2026届新高考生物冲刺复习：DNA提取鉴定、PCR和电泳

2026届新高考生物冲刺复习DNA提取鉴定、PCR和电泳课标要求活动：DNA的粗提取与鉴定实验。利用聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段并完成电泳鉴定，或运用软件进行虚拟PCR实验。考情分析1.DNA的粗提取与鉴定2024·安徽卷，14；2024·河北卷，13；2024·山东卷，13；2023·福建卷，4；2023·广东卷，11；2022·山东卷，132.DNA片段的扩增与电泳鉴定2024·海南卷，15；2024·浙江6月选考，20；2024·江西卷，19；2024·黑吉辽卷，7；2023·江苏卷，22；2023·山东卷，25；2022·辽宁卷，12；2022·江苏卷，24不溶于2mol/L二苯胺实验一：DNA的粗提取与鉴定（2）选材要求：新鲜的富含DNA的动植物细胞能用猪的红细胞吗？沸水浴

体积分数为95%的酒精2mol/L的NaCl溶液二苯胺试剂蒸馏水等。DNA的粗提取与鉴定——析出DNA——溶解DNA——鉴定DNA，要现配现用——溶解细胞膜、核膜，释放出细胞内物质，

（3）试剂研磨液成分作用SDS使蛋白质变性EDTA抑制DNA酶Tris-HCl缓冲液稳定DNANaCl溶解DNA析出DNADNA的鉴定研磨称取约30g洋葱切碎，放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨。过滤取上清液研磨液用纱布过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取

。或直接将研磨液放入离心管中，在1500r/min的转速下离心5min，再取

。在上清液中加入预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，吸干水分。或者将上清液倒入离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，将管底的沉淀物（粗提取的DNA）晾干。取两支试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。DNA鉴定的结果DNA的粗提取与鉴定（3）方法步骤上清液上清液课本741．析出时为什么要选用预冷的酒精溶液？

可抑制水解酶的活性，抑制DNA降解；抑制分子运动，使DNA易形成沉淀；有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂。2．搅拌时需要如何操作？应用玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌，避免DNA分子断裂。回归教材DNA的粗提取与鉴定3.如果提取的不是白色丝状物，说明

二苯胺试剂鉴定如果不呈蓝色，可能的原因有：4.粗提取的DNA中可能含有哪些杂质?

DNA中的杂质较多。提取的DNA含量低，实验操作失误等。核蛋白、多糖等杂质。（2024安徽卷）下列关于“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（

）A.实验中如果将研磨液更换为蒸馏水，DNA提取的效率会降低B.利用DNA和蛋白质在酒精中的溶解度差异，可初步分离DNAC.DNA在不同浓度NaC1溶液中溶解度不同，该原理可用于纯化DNA粗提物D.将溶解的DNA粗提物与二苯胺试剂反应，可检测溶液中是否含有蛋白质杂质（2024·山东卷）关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是（）A.整个提取过程中可以不使用离心机B.研磨液在4℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中C.鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变D.仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰AD考向1

结合DNA的粗提取与鉴定，考查科学探究能力1.(2023·广东卷，11)“DNA粗提取与鉴定”实验的基本过程是：裂解→分离→沉淀→鉴定。下列叙述错误的是(

)A.裂解：使细胞破裂释放出DNA等物质B.分离：可去除混合物中的多糖、蛋白质等C.沉淀：可反复多次以提高DNA的纯度D.鉴定：加入二苯胺试剂后即呈现蓝色D实验二：PCR扩增DNA片段及电泳鉴定（1）利用PCR在体外扩增DNA片段的原理①PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合②DNA半保留复制的原理循环程序变性复性延伸预变性940C，5min30次940C,30s550C,30s720C，1min最后一次940C，1min550C,30s720C，10min使DNA充分变性，并使引物完全和模板链分开确保引物延伸完全，得到更多产物课本84凝胶不规则孔洞实验二：DNA片段的扩增（PCR）及电泳鉴定（2）DNA片段电泳鉴定的原理①PCR的产物一般通过

来鉴定；DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷，在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动（电泳）琼脂糖凝胶电泳②在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关（迁移速率与之呈

）③凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。负相关负极正极大片段小片段课本84视频：PCR扩增DNA片段及电泳鉴定移液→离心→扩增→电泳1.你是否成功扩增出DNA片段？判断的依据是什么？可以在

nm紫外灯下直接观察到DNA条带的分布及宽度亮度来评价扩增的结果。M：marker；1-阳性质粒；7：非转基因品系；2-6转Bt品系；2.你进行电泳鉴定的结果是几条条带？如果不止一条条带，请分析产生这个结果的可能原因？结果分析与评价

如果扩增结果不止一条条带，可能的原因有：结果应该是____条条带设计的引物特异性不强，或复性温度偏低，导致引物非特异性结合模板300一转Bt基因品系PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果课本841.他汀类药物是目前应用广泛、效果理想的降脂药物，醇脱氢酶是该药物催化合成过程中的关键酶。研究人员对酿酒酵母醇脱氢酶基因进行PCR，并将其导入大肠杆菌BL-21中，构建重组醇脱氢酶工程菌，利用LB培养基可大量生产醇脱氢酶。请回答下列问题：(1)对酿酒酵母醇脱氢酶基因进行PCR时，需要先设计引物，引物应选择图1中的

。(2)PCR反应过程如图2所示，其中58℃退火45s的目的是

。TaqDNA聚合酶在图2中的

过程中发挥作用。延伸和后延伸引物Ⅱ、引物Ⅲ引物与模板结合（2024，重庆卷，19）(3)为验证“启动子D＋基因S”是否连接在表达载体上，可用限制酶对重组表达载体酶切后进行电泳。电泳时，对照样品除指示分子大小的标准参照物外，还应有________________________________________。经验证的重组表达载体需转入农杆菌，检测转入是否成功的技术是________。酶切后的空载体片段、“启动子D＋基因S”片段PCR（2024，福建卷17）(4)利用PCR技术对子代小鼠进行hCD46基因检测，应设置不加DNA模板的对照组，目的是___________________________________________。排除PCR体系中外源DNA的污染（2025，河北卷22）（1）在DNA聚合酶、引物、模板DNA和脱氧核苷酸中，随着PCR反应进行，分子数量逐渐减少的是_____________和____________。模板与引物在PCR反应的_____阶段开始结合。PCR中使用的DNA聚合酶需耐高温，其原因为_____。PCR反应需要在高温条件下使双链DNA解旋为单链，普通的DNA聚合酶在高温下会变性失活，而耐高温的DNA聚合酶能在高温环境中保持活性，保证PCR反应的正常进行。