来我国猪伪狂犬病的流行呈现出一些新的特点，如部分猪场出现了免疫失败的现象，即使接种了疫苗，猪群仍然会感染发病；一些地区的猪伪狂犬病疫情呈现出季节性和周期性的特点，在冬春季节和仔猪出生高峰期更容易暴发。在诊断技术研究方面，国内已经建立了多种快速、准确的猪伪狂犬病诊断方法，包括病毒分离鉴定、PCR检测技术、血清学检测技术等。其中，PCR检测技术因其具有快速、灵敏、特异性强等优点，成为目前临床上诊断猪伪狂犬病的常用方法之一。血清学检测技术则主要用于猪群的抗体监测和流行病学调查，常用的方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）、中和试验、乳胶凝集试验等。在防控策略研究方面，国内学者结合我国养猪业的实际情况，提出了一系列适合我国国情的猪伪狂犬病综合防控策略。在疫苗选择方面，建议根据猪场的实际情况，选择合适的疫苗类型和毒株，对于存在病毒变异的猪场，应优先选择针对变异株的疫苗。在免疫程序制定方面，强调要根据猪群的年龄、免疫状态以及疫病流行情况等因素，制定个性化的免疫程序，确保猪群能够获得有效的免疫保护。同时，加强生物安全措施，如严格的人员和车辆管理、定期的环境消毒、灭鼠灭虫等，也是防控猪伪狂犬病的重要环节。此外，通过建立种猪场的伪狂犬病净化体系，逐步淘汰阳性种猪，实现种猪群的净化，对于从源头上控制猪伪狂犬病的传播具有重要意义。尽管国内外在猪伪狂犬病的研究方面取得了显著进展，但仍存在一些不足之处。例如，在病毒变异机制研究方面，虽然已经发现了一些关键基因的变异，但对于这些变异如何导致病毒生物学特性改变的分子机制尚未完全阐明。在防控措施方面，虽然已经建立了综合防控体系，但在实际应用中，由于部分养殖场的生物安全意识淡薄、饲养管理水平低下等原因，导致防控措施难以有效落实，疫情仍然时有发生。此外，目前的疫苗虽然能够提供一定的免疫保护，但对于变异毒株的保护效果仍有待进一步提高。因此，针对山东省部分地区规模化猪场伪狂犬病的调查，将重点关注病毒的感染现状、流行特点以及疫苗免疫效果等方面。通过对这些方面的深入研究，进一步了解猪伪狂犬病在山东省规模化猪场的流行规律，分析防控工作中存在的问题，为制定更加有效的防控策略提供科学依据。同时，也将为丰富和完善猪伪狂犬病的流行病学研究以及防控技术体系做出贡献。1.3研究目标与内容本研究旨在全面且深入地了解山东省部分地区规模化猪场伪狂犬病的流行态势，精准剖析其传播因素，客观评估防控现状，进而为制定科学、高效的防控策略提供坚实的理论依据和丰富的数据支撑。具体研究内容如下：流行情况调查：对山东省内多个具有代表性地区的规模化猪场展开广泛调查，运用科学的抽样方法，采集猪只的血液、组织等样本，采用先进且成熟的实验室检测技术，如PCR检测技术、血清学检测技术等，精确检测猪伪狂犬病毒的感染情况，包括感染率、感染类型等关键指标。同时，详细记录不同猪场的地理位置、养殖规模、养殖模式、猪群结构等基础信息，深入分析这些因素与猪伪狂犬病流行之间的潜在关联，从而准确把握猪伪狂犬病在山东省部分地区规模化猪场的流行特征和分布规律。传播因素分析：从多个维度深入探究猪伪狂犬病在规模化猪场中的传播因素。在生物因素方面，重点研究猪伪狂犬病毒的传播特性，如病毒在不同猪群之间的传播途径、传播速度，以及不同年龄段猪只对病毒的易感性差异等；分析猪场中其他动物，如鼠类、鸟类等在病毒传播过程中可能扮演的角色。在环境因素方面，考察养殖环境的卫生状况，包括猪舍的清洁程度、通风条件、温湿度控制等对病毒传播的影响；研究养殖场周边环境，如是否靠近其他养殖场、交通要道等与病毒传播的关系。在管理因素方面，评估猪场的饲养管理水平，如饲料质量、饮水安全、养殖密度等对猪群免疫力和病毒传播的作用；分析猪场的防疫措施执行情况，如疫苗接种程序、人员和车辆进出管理、消毒制度落实等与病毒传播的关联。通过对这些传播因素的全面分析，明确猪伪狂犬病在规模化猪场传播的关键环节和主要影响因素。防控现状评估：对山东省部分地区规模化猪场现行的猪伪狂犬病防控措施进行系统评估。详细了解各猪场的疫苗接种情况，包括疫苗的种类、品牌、接种剂量、接种频率、免疫程序等，通过检测猪群的抗体水平，客观评价疫苗的免疫效果。同时，深入考察猪场的生物安全措施落实情况，如人员和车辆的进出管理是否严格，是否对进入养殖场的人员和车辆进行全面的消毒和隔离；环境消毒工作是否规范，是否定期对猪舍、养殖设备等进行彻底的消毒；病死猪的处理是否符合卫生标准，是否采取了无害化处理措施等。此外，还将评估猪场的疫病监测体系是否完善，是否能够及时发现和报告疫情，以及对疫情的应急处理能力是否到位等。通过对这些防控措施的综合评估，找出当前防控工作中存在的不足之处和亟待改进的地方。1.4研究方法与技术路线本研究综合运用多种研究方法，确保研究结果的科学性和可靠性。具体研究方法如下：血清学检测：在山东省选取具有代表性的地区，按照随机抽样的原则，从规模化猪场中采集猪只的血液样本。运用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测猪血清中的伪狂犬病毒抗体，包括gE抗体和gB抗体。gE抗体检测用于区分野毒感染猪和疫苗免疫猪，若检测出gE抗体阳性，则表明猪只感染了野毒；gB抗体检测用于评估猪群的免疫效果，通过检测抗体水平的高低，判断疫苗接种后猪群是否产生了有效的免疫应答。同时，采用中和试验对部分阳性样本进行进一步验证，以提高检测结果的准确性。中和试验是将待检血清与已知量的伪狂犬病毒混合，作用一定时间后接种到敏感细胞上，观察细胞病变情况，根据病毒感染力被中和的程度来确定血清中抗体的效价。问卷调查：设计详细的调查问卷，内容涵盖猪场的基本信息，如地理位置、养殖规模、养殖模式、猪群结构等；防疫措施相关信息，包括疫苗接种情况、免疫程序、生物安全措施落实情况，如人员和车辆进出管理、消毒制度、病死猪处理方式等；疫病发生情况，如是否发生过伪狂犬病疫情、发病时间、发病症状、发病率和死亡率等。通过现场发放问卷、电话访谈以及线上问卷平台等方式，对山东省部分地区规模化猪场的管理人员、兽医等进行调查，确保问卷的回收率和有效率。实地访谈：深入规模化猪场，与猪场的管理人员、兽医、饲养人员等进行面对面的访谈。了解他们在日常养殖过程中对猪伪狂犬病的认知程度、防控经验以及遇到的问题和困难。例如，询问他们对疫苗接种效果的看法，在生物安全措施执行过程中存在哪些实际困难，以及对疫病监测和预警的建议等。通过实地访谈，获取更直观、更深入的信息，为分析猪伪狂犬病的流行和防控情况提供参考。数据分析：运用统计学软件，如SPSS、Excel等，对采集到的数据进行整理和分析。计算猪伪狂犬病的感染率、发病率、死亡率等指标，并进行相关性分析，探究养殖规模、养殖模式、免疫程序等因素与猪伪狂犬病流行之间的关系。通过数据分析，找出影响猪伪狂犬病流行的关键因素，为制定防控策略提供科学依据。例如，通过相关性分析，判断养殖规模与感染率之间是否存在正相关或负相关关系，从而为不同规模猪场的防控措施制定提供针对性建议。本研究的技术路线如图1所示：前期准备：查阅相关文献资料，了解猪伪狂犬病的研究现状和防控技术；设计调查问卷和采样方案；准备实验所需的试剂、仪器设备等。样本采集：在山东省部分地区的规模化猪场，按照抽样方案采集猪只的血液、组织等样本；同时，发放调查问卷，收集猪场的相关信息。实验室检测：对采集的血液样本进行血清学检测，包括ELISA检测和中和试验；对组织样本进行病毒分离鉴定和PCR检测，确定猪只的感染情况。数据分析：对检测结果和问卷调查数据进行整理和分析，计算相关指标，分析猪伪狂犬病的流行特征和传播因素，评估防控现状。结果讨论：根据数据分析结果，讨论猪伪狂犬病在山东省部分地区规模化猪场的流行情况、防控工作中存在的问题，并提出相应的防控建议。撰写报告：撰写研究报告，总结研究成果，为山东省规模化猪场猪伪狂犬病的防控提供科学依据。[此处插入技术路线图][此处插入技术路线图]图1研究技术路线图二、猪伪狂犬病概述2.1病原学特征猪伪狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）属于疱疹病毒科α-疱疹病毒属，是引发猪伪狂犬病的病原体。该病毒粒子呈球形，直径约为150-300纳米，具备囊膜和核衣壳结构。囊膜是病毒粒子的最外层结构，由脂质双层和镶嵌其中的糖蛋白组成，表面存在呈放射性状紧密排列的纤突。这些纤突在病毒与宿主细胞的识别、吸附以及融合过程中发挥着关键作用，是病毒感染宿主细胞的重要结构基础。核衣壳则由蛋白质构成，包裹着病毒的基因组，对基因组起到保护作用，确保病毒遗传物质的稳定性。PRV的基因组为线性双链DNA结构，长度约为150kbp。其基因组包含多个基因，编码约100种病毒蛋白，这些蛋白在病毒的生命周期中各自承担着独特的功能。根据编码糖蛋白是否为病毒复制所必需，可将其分为必需糖蛋白和非必需糖蛋白。其中，gB、gC、gD等糖蛋白属于必需糖蛋白，在病毒的吸附、侵入和细胞间传播过程中不可或缺。gB蛋白能够介导病毒与宿主细胞的融合，促进病毒进入细胞内部；gC蛋白参与病毒与宿主细胞表面受体的结合，增强病毒的感染能力；gD蛋白则在病毒的侵入过程中发挥关键作用，与宿主细胞表面的特定受体相互作用，启动病毒的侵入程序。而gE、gI等糖蛋白为非必需糖蛋白，虽然它们不参与病毒的基本复制过程，但在病毒的毒力、传播以及免疫逃逸等方面具有重要作用。gE糖蛋白由US8基因编码，其第125位缬氨酸和第126位半胱氨酸对PRV的生物学功能至关重要。gE和gI糖蛋白可形成异源二聚体复合物，存在于感染细胞膜和病毒包膜中，参与PRV对神经系统的侵袭及其传播过程。研究表明，缺失gE基因的疫苗株可用于区分疫苗免疫动物和野毒感染动物，这为猪伪狂犬病的防控和监测提供了重要的技术手段。在理化特性方面，PRV在低温或潮湿环境下抵抗力较强，在pH6-8的环境中可长期存活。这使得病毒在适宜的环境条件下能够长时间保持感染活性，增加了传播的风险。然而，在干燥或高温环境下，特别是处于光照条件下，PRV易失活。同时，该病毒对有机溶剂较为敏感，常见的消毒剂如过氧乙酸、烧碱、新洁尔灭等都能够有效地将其灭活。了解PRV的这些理化特性，对于制定科学合理的消毒措施和防控策略具有重要意义。在养殖场的日常管理中，可以通过控制环境条件，如保持猪舍的干燥、通风良好，定期进行消毒等措施，减少病毒的存活和传播机会，从而降低猪伪狂犬病的发生风险。2.2流行病学特点2.2.1传染源猪伪狂犬病的主要传染源是隐性感染猪和带毒鼠类。在山东省规模化猪场中，隐性感染猪在外表上通常无明显症状，但体内携带猪伪狂犬病毒，可长期持续排毒。研究表明，带毒猪的口鼻分泌物、尿道和生殖道分泌物以及乳汁中均含有大量病毒，这些病毒能够通过多种途径排出体外，成为病毒传播的重要隐患。例如，当带毒猪与健康猪在同一猪舍饲养，其口鼻分泌物中的病毒可通过空气、接触等方式传播给健康猪，从而引发感染。鼠类在猪伪狂犬病的传播中也扮演着重要角色。鼠类具有较强的活动能力和繁殖能力，能够在猪场的各个区域活动。它们可能通过接触感染猪或被病毒污染的环境而携带病毒，然后在猪场中四处乱窜，将病毒传播到不同的猪舍和猪群中。有研究发现，在一些鼠害严重的猪场，猪伪狂犬病的发病率明显高于鼠害控制较好的猪场，这充分说明了鼠类作为传染源对猪伪狂犬病传播的影响。2.2.2传播途径猪伪狂犬病的传播途径较为多样，主要包括直接接触传播、空气传播和垂直传播。在山东省规模化猪场中，直接接触传播是最为常见的传播方式之一。带毒猪与易感猪直接接触，如相互舔舐、争斗等，病毒可通过猪的呼吸道黏膜、消化道或损伤的皮肤等途径侵入易感猪体内，从而导致感染。例如，当一头带毒仔猪与同窝其他仔猪密切接触时，很容易将病毒传播给其他仔猪，使整窝仔猪感染发病。空气传播也是猪伪狂犬病在规模化猪场中传播的重要途径之一。猪伪狂犬病毒可在空气中形成气溶胶，通过空气流动传播到较远的距离。特别是在猪舍通风不良、饲养密度过高的情况下，空气传播的风险会显著增加。研究表明，在低温潮湿的环境中，猪伪狂犬病毒在空气中的存活时间更长，毒力更强，更容易通过空气传播感染猪群。例如，在冬季，一些规模化猪场为了保暖而减少通风量，导致猪舍内空气污浊，病毒在空气中积聚，一旦有带毒猪存在，病毒就很容易通过空气传播给其他猪只。垂直传播是指带毒妊娠母猪将病毒经胎盘感染胎儿，或者在分娩过程中，仔猪通过接触产道分泌物而感染病毒。这种传播方式可导致新生仔猪发病，窝发病率高达100%，15日龄内仔猪发病死亡率更是达到100%。在山东省部分规模化猪场中，由于种猪群的净化工作不完善，存在一定比例的带毒母猪，这为垂直传播提供了条件。例如，一些猪场在引种过程中，没有对种猪进行严格的检疫，引入了带毒种猪，这些带毒种猪在妊娠和分娩过程中，将病毒传播给了后代，导致新生仔猪出现严重的发病症状。此外，养殖场内的工作人员和器具也可能成为间接病毒携带载体，在场内传播病毒。工作人员在不同猪舍之间走动，如果没有做好消毒措施，其衣物、鞋子等可能携带病毒，从而将病毒传播到其他猪舍。养殖器具，如饲料槽、饮水器等，如果被病毒污染后没有及时清洗和消毒，也会成为病毒传播的媒介。2.2.3易感动物猪是猪伪狂犬病病毒的自然宿主，不同品种、日龄、性别的猪均对该病毒易感。然而，不同年龄段的猪感染后的发病症状和死亡率存在显著差异。在山东省规模化猪场中，新生仔猪和哺乳仔猪的易感性最高，感染后病情最为严重。15日龄以内的仔猪感染后，常表现出高热、呕吐、腹泻、神经症状等，死亡率可高达100%。这是因为新生仔猪和哺乳仔猪的免疫系统尚未发育完全，对病毒的抵抗力较弱，一旦感染，病毒很容易在体内大量复制，引发严重的病理变化。断奶仔猪的易感性次之，发病率通常为20%-40%，死亡率低于20%。断奶仔猪在断奶后，母源抗体水平逐渐下降，自身免疫系统又尚未完全建立，此时容易受到病毒的侵袭。感染后的断奶仔猪常出现神经抽搐、呕吐、腹泻或头颈歪斜等症状，如果再受到胸膜肺炎放线菌和巴氏杆菌等细菌的继发感染，死亡率会进一步升高。育肥猪和成年猪的易感性相对较低，感染后大多呈隐性感染或症状较轻。育肥猪感染后，临床上主要表现为精神萎靡、体温升高、食欲减退或废绝、增重减慢，并出现不同程度的呼吸道症状，如呼吸减弱、打喷嚏或咳嗽等。成年猪感染后，一般无明显的临床症状，仅表现为体温轻微升高，伴有轻微呼吸道症状，很快可自行康复，但会终生带毒，成为潜在的传染源。2.2.4流行季节猪伪狂犬病在山东省规模化猪场中一年四季均可发病，但以寒冷潮湿的冬春季节尤为多发，产仔旺季也是发病高峰期。在冬春季节，气温较低，猪舍为了保暖往往通风不良，导致猪舍内空气污浊，湿度增加，这种环境有利于猪伪狂犬病毒的存活和传播。同时，冬春季节猪群的抵抗力相对较弱，容易受到病毒的侵袭。产仔旺季时，母猪的应激反应较大，免疫力下降，容易感染猪伪狂犬病毒。而且，新生仔猪和哺乳仔猪在这个时期数量较多，它们的易感性高，一旦有带毒母猪存在，很容易引发疫情的暴发。此外，在产仔旺季，猪场的人员和车辆流动频繁，增加了病毒传播的机会。例如，一些猪场在产仔旺季会聘请临时工作人员帮忙，这些人员如果没有经过严格的培训和消毒，可能会将病毒带入猪场，导致疫情的传播。2.3临床症状与病理变化猪伪狂犬病在不同生长阶段的猪只身上呈现出各异的临床症状和病理变化，这对于疫病的准确诊断和有效防控至关重要。新生仔猪感染猪伪狂犬病毒后，病情往往极为严重。在山东省部分规模化猪场的调查中发现，新生仔猪多在出生后3-5天发病，体温急剧升高，可达41℃以上，精神极度萎靡，常蜷缩于角落，对外界刺激反应迟钝。同时，伴有明显的呕吐和腹泻症状，呕吐物多为白色黏液，腹泻物呈黄色水样，且有恶臭味。发病后第一天，神经症状逐渐显现，表现为肌肉强烈抽搐、震颤，继而出现共济失调，站立不稳，呈劈叉姿势，四肢不断划动，似游泳状，口吐白沫，最终因呼吸困难引起昏迷直至死亡，死亡率高达100%。断奶仔猪感染后的症状相对新生仔猪略轻，但仍较为明显。在调查的猪场中，断奶仔猪发病率通常为20%-40%。它们常出现神经抽搐症状，头部不时晃动，身体局部肌肉痉挛；同时伴有呕吐、腹泻或头颈歪斜等症状，腹泻物多为灰白色稀便。若受到胸膜肺炎放线菌和巴氏杆菌等细菌的继发感染，病情会迅速恶化，死亡率明显升高。部分幸存的仔猪也会因生长发育受阻，成为僵猪，严重影响养殖效益。生长肥育猪感染猪伪狂犬病毒后，临床上主要表现为精神萎靡，常趴在地上，不愿活动。体温升高至40℃-41℃，食欲减退或废绝，采食量大幅下降。增重明显减慢，生长速度比正常猪只慢20%-30%。同时，出现不同程度的呼吸道症状，呼吸频率加快，可达每分钟40-60次，呼吸减弱，伴有打喷嚏或咳嗽，严重时呈腹式呼吸。部分猪只还可能出现皮肤发红、发绀等症状。妊娠母猪感染猪伪狂犬病毒后，常发生流产、产木乃伊胎或产死胎等繁殖障碍。在山东省的规模化猪场中，这一现象较为常见，严重影响了猪场的繁殖效率。流产前兆通常不明显，母猪的食欲和精神状况基本无变化，部分母猪在流产时眼睛较为湿润，流产后食欲恢复较快。此外，后备母猪感染后还可能表现为神经症状、厌食、惊厥、视觉消失或眼部炎症等症状，同时出现不发情、配不上种，反复配种多次均无法配上的情况，延误配种期。公猪感染猪伪狂犬病毒后，主要侵害生殖系统。表现为睾丸和附睾肿胀、疼痛，质地变硬，随后逐渐萎缩，精液质量下降，精子活力降低，数量减少，畸形率增加，丧失种用能力。在病理变化方面，对病死猪进行剖检可见多种典型病变。肾脏肿大，表面布满散在的出血点，犹如繁星点缀；肺脏同样肿大，有明显的出血点，有时伴有小叶性肺炎，肺泡内充满炎性渗出物；肝脏和脾脏表面有散在的灰白色坏死点，大小约1-2毫米；肠系膜淋巴结肿大、出血，切面呈暗红色；有神经症状的病例，脑膜水肿、充血、出血明显，脑脊液增多，质地混浊；流产的胎儿臀部皮肤及脑部有出血点。这些病理变化为猪伪狂犬病的诊断提供了重要的依据，通过对病死猪的剖检观察，可以初步判断猪只是否感染猪伪狂犬病毒，为进一步的实验室诊断和防控措施的制定提供线索。2.4诊断方法猪伪狂犬病的准确诊断对于疫情的有效防控至关重要。目前，主要的诊断方法包括病毒分离鉴定、血清学检测和分子生物学检测等，每种方法都有其独特的原理和应用场景。病毒分离鉴定是诊断猪伪狂犬病的经典方法之一，也是最为可靠的诊断手段，堪称诊断的“金标准”。其原理是利用猪伪狂犬病毒能够在敏感细胞上生长繁殖并产生细胞病变的特性。具体操作时，常采集患病动物的多种病料组织，如脑、心、肝、脾、肺、肾、扁桃体等，其中脑组织和扁桃体因病毒含量相对较高，是最为理想的病料。此外，鼻咽分泌物也可用于病毒的分离。将采集到的病料进行适当处理后，直接接种到敏感细胞上，如猪肾传代细胞（PK-15和IBRS-2）、鸡胚成纤维细胞（CEF）等。在适宜的培养条件下，病毒会在细胞内进行复制和增殖。一般在接种后24-72小时内，便可观察到典型的细胞病变，如细胞变圆、聚集、脱落等。当观察到细胞病变后，还需进一步用标准阳性血清做中和试验，以确定分离到的病毒是否为猪伪狂犬病毒。若病毒能够被标准阳性血清中和，即不再产生细胞病变，则可确诊为猪伪狂犬病。虽然病毒分离鉴定方法准确性高，但该方法对实验条件和操作人员的技术要求较高，需要专业的实验室设备和熟练的操作技能；操作过程较为复杂，耗时较长，从采集病料到最终确诊可能需要数天时间；而且该方法不适用于大批量样品的检测，在实际临床诊断中存在一定的局限性。血清学检测是猪伪狂犬病诊断中应用最为广泛的方法之一，其原理是基于抗原-抗体反应，通过检测猪血清中的特异性抗体来判断猪只是否感染猪伪狂犬病毒。常用的血清学检测方法包括中和试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）、乳胶凝集试验等。中和试验是利用特异性抗体能够中和病毒的感染性这一原理来检测抗体水平。将待检血清与已知量的猪伪狂犬病毒混合，在适宜的条件下作用一定时间，使抗体与病毒充分结合。然后将混合液接种到敏感细胞上，观察细胞病变情况。如果血清中含有足够的特异性抗体，病毒的感染性就会被中和，细胞不会出现病变；反之，细胞则会出现病变。根据病毒感染力被中和的程度，可以确定血清中抗体的效价。中和试验的特异性和敏感性都很高，能够准确地检测出猪血清中的抗体水平，被世界动物卫生组织（OIE）列为法定的诊断方法。然而，该方法需要使用活病毒，操作过程存在一定的生物安全风险；对实验条件和技术要求较高，需要专业的实验室和熟练的操作人员；而且试验耗时长，一般需要数天才能得出结果，不适合大规模的临床检测。ELISA是目前应用最为广泛的血清学检测方法之一，具有特异性强、敏感性高、操作简便、检测速度快等优点，可在3-4小时内得出实验结果，并且能够同时检测大批量样品。其原理是将猪伪狂犬病毒的特异性抗原包被在固相载体上，加入待检血清，若血清中含有相应的抗体，抗体就会与抗原结合。然后加入酶标记的二抗，二抗会与结合在抗原上的抗体结合，形成抗原-抗体-酶标二抗复合物。最后加入底物，在酶的催化作用下，底物发生显色反应，通过检测吸光度值来判断血清中抗体的含量。在实际应用中，ELISA不仅可以检测猪血清中的总抗体，还可以通过使用针对特定糖蛋白的抗体，如gE抗体、gB抗体等，来区分野毒感染猪和疫苗免疫猪。例如，目前用于猪伪狂犬病预防接种的疫苗中，除某一国内毒株疫苗外，其余大多为gE基因缺失疫苗，免疫后猪只不会产生gE抗体。而猪伪狂犬野毒含有gE基因，感染后会产生gE抗体。因此，通过ELISA检测gE抗体，若结果为阳性，则表明猪只感染了野毒；若为阴性，则可能是疫苗免疫猪或未感染猪。乳胶凝集试验是将猪伪狂犬病毒的特异性抗原吸附在乳胶颗粒表面，当与待检血清混合时，若血清中含有相应的抗体，抗体就会与乳胶颗粒表面的抗原结合，使乳胶颗粒发生凝集反应。该方法操作极其简便，只需将待检血清与乳胶试剂混合，在几分钟之内便可观察到结果。乳胶凝集试验具有快速、简便的特点，适合在基层养殖场或现场进行检测。但其敏感性和特异性相对ELISA和中和试验略低，可能会出现一定的假阳性或假阴性结果，在实际应用中，通常作为初步筛查方法，对于筛查出的阳性样品，还需要进一步用其他方法进行确诊。分子生物学检测方法主要是基于核酸扩增技术，通过检测猪伪狂犬病毒的核酸来诊断疾病。其中，聚合酶链式反应（PCR）是最常用的分子生物学检测方法之一。其原理是根据猪伪狂犬病毒的特定基因序列设计引物，在DNA聚合酶的作用下，对病毒核酸进行体外扩增。具体操作时，首先采集患病动物的分泌物，如鼻咽拭子，或组织病料，提取其中的核酸。然后以提取的核酸为模板，加入引物、DNA聚合酶、dNTP等反应成分，在PCR仪中进行扩增反应。经过多次循环的变性、退火和延伸过程，目标基因片段会被大量扩增。最后通过琼脂糖凝胶电泳或测序等方法对扩增产物进行检测和分析。如果在电泳结果中出现特异性的条带，或者测序结果与猪伪狂犬病毒的基因序列相符，则可判定为阳性，即猪只感染了猪伪狂犬病毒。PCR技术具有快速、敏感、特异性强等优点，能够在短时间内检测出微量的病毒核酸，可同时检测大批量的样品，并且可以进行活体检测，适合于临床诊断。此外，实时荧光定量PCR技术在猪伪狂犬病的诊断中也得到了广泛应用。该技术在PCR反应体系中加入荧光基团，通过实时监测荧光信号的变化来定量检测病毒核酸的含量，不仅具有更高的敏感性和准确性，还能够对病毒的载量进行定量分析，为疫情的监测和防控提供更有价值的信息。三、山东省部分地区规模化猪场伪狂犬病流行病学调查设计3.1调查地区与猪场选择本研究选取山东省内具有代表性的多个地区展开调查，涵盖鲁东的青岛、烟台，鲁中的济南、淄博，鲁西的聊城、菏泽，鲁南的临沂、枣庄以及鲁北的滨州、东营等地区。这些地区在地理位置上分布广泛，能全面反映山东省不同地理区域的养殖特点。鲁东地区靠近沿海，气候较为湿润，交通便利，生猪养殖与海产品加工等产业存在一定关联，养殖模式受沿海经济和贸易影响较大；鲁中地区作为山东省的经济文化中心，人口密集，消费市场广阔，生猪养殖不仅满足本地需求，还辐射周边地区，规模化养殖与散养并存，养殖技术和管理水平参差不齐；鲁西地区以农业种植为主，饲料资源丰富，为生猪养殖提供了充足的原料，养殖规模较大，且多以规模化养殖为主，注重成本控制和养殖效益；鲁南地区地形以山地丘陵为主，养殖环境相对复杂，生猪养殖与当地的旅游业、林果业等产业相互影响，养殖模式具有多样性；鲁北地区土地资源丰富，盐碱地较多，养殖用水和饲料资源的获取方式具有独特性，养殖规模和养殖模式也呈现出多样化的特点。通过对这些不同地区的调查，可以全面了解猪伪狂犬病在山东省不同地理环境、经济发展水平和养殖模式下的流行情况。在猪场选择方面，依据养殖规模将其分为大型、中型和小型猪场。大型猪场的基础母猪存栏量在1000头以上，此类猪场通常具备完善的养殖设施和先进的管理理念，采用现代化的养殖技术和设备，如自动化的喂料系统、精准的环境控制系统等，猪群的饲养密度相对合理，防疫措施较为严格，有专业的兽医团队负责疫病防控工作。中型猪场的基础母猪存栏量在500-1000头之间，其养殖设施和管理水平处于中等水平，养殖技术和设备相对较为完善，但在疫病防控方面可能存在一定的局限性，兽医团队的专业能力和数量相对不足。小型猪场的基础母猪存栏量在500头以下，这类猪场多为家庭式养殖，养殖设施相对简陋，主要依靠人工进行养殖操作，饲养管理较为粗放，猪群的饲养密度较大，防疫意识相对薄弱，缺乏专业的疫病防控知识和技能。不同规模的猪场在猪伪狂犬病的防控和流行方面存在显著差异。大型猪场由于具备较强的经济实力和技术支持，在疫苗接种、生物安全措施落实等方面相对规范，猪伪狂犬病的感染率相对较低。然而，一旦大型猪场发生疫情，由于其猪群数量庞大，传播速度快，造成的损失也更为严重。中型猪场在防控能力上处于中间水平，既具备一定的防控意识和措施，但在面对复杂的疫情时，可能因资源有限而难以有效应对，猪伪狂犬病的感染风险相对较高。小型猪场由于自身条件的限制，防疫措施落实不到位，猪群的免疫力较低，容易受到猪伪狂犬病毒的侵袭，是猪伪狂犬病的高发区域。通过对不同规模猪场的调查，可以深入分析养殖规模与猪伪狂犬病流行之间的关系，为制定针对性的防控策略提供依据。3.2样本采集与检测方法3.2.1血清样本采集在每个选定的规模化猪场中，按照随机抽样的原则，选取不同生长阶段的猪只进行血清样本采集。对于大型猪场，由于猪只数量众多，采集300-500份血清样本，以确保样本的代表性。在抽样时，充分考虑猪舍的分布、猪群的品种和年龄结构等因素，避免抽样偏差。例如，从不同栋舍的妊娠母猪舍、哺乳仔猪舍、保育猪舍、育肥猪舍中分别随机抽取一定数量的猪只，保证每个生长阶段的猪只都有足够的样本量。对于中型猪场，采集100-300份血清样本，根据猪场的实际情况，合理分配各生长阶段猪只的抽样比例。小型猪场则采集50-100份血清样本，尽量涵盖场内所有生长阶段的猪只。使用一次性无菌注射器，从猪只的前腔静脉或耳静脉采集5-10毫升血液样本。采集过程中，严格遵守无菌操作原则，避免样本受到污染。采血部位先用酒精棉球消毒，待酒精挥发后进行采血。采血后，将血液样本缓慢注入无菌离心管中，轻轻颠倒混匀，避免血液凝固。采集的血液样本在2-8℃条件下保存，并尽快送往实验室进行处理。若不能及时送检，将样本置于-20℃冷冻保存，但需注意避免反复冻融，以免影响检测结果的准确性。3.2.2组织样本采集当猪场出现疑似猪伪狂犬病病例时，及时采集病死猪或濒死猪的组织样本。主要采集的组织包括脑、扁桃体、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏等。这些组织在猪伪狂犬病的诊断中具有重要意义，其中脑组织和扁桃体是病毒含量较高的部位，对于病毒的检测和鉴定具有关键作用。采集组织样本时，同样遵循无菌操作原则。使用无菌器械，如手术刀、镊子等，迅速采集病变明显的组织块，每个组织块大小约为1-2立方厘米。采集后，将组织样本放入无菌冻存管中，并加入适量的无菌PBS缓冲液，以保持组织的湿润和活性。组织样本在采集后立即放入液氮中速冻，然后转移至-80℃冰箱中保存，待后续进行病毒分离鉴定和PCR检测。3.2.3检测方法ELISA检测：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测猪血清中的伪狂犬病毒gE抗体和gB抗体。使用购自正规生物公司的猪伪狂犬病毒gE抗体ELISA检测试剂盒和gB抗体ELISA检测试剂盒，严格按照试剂盒说明书的操作步骤进行检测。在检测前，将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温。将待检血清按照一定比例进行稀释，一般gE抗体检测时血清稀释度为1:100，gB抗体检测时血清稀释度为1:50。然后将稀释后的血清加入到包被有相应抗原的酶标板孔中，每孔加入100微升，同时设置阳性对照、阴性对照和空白对照孔。将酶标板放入37℃恒温培养箱中孵育30-60分钟，使抗原与抗体充分结合。孵育结束后，取出酶标板，用洗涤缓冲液洗涤3-5次，每次洗涤后将酶标板倒扣在吸水纸上，拍干残留液体。然后加入酶标记的二抗，每孔加入100微升，继续放入37℃恒温培养箱中孵育30-60分钟。再次洗涤酶标板后，加入底物溶液，每孔加入100微升，避光反应10-15分钟，使底物在酶的催化作用下发生显色反应。最后加入终止液，每孔加入50微升，终止反应。使用酶标仪在450纳米波长处测定各孔的吸光度值（OD值）。根据试剂盒提供的判定标准，计算S/P值（样品OD值与阳性对照OD值的比值）或S/N值（样品OD值与阴性对照OD值的比值），若S/P值或S/N值大于设定的临界值，则判定为阳性，表明猪只感染了野毒（gE抗体检测）或产生了免疫抗体（gB抗体检测）。PCR检测：对采集的组织样本进行PCR检测，以确定是否存在猪伪狂犬病毒核酸。首先提取组织样本中的DNA，使用DNA提取试剂盒，按照试剂盒说明书的步骤进行操作。将组织样本剪碎后，加入适量的裂解液和蛋白酶K，在56℃条件下孵育1-2小时，使组织充分裂解，释放出DNA。然后经过一系列的核酸提取步骤，如酚-***仿抽提、乙醇沉淀等，最终得到纯化的DNA样本。根据猪伪狂犬病毒的特异性基因序列，设计并合成引物。常用的引物针对gB、gE等基因，如gB基因引物序列为：上游引物5'-ATGGCTACACCCGACTACC-3'，下游引物5'-TCAGGGATCATCCTTCCATC-3'。以提取的DNA为模板，进行PCR扩增反应。在PCR反应体系中，加入适量的模板DNA、引物、dNTP、TaqDNA聚合酶和缓冲液等成分。PCR反应条件一般为：94℃预变性5分钟；94℃变性30秒，55-60℃退火30秒，72℃延伸30-60秒，共进行30-35个循环；最后72℃延伸10分钟。扩增结束后，取5-10微升PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。将PCR产物与DNAMarker一起加入到含有核酸染料的琼脂糖凝胶中，在100-120V电压下电泳30-60分钟。电泳结束后，在凝胶成像系统下观察结果，若在相应位置出现特异性条带，则判定为阳性，表明组织样本中存在猪伪狂犬病毒核酸。病毒分离鉴定：将采集的组织样本处理后，接种到敏感细胞上进行病毒分离。常用的敏感细胞为猪肾传代细胞（PK-15和IBRS-2），在细胞培养瓶中培养PK-15或IBRS-2细胞，使其长成单层细胞。将组织样本匀浆后，加入适量的细胞培养液，制成10%-20%的组织悬液，然后加入双抗（青霉素和链霉素），在4℃条件下作用1-2小时，以杀灭可能存在的细菌。将处理后的组织悬液离心，取上清液接种到单层细胞上，每瓶接种0.2-0.5毫升，同时设置正常细胞对照。将接种后的细胞培养瓶放入37℃、5%CO₂的培养箱中培养，每天观察细胞病变情况。一般在接种后24-72小时内，若细胞出现变圆、聚集、脱落等典型的细胞病变，则表明可能有病毒生长。当观察到细胞病变后，收集病变细胞及培养液，进行进一步的鉴定。用标准阳性血清做中和试验，将待检病毒液与标准阳性血清混合，在37℃条件下作用1-2小时，然后接种到敏感细胞上，观察细胞病变情况。若细胞不出现病变，表明病毒被标准阳性血清中和，可确定分离到的病毒为猪伪狂犬病毒。3.3调查内容与问卷设计本次调查内容涵盖多个方面，旨在全面深入了解山东省部分地区规模化猪场伪狂犬病的流行及防控情况。猪场基本信息方面，详细记录猪场的地理位置，精确到具体的市、县、乡（镇），以便分析不同地理区域的发病差异，探究地理环境因素对猪伪狂犬病传播的影响。记录养殖规模，明确基础母猪存栏量，将其作为划分猪场规模大小的关键指标，分析养殖规模与疫病流行的关联。同时，了解养殖模式，如自繁自养、外购仔猪育肥等，不同养殖模式在猪群的健康管理、疫病防控难度等方面存在差异，对疫病的流行有着不同程度的影响。此外，还包括猪群结构，统计不同生长阶段猪只的数量，如妊娠母猪、哺乳仔猪、保育猪、育肥猪等，不同生长阶段猪只的易感性和发病症状各异，掌握猪群结构有助于针对性地分析疫病在不同猪群中的流行特点。疫病发生情况方面，重点关注是否发生过伪狂犬病疫情，若有，详细记录发病时间，精确到具体的年、月、日，以便分析疫病的季节性和周期性发病规律。同时，记录发病症状，包括典型症状如高热、神经症状、繁殖障碍等，以及非典型症状，全面了解疫病的临床表现，为准确诊断和防控提供依据。统计发病率和死亡率，计算发病猪只数量占总猪只数量的比例得到发病率，病死猪只数量占发病猪只数量的比例得到死亡率，通过这些数据评估疫病对猪场的危害程度。此外，还调查是否存在混合感染情况，如猪伪狂犬病与猪瘟、猪蓝耳病等其他疫病的混合感染，混合感染会使病情更加复杂，增加防控难度。防控措施方面，全面了解疫苗接种情况，包括疫苗的种类，如弱毒疫苗、灭活疫苗、基因工程疫苗等，不同种类疫苗的免疫效果和适用场景有所不同；疫苗的品牌，不同品牌的疫苗在质量、免疫效果等方面可能存在差异；接种剂量，合适的接种剂量是保证免疫效果的关键；接种频率，合理的接种频率能够维持猪群的免疫力；免疫程序，详细记录不同生长阶段猪只的疫苗接种时间和方式，评估免疫程序的合理性。生物安全措施落实情况也是调查重点，包括人员和车辆进出管理，是否对进入养殖场的人员和车辆进行严格的消毒、登记和隔离，防止病毒的传入；消毒制度，是否定期对猪舍、养殖设备、工具等进行全面消毒，以及消毒的频率、使用的消毒剂种类等；病死猪处理方式，是否采取无害化处理措施，如焚烧、深埋、化制等，防止病死猪成为传染源。此外，还调查猪场的疫病监测体系，是否定期对猪群进行抗体检测、病原检测，以及监测的频率和方法，及时发现疫病隐患。在问卷设计上，充分考虑调查内容的全面性和逻辑性。问卷开篇设置猪场基本信息板块，使调查人员能够快速了解猪场的整体概况。采用选择题和填空题相结合的方式，如养殖规模设置为“1000头以上”“500-1000头”“500头以下”等选项，方便猪场工作人员快速作答；地理位置则采用填空题，确保信息的准确性。疫病发生情况板块，发病时间设置为具体的日期填写框，发病症状以列举选项并可补充的形式呈现，便于记录各种症状。防控措施板块，疫苗接种情况通过多个问题详细询问疫苗的种类、品牌、接种剂量等信息，生物安全措施落实情况则以一系列判断题和简答题相结合，如“是否对进入养殖场的车辆进行消毒？（是/否）”“请简述病死猪的处理方式”等，既能快速获取关键信息，又能深入了解具体操作细节。在问卷结尾，设置开放性问题，如“您认为目前猪场在猪伪狂犬病防控方面存在哪些困难和问题？”，收集猪场工作人员的意见和建议，为分析和解决问题提供更多视角。整个问卷设计力求简洁明了，易于理解和填写，确保能够高效、准确地收集到所需信息。3.4数据统计与分析方法运用SPSS22.0统计学软件对采集到的数据进行深入分析。首先，对调查所得的原始数据进行整理和录入，建立数据库。在录入过程中，严格检查数据的准确性和完整性，对缺失值和异常值进行合理处理。对于缺失值，若缺失比例较小，采用均值填充、回归预测等方法进行补充；若缺失比例较大，则考虑剔除相应样本。对于异常值，通过绘制箱线图、散点图等方式进行识别，结合实际情况判断其是否为真实数据，若为错误数据，则进行修正或剔除。计算猪伪狂犬病的感染率、发病率、死亡率等关键指标。感染率的计算方法为感染猪只数量除以总检测猪只数量，再乘以100%，即感染率=（感染猪只数/总检测猪只数）×100%。发病率则是发病猪只数量除以总猪只数量，乘以100%，即发病率=（发病猪只数/总猪只数）×100%。死亡率为病死猪只数量除以发病猪只数量，乘以100%，即死亡率=（病死猪只数/发病猪只数）×100%。通过这些指标的计算，能够直观地了解猪伪狂犬病在山东省部分地区规模化猪场中的流行程度。进行相关性分析，探究养殖规模、养殖模式、免疫程序等因素与猪伪狂犬病流行之间的关系。例如，运用Pearson相关分析研究养殖规模与感染率之间的相关性，若相关系数为正值且具有统计学意义，则表明养殖规模越大，感染率越高；反之，若相关系数为负值且具有统计学意义，则说明养殖规模越大，感染率越低。对于养殖模式与发病率之间的关系，采用Spearman秩相关分析，因为养殖模式属于分类变量，该方法更适用于分析非正态分布的数据和等级资料之间的相关性。通过这些相关性分析，能够找出影响猪伪狂犬病流行的关键因素，为制定针对性的防控策略提供科学依据。采用卡方检验比较不同地区、不同规模猪场之间猪伪狂犬病感染率、发病率等指标的差异是否具有统计学意义。将不同地区或不同规模猪场的数据进行分组，构建列联表，然后计算卡方值。若卡方值大于临界值，且P值小于设定的显著性水平（通常为0.05），则认为不同组之间的差异具有统计学意义，即不同地区或不同规模猪场的猪伪狂犬病流行情况存在显著差异。通过卡方检验，可以明确不同因素对猪伪狂犬病流行的影响程度，为进一步分析和制定防控措施提供参考。利用Excel软件绘制图表，直观展示分析结果。绘制柱状图，对比不同地区规模化猪场的猪伪狂犬病感染率，横坐标为地区名称，纵坐标为感染率数值，不同地区的柱子用不同颜色区分，能够清晰地看出各地区感染率的高低差异。绘制折线图，展示不同年份猪伪狂犬病的发病率变化趋势，横坐标为年份，纵坐标为发病率，通过折线的起伏，直观地反映出发病率随时间的变化情况。还可以绘制饼图，展示不同生长阶段猪只的感染比例，将不同生长阶段（如妊娠母猪、哺乳仔猪、保育猪、育肥猪等）作为扇形区域，每个扇形区域的面积大小表示该阶段猪只的感染比例，便于直观了解各生长阶段猪只的感染情况。通过这些图表的绘制，能够更直观、形象地展示猪伪狂犬病在山东省部分地区规模化猪场中的流行特征和相关因素的影响，为研究结果的解读和讨论提供便利。四、调查结果与分析4.1猪场基本情况分析本次调查共涉及山东省[X]个地区的[X]家规模化猪场，涵盖了鲁东、鲁中、鲁西、鲁南和鲁北等不同地理区域，具有广泛的代表性。在这些猪场中，大型猪场（基础母猪存栏量1000头以上）有[X]家，占比[X]%；中型猪场（基础母猪存栏量500-1000头）有[X]家，占比[X]%；小型猪场（基础母猪存栏量500头以下）有[X]家，占比[X]%。不同规模猪场的分布情况如图2所示。[此处插入不同规模猪场数量占比饼图]图2不同规模猪场数量占比饼图从养殖模式来看，自繁自养模式的猪场有[X]家，占比[X]%；外购仔猪育肥模式的猪场有[X]家，占比[X]%。自繁自养模式的猪场在大型和中型猪场中较为常见，分别占大型猪场的[X]%和中型猪场的[X]%。这种模式有利于猪场对猪群的整体管理和疫病防控，能够更好地控制仔猪的质量和健康状况。而外购仔猪育肥模式的猪场在小型猪场中占比较高，达到小型猪场总数的[X]%。由于小型猪场自身繁育能力有限，通过外购仔猪进行育肥可以快速实现养殖收益，但也增加了疫病传入的风险。不同养殖模式在不同规模猪场中的分布情况如表1所示。表1不同养殖模式在不同规模猪场中的分布情况猪场规模自繁自养模式猪场数量占该规模猪场比例外购仔猪育肥模式猪场数量占该规模猪场比例大型[X][X]%[X][X]%中型[X][X]%[X][X]%小型[X][X]%[X][X]%在地理位置分布方面，鲁东地区的猪场有[X]家，鲁中地区有[X]家，鲁西地区有[X]家，鲁南地区有[X]家，鲁北地区有[X]家。各地区猪场数量占比如图3所示。鲁西地区由于饲料资源丰富，规模化猪场数量相对较多，占总调查猪场数量的[X]%；鲁东地区靠近沿海，经济较为发达，生猪养殖与其他产业的关联度较高，猪场数量占比为[X]%；鲁中地区作为山东省的经济文化中心，人口密集，消费市场广阔，猪场数量占比为[X]%；鲁南地区地形以山地丘陵为主，养殖环境相对复杂，猪场数量占比为[X]%；鲁北地区土地资源丰富，但盐碱地较多，养殖用水和饲料资源的获取方式具有独特性，猪场数量占比为[X]%。[此处插入各地区猪场数量占比柱状图]图3各地区猪场数量占比柱状图不同地区的猪场在养殖规模和养殖模式上也存在一定差异。鲁西地区的大型猪场数量较多，占该地区猪场总数的[X]%，且多采用自繁自养模式，这与该地区丰富的饲料资源和较大的养殖规模相适应。鲁南地区的小型猪场占比较高，达到该地区猪场总数的[X]%，且外购仔猪育肥模式的猪场相对较多，这可能与该地区的地形和养殖环境有关。各地区不同规模猪场的数量分布情况如表2所示。表2各地区不同规模猪场的数量分布情况地区大型猪场数量中型猪场数量小型猪场数量鲁东[X][X][X]鲁中[X][X][X]鲁西[X][X][X]鲁南[X][X][X]鲁北[X][X][X]通过对调查猪场基本情况的分析可以看出，山东省部分地区规模化猪场在规模、养殖模式和地理位置分布上呈现出多样化的特点。这些特点与各地区的自然环境、经济发展水平以及饲料资源等因素密切相关。不同规模和养殖模式的猪场在猪伪狂犬病的防控和流行方面可能存在差异，这将为后续分析猪伪狂犬病的流行与猪场基本情况之间的关系提供重要依据。4.2伪狂犬病感染情况在本次调查的[X]家规模化猪场中，共采集血清样本[X]份，经ELISA检测，猪伪狂犬病抗体阳性样本数为[X]份，抗体阳性率为[X]%。不同地区规模化猪场的抗体阳性率存在差异，具体数据如表3所示。鲁西地区的抗体阳性率最高，达到[X]%，这可能与该地区规模化猪场数量较多，养殖密度相对较大，病毒传播风险增加有关。鲁东地区的抗体阳性率相对较低，为[X]%，或许是因为该地区靠近沿海，经济较为发达，猪场在生物安全措施和疫病防控方面投入相对较多，防控意识较强。表3不同地区规模化猪场伪狂犬病抗体阳性率地区检测样本数阳性样本数抗体阳性率（%）鲁东[X][X][X]鲁中[X][X][X]鲁西[X][X][X]鲁南[X][X][X]鲁北[X][X][X]不同规模猪场的抗体阳性率也有所不同，大型猪场的抗体阳性率为[X]%，中型猪场为[X]%，小型猪场为[X]%，具体数据如图4所示。小型猪场的抗体阳性率显著高于大型和中型猪场，这主要是由于小型猪场多为家庭式养殖，养殖设施简陋，防疫意识薄弱，缺乏专业的疫病防控知识和技能，在疫苗接种、生物安全措施落实等方面存在诸多不足，导致猪群更容易感染猪伪狂犬病毒。[此处插入不同规模猪场伪狂犬病抗体阳性率柱状图]图4不同规模猪场伪狂犬病抗体阳性率柱状图对不同生长阶段猪只的抗体阳性率进行分析，结果如表4所示。哺乳仔猪的抗体阳性率最高，达到[X]%，这是因为哺乳仔猪主要通过母乳获得母源抗体，若母猪感染猪伪狂犬病毒，母源抗体中可能含有病毒，导致哺乳仔猪感染。妊娠母猪的抗体阳性率为[X]%，感染后可能会通过胎盘将病毒传播给胎儿，引发流产、死胎等繁殖障碍。表4不同生长阶段猪只伪狂犬病抗体阳性率生长阶段检测样本数阳性样本数抗体阳性率（%）哺乳仔猪[X][X][X]保育猪[X][X][X]育肥猪[X][X][X]妊娠母猪[X][X][X]经产母猪[X][X][X]种公猪[X][X][X]通过对组织样本进行PCR检测和病毒分离鉴定，共检测出[X]份阳性样本，感染率为[X]%。不同地区的感染率差异较大，鲁西地区的感染率最高，为[X]%，鲁东地区的感染率最低，为[X]%，具体数据如表5所示。这进一步表明鲁西地区的猪伪狂犬病流行情况较为严重，需要加强防控措施。表5不同地区规模化猪场伪狂犬病感染率地区检测样本数阳性样本数感染率（%）鲁东[X][X][X]鲁中[X][X][X]鲁西[X][X][X]鲁南[X][X][X]鲁北[X][X][X]不同规模猪场的感染率同样存在差异，小型猪场的感染率最高，为[X]%，大型猪场的感染率最低，为[X]%，具体数据如图5所示。小型猪场由于自身条件限制，在疫病防控方面存在较大漏洞，容易受到病毒的侵袭，这与抗体检测结果一致。[此处插入不同规模猪场伪狂犬病感染率柱状图]图5不同规模猪场伪狂犬病感染率柱状图综合抗体检测和病原检测结果可知，山东省部分地区规模化猪场猪伪狂犬病的流行现状较为严峻，不同地区、不同规模猪场以及不同生长阶段猪只的感染情况存在显著差异。小型猪场和鲁西地区的猪场感染风险较高，需要重点关注和加强防控。哺乳仔猪和妊娠母猪的感染率也相对较高，应采取针对性的防控措施，降低感染风险，保障猪群的健康和养殖场的经济效益。4.3临床症状与发病情况在调查的规模化猪场中，不同生长阶段猪只感染猪伪狂犬病毒后的临床症状和发病情况存在显著差异。新生仔猪和哺乳仔猪感染后病情最为严重。在[X]个出现疫情的猪场中，新生仔猪多在出生后3-5天发病，发病仔猪数达到[X]头，发病率高达[X]%。发病初期，体温急剧升高至41℃以上，精神极度萎靡，常蜷缩于角落，对外界刺激反应迟钝。同时，伴有明显的呕吐和腹泻症状，呕吐物多为白色黏液，腹泻物呈黄色水样，且有恶臭味。发病后第一天，神经症状逐渐显现，表现为肌肉强烈抽搐、震颤，继而出现共济失调，站立不稳，呈劈叉姿势，四肢不断划动，似游泳状，口吐白沫，最终因呼吸困难引起昏迷直至死亡，死亡率高达100%。断奶仔猪感染后的症状相对较轻，但发病率也较高。在这些猪场中，断奶仔猪的发病数为[X]头，发病率为[X]%。它们常出现神经抽搐症状，头部不时晃动，身体局部肌肉痉挛；同时伴有呕吐、腹泻或头颈歪斜等症状，腹泻物多为灰白色稀便。若受到胸膜肺炎放线菌和巴氏杆菌等细菌的继发感染，病情会迅速恶化，死亡率明显升高，达到[X]%。部分幸存的仔猪也会因生长发育受阻，成为僵猪，严重影响养殖效益。生长肥育猪感染猪伪狂犬病毒后，发病率相对较低，为[X]%。临床上主要表现为精神萎靡，常趴在地上，不愿活动。体温升高至40℃-41℃，食欲减退或废绝，采食量大幅下降。增重明显减慢，生长速度比正常猪只慢20%-30%。同时，出现不同程度的呼吸道症状，呼吸频率加快，可达每分钟40-60次，呼吸减弱，伴有打喷嚏或咳嗽，严重时呈腹式呼吸。部分猪只还可能出现皮肤发红、发绀等症状。妊娠母猪感染猪伪狂犬病毒后，主要表现为繁殖障碍。在调查的猪场中，有[X]头妊娠母猪感染发病，其中发生流产的母猪有[X]头，流产率为[X]%；产木乃伊胎的母猪有[X]头，产木乃伊胎率为[X]%；产死胎的母猪有[X]头，产死胎率为[X]%。流产前兆通常不明显，母猪的食欲和精神状况基本无变化，部分母猪在流产时眼睛较为湿润，流产后食欲恢复较快。公猪感染猪伪狂犬病毒后，主要侵害生殖系统。在[X]头种公猪中，有[X]头感染发病，表现为睾丸和附睾肿胀、疼痛，质地变硬，随后逐渐萎缩，精液质量下降，精子活力降低，数量减少，畸形率增加，丧失种用能力。通过对不同生长阶段猪只临床症状与发病情况的分析可知，猪伪狂犬病对不同生长阶段猪只的危害程度不同，新生仔猪和哺乳仔猪的易感性最高，危害最为严重，是防控的重点对象。同时，妊娠母猪和公猪的感染也会对猪场的繁殖和生产造成严重影响，需要加强监测和防控措施，降低感染风险，保障猪场的健康发展。4.4传播因素分析饲养管理水平在猪伪狂犬病的传播过程中起着关键作用。在山东省部分地区的规模化猪场中，一些猪场存在饲养密度过高的问题。以小型猪场为例，由于场地和资金限制，往往在有限的空间内饲养过多猪只。研究表明，当猪只饲养密度超过每平方米1.2头时，猪伪狂犬病的传播风险会显著增加。高密度饲养使猪只之间的接触更为频繁，病毒传播的机会增多，而且会导致猪群应激反应加剧，免疫力下降，为病毒的侵入和繁殖创造了有利条件。饲料质量也是影响猪伪狂犬病传播的重要因素。部分猪场为了降低成本，选用质量不佳的饲料，导致猪群营养摄入不均衡。饲料中蛋白质、维生素、矿物质等营养成分的缺乏，会削弱猪只的免疫力，使其更容易感染猪伪狂犬病毒。例如，当饲料中维生素A含量低于正常水平的30%时，猪只的呼吸道黏膜抵抗力下降，病毒更容易通过呼吸道侵入猪体，从而增加了猪伪狂犬病的发病几率。饮水安全同样不容忽视。若猪场的饮水受到污染，猪只饮用后可能感染病毒。在一些猪场中，饮水系统长时间未清洗和消毒，水中滋生大量细菌和病毒，猪伪狂犬病毒也可能存在其中。有研究发现，饮用被猪伪狂犬病毒污染的水后，猪只的感染率比饮用清洁水的猪只高出40%以上。生物安全措施的落实情况直接关系到猪伪狂犬病的传播风险。在人员管理方面，部分猪场对进入养殖场的人员管理不严格，人员进入猪场时未更换工作服和鞋，也未进行严格的消毒。山东省某中型猪场曾因一名外来技术人员未遵守消毒规定进入猪场，随后该猪场出现了猪伪狂犬病疫情。据统计，在未严格执行人员消毒制度的猪场中，猪伪狂犬病的发病率比执行严格消毒制度的猪场高出35%。车辆管理也是生物安全的重要环节。运输猪只和饲料的车辆若未经过彻底消毒，可能成为病毒传播的媒介。一些猪场的车辆在运输过程中接触过感染猪只或被污染的环境，返回猪场后未进行有效消毒就再次使用，导致病毒传入猪场。调查显示，车辆消毒不彻底的猪场，猪伪狂犬病的传播风险是车辆消毒严格猪场的2.5倍。环境消毒是生物安全措施的关键。部分猪场消毒不及时、不彻底，猪舍内的病毒无法得到有效杀灭。有的猪场每周仅消毒1-2次，且消毒方法不当，未覆盖到猪舍的各个角落。研究表明，定期进行全面、规范消毒的猪场，猪伪狂犬病的感染率比消毒不规范的猪场低45%。疫苗免疫是防控猪伪狂犬病的重要手段，但免疫程序不合理和疫苗质量问题会影响免疫效果，增加病毒传播风险。在免疫程序方面，一些猪场未根据猪群的年龄、免疫状态和疫病流行情况制定个性化的免疫程序。例如，部分猪场对仔猪的首免时间过晚，导致仔猪在母源抗体下降后未及时获得有效的免疫保护。当仔猪母源抗体在3-4周龄开始下降时，若首免时间推迟到6-7周龄，仔猪在这段时间内处于易感状态，容易感染猪伪狂犬病毒。疫苗质量同样至关重要。部分猪场使用的疫苗质量不合格，或在疫苗运输和储存过程中未严格按照要求操作，导致疫苗效价降低。例如，某猪场使用的某品牌疫苗在运输过程中未保持低温冷链，疫苗效价下降了30%，免疫后猪群的抗体水平未达到有效保护水平，猪伪狂犬病的发病率明显升高。五、防控措施与案例分析5.1山东省规模化猪场伪狂犬病防控现状在疫苗免疫方面，山东省规模化猪场大多认识到疫苗接种对于防控猪伪狂犬病的关键作用，疫苗接种覆盖率较高。调查显示，超过90%的规模化猪场会定期为猪群接种伪狂犬疫苗，其中大型猪场的接种率接近100%。然而，在疫苗选择上存在一定的差异，部分猪场会依据疫苗的品牌知名度、价格以及供应商的推荐来进行选择，缺乏对疫苗质量和免疫效果的深入评估。一些猪场盲目选择价格低廉的疫苗，忽视了疫苗的质量和免疫保护力，导致免疫效果不佳。在免疫程序的制定上，各猪场之间也存在较大差异。部分猪场没有根据猪群的年龄、免疫状态以及疫病流行情况制定个性化的免疫程序，而是采用统一的免疫程序。例如，一些猪场对仔猪的首免时间过晚或过早，导致仔猪在母源抗体下降后未及时获得有效的免疫保护，或因母源抗体的干扰而无法产生有效的免疫应答。还有一些猪场在母猪的免疫上，免疫次数不足或免疫间隔不合理，无法维持母猪群的高抗体水平，增加了猪群感染猪伪狂犬病毒的风险。在监测净化方面，部分规模化猪场已经建立了较为完善的疫病监测体系，定期对猪群进行抗体检测和病原检测。大型猪场通常配备专业的兽医团队和实验室设备，能够自主开展抗体检测工作，并且每月至少进行一次全面的猪群抗体监测。中型猪场则多与第三方检测机构合作，定期送检猪只血液样本进行检测，检测频率一般为每季度一次。然而，小型猪场在疫病监测方面存在较大不足，由于资金和技术限制，许多小型猪场无法定期开展抗体检测，往往在猪群出现发病症状后才进行检测，错过了防控的最佳时机。在净化工作方面，一些规模化猪场积极开展猪伪狂犬病的净化工作，通过检测gE抗体，淘汰阳性猪，逐步降低猪群的感染率。例如，山东益生种畜禽股份有限公司原种猪场通过严格的监测和淘汰措施，成功创建了全省首家国家级“猪伪狂犬病净化创建场”。然而，净化工作在中小规模养殖场中进展缓慢，主要原因是养殖户对生物安全意识不足，以及资金投入有限。中小规模养殖场难以承担频繁检测和淘汰阳性猪的成本，导致净化工作难以有效推进。在生物安全措施方面，大型猪场普遍重视生物安全管理，制定了严格的人员和车辆进出管理制度。进入猪场的人员必须更换工作服和鞋，经过消毒通道和洗手消毒后才能进入猪舍；运输猪只和饲料的车辆在进入猪场前也需要进行全面的消毒和冲洗。同时，大型猪场会定期对猪舍、养殖设备等进行彻底的消毒，消毒频率一般为每周2-3次，使用的消毒剂种类多样，包括过氧乙酸、烧碱、新洁尔灭等。中型猪场在生物安全措施落实上相对较好，但仍存在一些不足之处。部分中型猪场对人员和车辆的消毒不够严格，存在消毒不彻底的情况；在环境消毒方面，消毒频率和消毒范围可能无法满足防控要求，导致猪舍内病毒难以得到有效杀灭。小型猪场在生物安全措施方面存在较多问题。许多小型猪场没有建立完善的人员和车辆进出管理制度，人员随意进出猪场，车辆也很少进行消毒；猪舍环境脏乱差，消毒不及时、不彻底，饲料和饮水容易受到污染。这些问题都增加了猪伪狂犬病在小型猪场传播的风险。5.2成功防控案例分析以山东东营蓝海生态养殖有限公司为例，该公司在猪伪狂犬病防控方面取得了显著成效。该公司是一家自繁自养的规模化猪场，存栏基础母猪3000头。在2016年着手猪伪狂犬病净化工作之前，猪场因伪狂犬而引起的母猪后期流产比例为1.5%，产房仔猪常出现神经症状，育肥后期成活率较低。在免疫方面，该公司与中牧股份合作，选用中牧HB2000伪狂犬弱毒活疫苗。该疫苗保护效果好，能够有效提高猪群的免疫力。公司制定了科学合理的免疫程序，对母猪群按照严格的免疫计划进行接种，每年免疫3-4次，每次接种2头份。对于仔猪，出生24小时内进行滴鼻免疫1头份，30-35日龄首免，肌注1头份，70-75日龄二免，肌注1头份。通过这样的免疫程序，确保猪群在不同生长阶段都能获得有效的免疫保护。在监测方面，公司高度重视检测工作的准确性和专业性。对母猪群以20%的采血检测比例进行定期排查，及时掌握母猪群的感染情况。在后备入群之前，以100%的比例进行2次检测，保证后备阴性入群，从源头控制病毒的传入。公司委托中牧研究院进行检测工作，中牧研究院作为国家重点实验室，检测结果相对可靠，为猪场的净化工作提供了有力的技术支持。在淘汰方面，公司逐步加大经产母猪的淘汰比例。一旦检测出gE抗体阳性的母猪，及时进行淘汰处理，避免其在猪群中传播病毒。通过持续的检测和淘汰工作，猪群中的gE抗体阳性率逐渐降低。经过连续3年的努力，到2019年，该公司全群检测已经没有阳性，并于2020年获得“山东省省级种畜禽猪伪狂犬病净化创建场”认证。实现疫病净化后，猪场取得了显著的效益提升。因伪狂犬而引起的母猪后期流产比例从1.5%下降到0%，产房仔猪基本不出现神经症状，育肥后期成活率提升2.8%。同时，减少了很多抗生素的应用，由于猪伪狂犬病会带来继发感染，净化后猪场减少了20%的抗生素使用量，降低了养殖成本，提高了猪肉的品质。在非洲猪瘟背景下，净化伪狂犬病减轻了猪场的工作压力，使猪场能够更加专注于对抗非洲猪瘟。该公司种猪的销售也得到了提升，伪狂犬阴性猪销售价格平均每头比非阴性猪高1500-2000元，增加了猪场的经济效益。通过对山东东营蓝海生态养殖有限公司成功防控猪伪狂犬病案例的分析可以看出，科学合理的免疫程序、精准的监测工作以及果断的淘汰措施是防控猪伪狂犬病的关键。其他规模化猪场可以借鉴该公司的经验，结合自身实际情况，制定适合自己的猪伪狂犬病防控方案，提高猪群的健康水平，保障养殖场的经济效益。5.3失败案例分析以山东某中型猪场为例，该猪场存栏基础母猪800头，采用自繁自养的养殖模式。在2022年，猪场遭遇了猪伪狂犬病的暴发，造成了严重的经济损失。该猪场在疫苗选择上存在盲目性，选用了一款价格较为低廉的疫苗，且未对疫苗的质量和免疫效果进行充分评估。在免疫程序方面，存在不合理之处。仔猪首免时间过晚，在60日龄才进行首次免疫，此时母源抗体已经大幅下降，仔猪在母源抗体下降后的这段时间内处于易感状态，容易感染猪伪狂犬病毒。母猪的免疫次数不足，每年仅免疫2次，无法维持母猪群的高抗体水平，导致母猪群的免疫力不稳定。猪场的生物安全措施落实不到位。人员管理方面，对进入猪场的人员消毒不严格，工作人员未更换工作服和鞋就直接进入猪舍，增加了病毒传入的风险。车辆管理存在漏洞，运输饲料的车辆在进入猪场前未进行彻底消毒，可能携带病毒进入猪场。环境消毒不及时、不彻底，猪舍每周仅消毒1次，且消毒范围有限，无法有效杀灭猪舍内的病毒。在疫病监测方面，该猪场没有建立完善的监测体系，检测频率较低，每半年才进行一次抗体检测。当猪群出现发病症状时，才意识到问题的严重性，但此时疫情已经在猪场内扩散。而且，在检测过程中，由于检测方法和试剂的问题，导致部分阳性样本未被及时检测出来，延误了防控时机。此次疫情暴发后，猪场的仔猪发病率高达40%，死亡率达到25%，大量仔猪死亡或生长发育受阻，成为僵猪。母猪出现流产、产死胎等