(2025年)临床基因扩增检验技术人员PCR上岗证培训考试试题及答案

(2025年)临床基因扩增检验技术人员PCR上岗证培训考试试题及答案一、单项选择题（每题2分，共40分）1.关于PCR实验室分区的基本要求，以下错误的是A.试剂准备区与标本处理区应物理隔离B.扩增区与产物分析区可共用空调系统C.各区缓冲间应设置连锁门D.标本处理区应配备生物安全柜答案：B2.实时荧光定量PCR中，Ct值的定义是A.荧光信号达到设定阈值时的循环数B.扩增曲线指数期的起始循环数C.荧光信号首次超过基线的循环数D.平台期荧光信号强度的平均值答案：A3.引物设计时，避免3'端互补的主要目的是A.减少引物二聚体形成B.提高退火温度C.增加扩增特异性D.降低扩增效率答案：A4.以下哪种物质对Taq酶活性抑制作用最强？A.血红蛋白B.肝素C.EDTAD.甘油答案：B5.实验室进行室内质量控制时，弱阳性对照的Ct值应比临界值A.低1-2个循环B.高1-2个循环C.低3-4个循环D.高3-4个循环答案：A6.核酸提取过程中，加入异硫氰酸胍的主要作用是A.裂解细胞并灭活核酸酶B.沉淀DNAC.中和溶液pH值D.增强磁珠吸附能力答案：A7.扩增产物出现非特异性条带时，优化措施不包括A.提高退火温度B.减少引物浓度C.增加Taq酶用量D.缩短延伸时间答案：C8.临床基因扩增检验报告的基本要素不包括A.检测方法学B.参考范围C.患者饮食情况D.检验者签名答案：C9.实验室发生气溶胶污染后，最有效的处理方法是A.紫外线照射30分钟B.75%乙醇擦拭台面C.过氧乙酸熏蒸D.清水冲洗地面答案：C10.关于阴性质控品的选择，正确的是A.应使用与检测样本同类型的阴性材料B.可用生理盐水替代C.需包含所有可能的抑制物D.浓度应接近检测下限答案：A11.数字PCR（dPCR）与实时荧光PCR的主要区别是A.不需要标准曲线B.使用不同的荧光染料C.扩增效率更高D.可检测RNA病毒答案：A12.核酸提取仪日常维护中，重点检查的项目是A.加样针的密封性B.实验室温湿度C.操作人员资质D.扩增仪校准状态答案：A13.检测HBVDNA时，若样本OD260/OD280比值为1.6，提示可能存在A.蛋白质污染B.苯酚残留C.RNA污染D.盐离子残留答案：A14.以下哪种情况不属于实验室危急值？A.新冠病毒核酸检测阳性（Ct=18）B.肿瘤靶向基因检测出现新发突变C.疟原虫核酸检测阳性（低拷贝）D.血培养污染导致假阳性答案：D15.引物保存的最佳条件是A.-20℃避光B.4℃短期保存C.室温干燥D.-80℃反复冻融答案：A16.扩增仪温度校准的关键参数是A.孔间温度均匀性B.显示屏显示温度C.加热模块材质D.散热风扇转速答案：A17.核酸提取过程中，磁珠法与柱提法的主要区别是A.磁珠法无需离心B.柱提法灵敏度更高C.磁珠法成本更低D.柱提法适合大体积样本答案：A18.检测结果出现“NTC（无模板对照）阳性”，最可能的原因是A.引物设计错误B.扩增仪温度失控C.试剂被扩增产物污染D.样本核酸浓度过高答案：C19.关于实验室生物安全，错误的是A.所有样本按感染性物质处理B.离心时需使用带盖离心管C.废弃扩增产物可直接丢弃D.操作完毕需消毒实验服答案：C20.实时荧光PCR中，SYBRGreenⅠ的作用是A.特异性结合双链DNAB.标记探针C.灭活核酸酶D.稳定反应体系答案：A二、多项选择题（每题3分，共30分）1.PCR实验室必须配备的设备包括A.生物安全柜B.实时荧光定量PCR仪C.高速冷冻离心机D.超净工作台答案：ABC2.影响PCR扩增效率的因素有A.Mg²+浓度B.引物退火温度C.模板纯度D.扩增循环数答案：ABC3.核酸提取质量控制的指标包括A.浓度（ng/μL）B.OD260/OD230比值C.片段完整性D.检测方法学答案：ABC4.实验室污染预防措施包括A.各区专用移液器B.使用dUTP替代dTTPC.严格遵循单向工作流程D.定期更换实验服答案：ABCD5.关于弱阳性样本的处理，正确的是A.重复检测原样本B.增加PCR循环数C.重新提取核酸D.直接报告阴性答案：AC6.实时荧光PCR结果判读需考虑的因素有A.扩增曲线形态B.内参基因Ct值C.阴阳性对照结果D.样本采集时间答案：ABC7.实验室记录应包含的内容有A.试剂批号及有效期B.仪器运行参数C.操作人员姓名D.患者联系方式答案：ABC8.数字PCR的优势包括A.绝对定量B.抗抑制能力强C.无需标准品D.检测速度快答案：ABC9.核酸提取过程中，可能导致产量降低的原因有A.裂解时间不足B.洗脱体积过大C.磁珠吸附时间过短D.离心速度过高答案：AC10.实验室质量体系文件包括A.标准操作程序（SOP）B.质量手册C.记录表格D.人员培训档案答案：ABCD三、判断题（每题1分，共10分）1.PCR实验室可使用普通移液器替代带滤芯移液器。（×）2.核酸提取时，样本量越大，提取效果越好。（×）3.扩增产物分析区可进行加样操作。（×）4.阴性质控品出现阳性结果时，所有检测结果需重新验证。（√）5.实时荧光PCR仪的光学系统无需定期校准。（×）6.冷冻保存的核酸样本可反复冻融3次。（×）7.实验室废弃物应分类收集并交由专业机构处理。（√）8.引物设计时，GC含量应控制在40%-60%。（√）9.检测RNA病毒时，需先进行逆转录反应。（√）10.实验室生物安全等级应与检测样本风险等级匹配。（√）四、简答题（每题6分，共30分）1.简述PCR实验室“四区一室”的功能及气流方向要求。答案：PCR实验室通常分为试剂准备区、标本处理区、扩增区、产物分析区，外加缓冲区（一室）。气流方向应从清洁区（试剂准备区）向污染区（产物分析区）递减，形成负压梯度，避免交叉污染。具体为：试剂准备区→标本处理区→扩增区→产物分析区，各区压力依次降低。2.列举5种常见的PCR抑制物及其来源。答案：（1）血红蛋白（血液样本）；（2）肝素（抗凝剂）；（3）胆盐（粪便样本）；（4）苯酚（核酸提取残留）；（5）EDTA（过量抗凝剂）。3.实时荧光PCR中，如何通过扩增曲线判断实验有效性？答案：有效扩增曲线应呈现典型的“S”型，包括基线期、指数增长期和平台期。基线期荧光信号稳定（无明显波动），指数期斜率陡峭（扩增效率正常），平台期荧光信号不再增长（dNTP或引物耗尽）。同时，阴性质控无扩增曲线，阳性质控Ct值在预期范围内。4.简述核酸提取的基本步骤（以磁珠法为例）。答案：（1）样本裂解：加入裂解液破坏细胞膜，释放核酸并灭活核酸酶；（2）磁珠结合：加入磁珠，在高盐低pH条件下核酸吸附于磁珠表面；（3）洗涤：磁吸分离磁珠，用洗涤液去除蛋白质、盐离子等杂质；（4）洗脱：在低盐高pH条件下，核酸从磁珠表面解离，收集洗脱液即为纯化的核酸。5.实验室发生假阳性结果时，应如何排查原因？答案：（1）检查扩增产物污染：确认NTC（无模板对照）是否阳性，若阳性提示试剂或环境被污染；（2）验证对照品：检查阴/阳性质控是否符合预期，排除对照品失效；（3）追溯操作流程：回顾加样、核酸提取等步骤是否违反单向流程；（4）检测仪器状态：核查扩增仪温度准确性及光学系统灵敏度；（5）重复实验：使用新试剂、新耗材重新检测原样本，确认结果一致性。五、案例分析题（每题10分，共20分）案例1：某实验室检测新冠病毒核酸时，出现以下情况：患者样本Ct值为38（临界值为40），NTC阴性，阳性质控Ct=25（预期22-26），阴性质控无扩增。问题：（1）该结果是否可直接报告？（2）需进一步采取哪些措施？答案：（1）不可直接报告。Ct值38接近临界值，存在假阳性或低病毒载量可能。（2）措施：①重复检测原样本，使用同一批次试剂；②重新提取核酸后再次扩增；③若重复结果仍为38-40，结合患者临床症状、流行病学史综合判断；④记录异常结果及处理过程，纳入实验室质量分析。案例2：某实验室进行HPV分型检测时，发现连续3天的NTC（无模板对照）均出现Ct=32的扩增曲线，其余对照正常。问题：（1）最可能的污染来源是什么？（2）提出3种针对