岛津液相色谱培训

岛津液相色谱培训演讲人：日期:目录CATALOGUE02.仪器结构与核心组件04.应用领域与方法开发05.维护保养与故障排除01.03.标准操作流程06.实操案例与数据分析液相色谱基本原理01PART液相色谱基本原理分离机制与保留行为分配平衡理论溶质在固定相和流动相之间的分配系数差异是分离的基础，极性相近的组分在固定相中保留时间更长，从而实现分离。02040301离子交换原理带电溶质与固定相上的离子基团发生可逆交换，通过调整流动相pH或离子强度可优化分离选择性。吸附作用机制固定相表面活性位点与溶质分子间的相互作用（如氢键、范德华力）影响保留行为，非极性分子在反相色谱中洗脱更快。体积排阻效应基于分子大小差异进行分离，大分子因无法进入固定相孔径而先被洗脱，适用于聚合物或蛋白质分析。高压输液系统特性高压泵需维持流动相流速稳定（0.1-10mL/min），压力波动需低于1%以确保基线平稳，避免保留时间漂移。恒流与恒压模式采用脉动阻尼器或双泵头交替工作，减少泵送脉动对检测信号的干扰，提升信噪比。脉冲阻尼设计通过程序控制流动相比例变化（如乙腈-水梯度），提高复杂样品分离效率，需优化混合精度和延迟体积。梯度洗脱技术010302泵体与管路需耐受有机溶剂、缓冲盐腐蚀，常见材质包括PEEK、316L不锈钢，避免金属离子污染。耐腐蚀材料04检测器技术原理基于朗伯-比尔定律，通过测定特定波长（190-800nm）吸光度定量，适用于含共轭结构的化合物，检测限可达ng级。紫外-可见检测器（UV-Vis）检测流动相折射率变化，通用性强但灵敏度较低（μg级），易受温度波动影响，需严格温控。示差折光检测器（RID）利用目标物受激发射荧光的特性，选择性高且灵敏度优于UV（pg级），需优化激发/发射波长及衍生化条件。荧光检测器（FLD）010302通过离子化及质量分析提供分子量和结构信息，兼容ESI、APCI等接口，适用于复杂基质痕量分析。质谱检测器（MS）0402PART仪器结构与核心组件高压恒流泵技术配置四元比例阀与动态混合器，可在0-100%范围内实现0.1%步进的梯度精度，混合体积小于100μL时仍能保持RSD＜0.3%的混合均匀性。梯度混合系统压力监测与保护集成压电陶瓷传感器实时监测系统压力，当压力超过预设阈值（如40MPa）时自动触发停机保护，同时记录压力曲线用于故障诊断。采用双柱塞串联式设计，通过主动阀与被动阀协同工作，实现脉动低于0.1%的稳定流速输出，压力波动范围控制在±1%以内，确保基线噪声优于5μAU。泵系统与压力控制进样器与自动进样技术六通阀定量环设计采用耐腐蚀钛合金转子与陶瓷定子组合，支持0.1-100μL容积可更换定量环，进样精度CV＜0.5%，交叉污染率低于0.01%。温控样品盘模块内置帕尔贴温控系统，控温范围4-40℃±0.5℃，支持条形码扫描识别与样品序列智能编排功能。XYZ三维机械臂系统搭载高精度步进电机驱动，定位重复性±5μm，配合96/384孔板兼容托盘，可实现每小时超过200次进样的高通量分析。采用1024像素线性CCD传感器，光谱范围190-800nm，光学分辨率＜1nm，基线噪声＜±1×10-5AU，支持全光谱扫描与多波长同步监测。二极管阵列检测器检测模块与流通池低扩散流通池荧光检测组件石英材质光程10mm，死体积＜1μL，耐压能力达15MPa，配备恒温装置保持温度波动±0.1℃，确保峰形对称因子0.9-1.2。氙灯激发光源配合双单色器系统，激发/发射带宽可调1-20nm，灵敏度可达1pg/mL荧光素等效浓度，时间程序可执行多波长切换检测。03PART标准操作流程开机与流动相排气系统电源启动与自检管路冲洗与排气操作流动相脱气处理依次开启泵、自动进样器、柱温箱及检测器电源，等待各模块完成初始化自检流程，确认状态指示灯显示正常。检查溶剂托盘内流动相余量，确保管路无干涸风险。使用在线脱气机或超声仪对水相与有机相分别脱气，避免气泡进入系统导致压力波动。甲醇/乙腈需通过0.45μm有机滤膜过滤，缓冲盐溶液需现配现用以防止析出堵塞。以5mL/min低流速冲洗所有流路，切换Purge阀排除泵头气泡，观察压力曲线平稳性。对二元梯度系统需分别冲洗A/B通道，确保混合器内无残留溶剂交叉污染。色谱柱条件优化根据待测物性质选择C18/C8等固定相，设定柱温箱温度（通常25-40℃范围）。流速依据柱规格调整，常规分析柱推荐1.0mL/min，UPLC系统可提升至0.4-0.6mL/min。方法参数编辑设置梯度程序编制明确初始比例、梯度斜率及平衡时间。对于复杂样品需设置多阶梯度，有机相比例变化速率建议控制在1-3%/min以避免基线漂移。缓冲液pH值需精确至±0.02单位以确保重现性。检测器参数配置UV检测器选择目标化合物最大吸收波长（如254nm或280nm），DAD检测器需设定光谱采集范围。荧光检测器需优化激发/发射波长对，质谱检测器需校准质量轴并设置合适的离子源参数。序列设定与样品分析在序列表中标注样品瓶位置、名称及进样体积（常规5-20μL）。设置洗针程序（强溶剂-弱溶剂-强溶剂三次循环）防止交叉污染，进样针移动速度建议采用中速模式平衡效率与精度。样品瓶位与进样量定义实时观察压力波动（允许范围±10%基线压力），发现异常立即暂停排查。基线噪声超过0.5mAU时需检查检测器氘灯能量或流通池污染情况，必要时执行系统适应性测试。数据采集与监控自动保存原始数据至指定路径，启用峰积分算法（如ApexTrack）进行定量分析。对保留时间漂移超过0.1min的色谱峰需重新校准方法，系统适用性测试中理论塔板数、拖尾因子等参数需符合药典要求。序列运行后处理04PART应用领域与方法开发环境污染物分析有机污染物检测利用高效液相色谱（HPLC）结合质谱技术，精准测定水体、土壤中的多环芳烃（PAHs）、农药残留等持久性有机污染物，灵敏度可达ppb级。通过离子色谱与紫外检测器联用，分离和定量环境样品中砷、汞等重金属的不同化学形态，评估其生态毒性风险。开发固相萃取-液相色谱串联质谱（SPE-LC-MS/MS）方法，检测微塑料、药品和个人护理品（PPCPs）等新兴污染物在环境中的分布规律。重金属形态分析新兴污染物监测药物质量控制方法手性药物分离使用手性固定相色谱柱（如纤维素衍生物），拆分布洛芬、普萘洛尔等对映异构体，评估光学纯度对药效的影响。杂质谱分析通过梯度洗脱程序分离药物合成过程中的降解产物（如氧化杂质、水解杂质），并利用质谱进行结构鉴定，控制杂质限度低于0.1%。活性成分含量测定采用反相色谱柱（C18）与紫外检测器，建立阿司匹林、青霉素等药物的含量测定方法，确保符合药典规定的纯度标准（98%-102%）。优化流动相比例（如甲醇-磷酸盐缓冲液），同步测定饮料中的苯甲酸、山梨酸等防腐剂，方法回收率需达90%-110%。食品添加剂检测建立多残留分析方法，通过色谱柱选择（HILIC或C8）和质谱多反应监测（MRM），检测肉类中喹诺酮类、磺胺类抗生素残留。兽药残留筛查采用免疫亲和柱净化结合荧光检测器，定量谷物中的黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A，检出限需低于0.5μg/kg。真菌毒素分析食品安全检测方案05PART维护保养与故障排除日常清洁与柱保存使用0.45μm或更小孔径的滤膜过滤流动相，并通过超声脱气或在线脱气装置去除气泡，避免色谱柱堵塞或基线波动。流动相过滤与脱气处理分析完成后需用高比例有机相（如80%甲醇或乙腈）冲洗色谱柱30分钟以上，长期保存时需密封柱两端并标注保存溶剂成分。色谱柱冲洗与保存定期用纯水冲洗泵、进样器和检测器流路，防止盐析或样品残留，尤其针对缓冲盐体系需增加冲洗时长。系统流路清洁010203检查流动相比例是否稳定、色谱柱温度是否恒定，同时确认检测器氘灯能量是否不足或流通池存在污染。基线异常处理方案基线漂移排查排查泵脉动是否异常（如单向阀故障）、检测器电路干扰，必要时更换接地装置或启用噪声滤波功能。基线噪声优化通过空白进样确认是否为系统污染，若存在鬼峰需彻底冲洗色谱柱并检查样品前处理步骤（如过滤不彻底或容器污染）。鬼峰识别与消除密封垫更换周期使用缓冲盐流动相后必须用5%硝酸溶液冲洗泵头，防止盐结晶损坏密封垫或柱塞杆。缓冲盐沉积处理压力异常诊断若泵压波动超过10%，需检查密封垫是否老化、柱塞杆是否划伤，并确认溶剂过滤器和在线脱气模块是否堵塞。根据使用频率定期检查泵密封垫磨损情况，一般高压泵在分析500次后需更换密封组件以避免漏液。泵密封维护要点06PART实操案例与数据分析LC-2030C样品检测演示样品前处理流程系统适应性验证方法参数优化详细演示从样品称量、溶解、过滤到进样的标准化操作流程，强调溶剂选择、滤膜孔径对检测结果的影响，确保基线稳定性和峰形对称性。系统讲解流动相比例、柱温、流速等关键参数的调整策略，通过实际案例展示如何通过梯度洗脱程序改善复杂基质中目标物的分离度。涵盖保留时间重复性、理论塔板数、拖尾因子等指标的测试方法，演示如何通过调整进样量和检测器波长满足药典或行业标准要求。LC-2050多维色谱应用二维分离原理剖析深入解析中心切割和全二维两种工作模式的技术差异，结合多环芳烃或蛋白质样品展示正交分离的优势。复杂基质解决方案以中药指纹图谱或生物样本为例，展示如何通过第一维反相色谱与第二维离子交换色谱联用实现高覆盖率分离。分步演示如何通过LabSolutions软件配置阀切换时间窗口，确保第一维馏分