2026届高三生物一轮复习课件微生物的培养技术与应用

传统发酵技术的应用、发酵工程及其应用高三生物组目录01微生物的基本培养技术02微生物的选择培养与计数培养基概念：人工配制的，供微生物生长、繁殖的营养物质无菌技术纯培养微生物的分离与计数煮沸消毒微生物的培养技术以及应用状态：固体、半固体、液体培养基功能：选择培养基、鉴别培养基消毒灭菌巴氏消毒紫外线消毒湿热灭菌干热灭菌灼烧灭菌平板划线法稀释涂布平板法分离菌种：平板划线法分离和计数：稀释涂布平板法显微镜直接计数（包括死菌和活菌）微生物的基本培养技术PARTONE(1)培养基的概念、用途和类型①概念：人们按照微生物对

的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。②用途：用以

微生物或积累其代谢物。营养物质培养、分离、鉴定、保存1.培养基的配制一、微生物的基本培养技术知识夯基

考向研析按物理性质分有无凝固剂琼脂液体培养基固体培养基半固体培养基液体培养基应用于工业或生活生产（不加凝固剂）固体培养基应用于微生物的分离和鉴定（加入凝固剂，如琼脂）半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等一、微生物的基本培养技术③培养基的种类按照培养基的用途选择培养基鉴别培养基允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。P16在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物。以尿素为唯一氮源的培养基可用于选择培养_____________；以纤维素为唯一碳源的培养基可用于选择培养_______________。尿素分解菌纤维素分解菌伊红美蓝培养基（大肠杆菌）

大肠杆菌的代谢产物（有机酸）能与伊红美蓝结合，从而形成深紫色、并带有绿色金属光泽的菌落。一、微生物的基本培养技术③培养基的种类选择培养基鉴别培养基含青霉素的培养基可淘汰细菌，筛选出真菌。无有机碳源的培养基可筛选出自养微生物。异养微生物只能利用

。①培养基的化学成分包括

等。水、无机盐、碳源、氮源

碳源无机碳源：CO2、HCO3-等有机碳源：糖类、石油、花生粉饼等

碳源：能为微生物的代谢提供

的物质。碳元素有机碳源

氮源：能为微生物的代谢提供

的物质。氮元素氮源无机氮源：N2、NH3、NO3-、NH4＋等有机氮源：蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨等

只有固氮微生物才能利用N2。（2）培养基的配方一、微生物的基本培养技术微生物乳酸杆菌霉菌细菌厌氧微生物特殊需求添加______一般pH调至____一般pH调至_________________②其他条件：pH、特殊营养物质和氧气。如表：维生素酸性中性或弱碱性无氧一、微生物的基本培养技术（3）无菌技术(1)目的：获得

的微生物培养物。(2)关键：防止

污染。(3)常用方法：灭菌和消毒。纯净杂菌一、微生物的基本培养技术消毒煮沸消毒法巴氏消毒法对于一些不耐高温的液体，如牛奶。化学药剂消毒紫外线消毒消毒方法如酒精、氯气、石炭酸等。代谢物一、微生物的基本培养技术

灭菌（1）灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物。（包括芽孢和孢子）（2）灭菌方法有

、

、

。灼烧灭菌干热灭菌湿热灭菌①接种环、接种针、试管口等使用

；②玻璃器皿、金属用具等使用

，所用器械是

；③培养基、无菌水等使用

，所用器械是

。

灼烧灭菌法干热灭菌法干热灭菌箱高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌锅一、微生物的基本培养技术(4)注意事项①实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。②为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台上并在

附近进行。酒精灯火焰选择无菌技术的原则：一要考虑无菌技术的效果，灭菌的效果比消毒要好；二要考虑操作对象的承受能力，活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能用灭菌。一、微生物的基本培养技术微生物的选择培养

与计数PARTTWO二、微生物的选择培养与计数1.微生物的纯培养采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。纯培养物不同菌落的形状、大小、颜色等不同。菌落是鉴定菌种的重要依据。1.微生物的纯培养二、微生物的选择培养与计数2.酵母菌的纯培养微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。平板划线法

将接种后的平板倒置，放入恒温培养箱中培养一段时间。(可用于计数)接种和分离制备培养基培养①配制培养基②灭菌③倒平板培养基：湿热灭菌（高压蒸汽灭菌法）培养皿：干热灭菌温度：50℃左右操作：酒精灯火焰附近稀释涂布平板法培养对照将一个未接种的平板倒置，放入相同环境中培养相同时间。培养基：湿热灭菌（高压蒸汽灭菌法）二、微生物的选择培养与计数平板划线的具体操作见下面的流程图：

①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。②在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞③将试管口通过火焰④将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液⑤将试管口通过火焰，并塞上棉塞⑥在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次的划线与第一次划线相连。二、微生物的选择培养与计数(1)不含氮源的平板不能用于微生物培养(2023·山东，15A)(

)提示

不含氮源的平板可用于固氮菌的培养。×判断正误(2)可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌(2022·湖北，4D)(

)(3)接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃(2023·山东，15C)(

)提示

使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境。√×分析微生物平板划线和培养的具体操作微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，据图回答下列问题：关键能力提升(1)图示①～⑧中不正确的操作及其原因分别是什么？提示

②拔出棉塞后完全握住棉塞会造成杂菌污染，应握住棉塞上部；⑥划线时不能将培养皿完全打开，应在火焰附近将培养皿打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖；⑦划线时第5次的划线不能与第1次的划线相连；⑧平板应倒置培养。(2)在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？提示

划线后，线条末端菌种的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使菌种的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个微生物繁殖而来的菌落。(3)在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？提示

需要；划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。归纳总结平板划线法操作中几次灼烧接种环的目的2.微生物的选择培养和数量测定(1)稀释涂布平板法步骤①系列稀释操作：该操作常用在将细胞接种到培养基之前，通过液体稀释的方法分散细胞，随着稀释程度的增大，单位体积中的微生物细胞数量减少，细胞得以分散。操作步骤：二、微生物的选择培养与计数②涂布平板操作步骤酒精冷却二、微生物的选择培养与计数

原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的

。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。一个活菌③活菌计数法活菌30～300平均值少当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落(2)微生物的数量测定方法①显微镜直接计数法显微镜直接计数法本身不能区分细菌的死活，但是通过一定的辅助处理，可以实现活菌计数，如在计数前用台盼蓝染液进行染色，可以通过统计无色细胞的个数来对活菌进行计数。二、微生物的选择培养与计数3.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验操作(1)实验原理脲酶尿素二、微生物的选择培养与计数(2)实验流程30～300稀释涂布平板30～37二、微生物的选择培养与计数(3)实验结果分析与评价少于30～300选择性必修3P19“探究·实践”：本活动初步筛选了能分解尿素的细菌，请进一步借助于生物化学的方法来鉴定所分离的菌种：分解尿素的细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨，氨会使培养基的

性增强，在培养基中加入

指示剂培养细菌，若指示剂

，可确定该细菌能够分解尿素。碱酚红变红二、微生物的选择培养与计数(1)平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒(2023·山东，15B)(

)提示

平板涂布时涂布器使用前必须先浸在酒精中，然后在火焰上灼烧，这种操作属于灭菌。×判断正误(2)利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物(2023·山东，15D)(

)(3)稀释涂布平板法和平板划线法均能得到单菌落，都可用于细菌计数(2021·浙江6月选考，17C)(

)提示

平板划线法只能用于细菌分离，不能用于细菌计数。√×(4)血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定(2023·江苏，7D)(

)提示

血细胞计数板不适用于微小的细菌计数。×判断正误理解微生物的选择培养和计数的原理某兴趣小组从富含纤维素的土壤中取样，加入选择培养基中进行振荡培养，之后接种于鉴别培养基上进行培养，筛选出能够高效分解纤维素的微生物。请回答下列相关问题：1.从富含纤维素的土壤中取样的原因是什么？关键能力提升提示

纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中。2.分离出分解纤维素的微生物，应该配制以

为唯一碳源的培养基，目的是

。提示

④；④形成的透明圈与菌落直径的比值最大。3.已知刚果红与纤维素能形成红色复合物，当纤维素被分解后，复合物无法形成，平板上会出现以菌落为中心的透明圈(如图)，几号真菌降解纤维素的能力最强，理由是什么？纤维素促进纤维素分解菌生长，抑制其他微生物的生长4.三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中