FDA指南｜开发CAR-T细胞产品的考量（中英文版）

InternationalBiopharmaIndustryInternationalBiopharmaIndustryOrganization国际生物制药产业组织ConsiderationsfortheDevelopmentofChimericAntigenReceConsiderationsfortheDevelopmentofChimericAntigenReceptor(CAR)TCellProducts开发嵌合抗原受体(CAR)T细胞产品的考量DraftGuidanceforIndustry行业指南草案ConsiderationsfortheDevelopmentofChimericAntigenReceThisguidancedocumentisforcomSubmitonesetofeitherelectroprovidedintheFederalRegisternoticeannouncingtheavailabilityofthedraftguidance.Submitelectroniccommentsto.ManagementStaff(HFAnoticeofavailabilitythatpublishesintheFederalRegister.在《联邦公报》公布指南草案通知中提供的日期之前，可提交关于本指南草案的电子或书面评论。电子评论可向提交。书面意见可提交给食品和药物管您应该使用联邦公报中发布通知中列出的案卷编号来标识AdditionalcopiesofthisguidanceareavailablefromtheOfficeofCommunication,Outreachand20993-0002,orbycalling1-800-835-4709or240-40theInternetat/vaccines-blood-biologics/guidance-compliance-regulatory-本指南的其他副本可从通讯、外展和发展办公室(OCOD)获取，地址为10903NewHampshireAve.,Bld/vaccines-blood-biologics/guidance-compliance-regulatory-information-biologics。U.S.DepartmentofHealthandHumanServicesFoodandDrugAdministCenterforBiologicsEvaluationaiTableofContents目录 2 3 5 5 6 7 8 9A.VectorManufacturingandTesting载体生产和检测 B.Collection,Handling,andTestingof 1.CARTcellmanufact 2.CARTcellanalytica 17 D.ManagingManufacturingChangesandAssessingCompara 252.Comparabilitystudydesign可比 27E.Single-SiteorMultisiteManufactur 28 29 30A.GeneralPreclinicalConsi B.PreclinicalConsiderationsfortheVectorComp 30C.PreclinicalConsiderations 33E.CARTCellswithAdditionalModific 34 35A.StudyPopulation研究人群 1.Advancedvs.earlyd 2.Tissue-agnosticapproach组织不可 3.Targetidentificat 4.Pediatricsubjects儿科受 1.Doseselection,starting 39 4.Considerationformanufacturingdelayorfailure生产延迟或失 C.ClinicalPharmacologyConside 42 442.Toxicitygrading 453.Dose-limitingtoxicities(DLTs) 48 1ConsiderationsfortheDevelopmentofChimericAntigenReceptor(CAR)TCellProducts开发嵌合抗原受体(CAR)T细胞产品的考量DraftGuidanceforIndustry行业指南草案Thisdraftguidance,whenfinalized,willrepresentthecuAdministration(FDAorAgency)onthistopic.ItdoesnotestabisnotbindingonFDAortherequirementsoftheapplicablestatutesandregulations.TodiscussanalternativeapproacontacttheFDAstaffresponsibleforthisguidanceaslistedonthetitlepage.它不为任何人确立任何权利，也不对FDA或公众具有约束力。如果满足适用法规和法规的要求，您可以使用替代方法。要讨论替代方法，请联系标题页上列出的负责本指南的2I.INTRODUCTION介绍Chimericantigenreceptor(CAR)Tcellproductsarehumangenetherapy1productTcellspecificityisgenetictherapeuticpurposes.Thisguidanceisintendedtoassistsponacademicsponsors,developingCARTcellproducts.Inthisguidance,wecell-specificrecommendationsregardingchemistry,manufacturing,andcontrol(CMC),pharmacologyandtoxicology,andclinicalstudydesign.RecommendatiprovidesrecommendatthisguidancespecificallyfocusesonCARTcellproducts,muchoftheinfrecommendationsprovidedwillalsobeapplicabletoothergeneproducts,suchasCARNaturalKiller(NK)cellsorrelatedproducttypescanbehighlyspecialized,andinrecommendedinthisguprocess.TodiscussconsiderationssponsorscommunicatewiththeOfficeofTInvestigationalNewDrugApplication(IND)(e.g.,byrequestingapre-INDmeeting(Ref.以识别治疗目的所需的靶抗原。本指南旨在帮助发起人（包括行业和学术发起人）开发CART细胞产品。在本指南中，就化学、生产和控制(CMC)、药理学和毒理学以及临床研究设计，我们FDA提供针对CART细胞的建议。本指南中注明了针对自体或同种异体1Humangenetherapyseekstomodifyormanipulatetheexpressionofageneortoalterthebiologicalpropertiesoflivingcellsfortherapeuticuse.FDAgenerallyconsidershumangenetherapyproductstoincludeallproductsthatmediatetheireffectsbytranscriptionortranslationoftransferredgeneticmaterial,orbyspecificallyalteringhost(human)geneticsequences.Someexamplesofgenetherapyproductsincludenucleicacids,geneticallymodifiedmicroorganisms(e.g.,viruses,bacteria,fungi),engineeredsite-specificnucleasesusedforhumangenomeediting,andexvivogeneticallymodifiedhumancells.Genetherapyproductsmeetthedefinitionof“biologicalproduct”insection351(i)ofthePublicHealthService(PHS)Act(42U.S.C.262(i))whensuchproductsareapplicabletotheprevention,treatment,orcureofadiseaseorconditionofhumanbeings(seeFederalRegisterNotice:ApplicationofCurrentStatutoryAuthoritiestoHumanSomaticCellTherapyProductsandGeneTherapyProducts(58FR53248,October14,1993),/media/76647/download).人类基因疗法寻求修改或操纵基因的表达、或改变活细胞的生物学特性，以用于治疗用途。FDA通常认为人类基因治疗产品包括所有通过转录或翻译转移的遗传物质、或通过特异性改变宿主（人类）基因序列来介导其作用的产品。基因治疗产品的一些例子包括：核酸、基因改造的微生物（例如病毒、细菌、真菌）、用于人类基因组编辑的工程化位点特异性核酸酶，以及离体基因改造的人类细胞。当此类产品适用于人类疾病的预防、治疗或治愈时，基因治疗产品符合公共卫生服务(PHS)法案第351(i)节(42U.S.C.262(i))中对“生物制品”的定义（参见联邦公报通知：现行法定机构对人体细胞治疗产品和基因治疗产品的应用（58FR53248，1993年10月14日），/media/76647/download)。CART细胞产品的建议。本指南还为CART细胞产品的分析可比性研究提供了建议。虽然本指南特别关注CART细胞产品，但提供的大部分信息和建议也适用于其他转基因淋巴细胞产品，例如CAR自然杀伤(NK)细胞或T细胞受体(TCR)修饰的T细胞。这些相将取决于特定的产品和生产工艺。为了讨论这些相关产品的具体考量，我们建议，发起人在提交研究性新药申请(IND)之前与生物制品审评与研究中心(CBER)的组织和先进疗法办公室(OTAT)沟通（例如，通过请求IND前考量将取决于具体的产品和生产工艺。为了讨论这些相关产品的具体考量，我们建议，在提交研究性新药申请(IND)之前，发起人与生物制品审评与研究中心(CBER)的组织和先Thecontentsofthisdocumentdonothavetheforceandeffectoflawandarenotthepublicinanyway,unlessspecificallyincorporatedintonlytoprovideclaritytothepublicregardingexistingrequirementsunderthelaw.FDAguidancedocuments,includingthisguidanregulatoryorstatutoryreqmeansthatsomethingissuggestedorrecommended,butnotrequire本文件的内容不具有法律效力，也不以任何方式约束公众，除非特别纳入合同。本文件仅旨在向公众说明法律的现有要求。除非引用了特定的法规或法定要求，否则包括本指南在内的FDA指南应仅被视为建议。在FII.BACKGROUND背景CARTcells2areregulatedasagenetherapy(GTbiologicalproducts.Werecognizethatthedevelopment,manufacture,testing,andclinicalassessmentofCARTcellsischallenging.Carefuldesigtransgene3anddeliveryvectorarecriticaltoproductsafety,specmanufacturinginvolvesmultiplebiologicalmaterialsandcomplexmarepotentialsourcesofvariabilityamongproductlots.Thus,controlofthemanufacturingprocessandappropriatein-processandlotreleasquality,andlot-to-lotconsistency.Inaddition,changestothemanufacturingprocessduringproductdevelopment.Itisessentialtounderstandtheefquality.Comprehensiveproductcharacterizationstudiesarevaluablcriticalqualityattributes(CQAs)thestablishedthroughprocessqualificationtoensurethatmanufacCQAs(Ref.2).FDA’sguidanceentitled2CARTcellproductswillbereferredtoasCARTcellsthroughoutthisguidance.在本指南中，CART细胞产品将被称为CART细胞。3Forthepurposesofthisguidance,transgenemeansanexogenousgenethatisintroducedintoa为本指南的目的，转基因是指引入宿主细胞的外源基因。另见（参考文献10）。a4InformationforHumanGeneTherapyInvestigationalNforIndustry,”January2020(Ref.3)(hereinadescribesthegeneralconsiderationsforGTproductmanufacturingand在FDA现有的生物制品框架下，CART细胞被监管为基因治疗(GT)产品。我们认识到能，CAR转基因和传递载体的精心设计和适当检测至关重要。CART细胞生产涉及多种生物材料和复杂的多步骤程序，这些是产品批次间差异的潜在来源。因此，对于确保CART细胞的安全性、质量和批次间的一致性，生产工艺中评估的相关关键质量属性(CQA)，全面的产品表征研究很有价值（参考文献2）。然后可以通过工艺确认确定关键工艺参数(CPP)，以确保生产的批次始终符合CQA（2）。FDA的指南，题为“人类基因治疗研究性新药申请(INDs)的化学、生产和控制(CMC)信息：行业指南”，2020年1月（参考文献3以下简称“GTCMC指南”）描述PreclinicalevaluationofCAsafetoadministertheproductinaclinicalinvestigation(Title21oftheCodeofFederalRegulations312.23(a)(8)(21CFR312.23(a)(8)).PreclinicaltestingofCARTcellscanchallengingduetotheinherentbiologicalcomplexityandvariabilityofthisproducttypeandthelimitedavailabilityofsuitableanimalmodelstotepreclinicaltestingstrategyshouldbeappliedusinginvivo,invitro,andinsilicotestingstrategies,asappropriate,inconjunctionwithavailableclinicalandpreclinicaldatafromrelasupportuseofCARTcellsinaproposedclinicaltrial.对于支持在临床研究中使用该产品是合理安全的结论，CART细胞的临床前评估是必要的（联邦法规312.23(a)(8)(21CFR312.23(a)(8)第21条）)。由于该产品类型固有的生物学的临床前测试可能具有挑战性。应采用逐例临床前测试策略，可应测试策略，酌情结合相关产品的可用临床和临床前数据，以支持在拟议的临床试验中使用Well-designedearly-phaseclinicalstudiesarecriticaltoestablish:safetyoftheproduct,toriskmitigationmeasures,dose-respodifferencesinindication,andpreliminaryevidenceofefficacyandfeasibtaketomaketheproductandwhetherbridgingtherapcontroltheactivediseasewhilesubjectswaitforthcells,early-phasestudiescanalsoinformwithregar(GVHD).Informationgacellsinlater-phaseclinicalstudiesandmayexpeditetheclinicalde对于确定产品的安全性、对风险缓解措施的反应、剂量-反应关系、基于适应症差异的最佳剂量差异，以及有效性和生产可行性的初步证据，精心设计的早期临床研究至关对于自体CART细胞，早期研究还提供了有关的信息，如生产该产品需要多长时间、以及在受试者等待CART细胞治疗时是否将桥接疗法用作控制活动性疾病的尝试。对于同种异体CART细胞，早期研究还可以告知移植物抗宿主病(GVHD)的风险。从这些早期研究中获得的信息支持CART细胞在后期临床研究中的开发，并可能加快CART细胞的III.GENERALCONSIDERATIONSFORCARTCELLDESIGNANDDEVELOPMENTCART细胞设计和开发的一般考量CARTcellsarecomplexproductsthatmayincorporatemultiplefuncfthesefunctionalelements,howthefunctionalelementsareintroducedintothecells(i.e.,vercelldesignanddevelopmenCARsgenerallycontaintwotypesofdomains:antigenrecognitionandsignaling.AntigenrecognitiondomainsallowCARTcellstobindtooneormoretargetantigen(s).Werecommendsponsorsassesstheabilityofeachdomaintospecificallybindtoitstargetantigen,asdescribedinsectionV.Bofthisguidance.Manyantigenrecognitiondomainsarederivedfrommurinemonoclonalantibodiesthatmaybeimmunogenicinhumans,leadingtorejectionoftheCARTcellsorothersafetyrisks(e.g.,anaphylaxis).Ifapproachestoreduceimmunogenicity(e.g.,“humanization”byComplementarity-DeterminingRegiongrafting)areused,werecommendtheINDdescribethesechangesandtheirimpactontargetbindingandbiologicalactivity(Refs.4,5,6).CAR通常包含两种类型的结构域：抗原识别和信号传导。抗原识别结构域允许CART细胞与一种或多种靶抗原结合。我们建议，发起人评估每个结构域与其靶抗原特异性结合的能力，如本指南第VB部分所述。许多抗原识别结构域来源于鼠单克隆抗体，这些抗体可能对人类具有免疫原性，导致对CART细胞的排斥或其他如果使用降低免疫原性的方法（例如，通过互补决定区移植的“人源化”我们建议，Signalingdomainsinitiadomainsbethoroughlydemonstrated,asdescribedinsectionV.6thecontributionoftransmembranedomain,hinge,andlinkfunctionalregionsoftheconstructshouldbeevaluated,asthesemayaffe信号域启动T细胞激活。我们建议，全面阐明信令域例如，应评估用于分离构建体不同功能区域的跨膜结构域、铰链和接头区域delivergeneticmaterial.Examplesofvectorsincludeplasmids,viruses,andbacteriatcomponentthatfurnishesapharmacologicalactivityforthetreatmentofdisease(sectionIV.Bofvectorsortransposons)canprovidelongtermtransgeneexpressvectors.Longtermfollowupisrecommendedforprodbecauseintegratingvectorsmayipredictedriskofdelayedadverseeventsisthougenerallylongtermfollowupwouldnotbeneeded.修饰以转移遗传物质的质粒、病毒和细菌（参考文献10）。对于CART细胞，载体是提供治疗疾病的药理活性的关键成分（GTCMC指南（参考文献3）的IV.B部分）。与非整合载体相比，整合到细胞DNA中的载体（例如，基于逆转录病毒的载体或转座子）可以提供长期的转基因表达。建议对包含整合载体的产品进行长期随访，因为整合InadditiontotheCAR,vectorsmayexpressadditionalfunctionalelement除了CAR，载体还可以表达其他功能要素。例如，载体可以表达额外的功能要素，允许在生产工艺中选择或富集细胞亚群（参考文献11）；改变T细胞的持久性和/或活性（参effectiveness.Werecommendsponsorsprovidejustificationandreincorporationofadditionalelements.Thejustificationshouldincludeanassessmentofanyimpactthattheseadditionimmunogenicity,orsafety(seesectionV.Eofthisguidance).Transgenesunnecessaryforthebiologicalfunctionofapr7unanticipatedeffectsonproductpersistenceoractivity.Asageneralguidingprincirecommendthatunnecessarytransgenesshouldnotbeincludedinthevecto需要注意的是，每一个额外的功能要素都可能影响CART细胞的安全性和有效性。我们建议，发起人提供论证和相关数据，以支持纳入其他要素。论证应包括评估这些额外元素将对CART细胞特异性、功能、免疫原性或安全性产生的任何影响（参见本指南的第VE部分）。对产品的生物学功能而言不必要的转基因序列，其可能在体内具有免疫原性或对产品持久性或活性具有其他意料之外的影响。作为一般指导原则，我们建议，载体中不应C.CellularStartingMatforCARTfpatients(forautologousproducts)orhealthydonors(forallogeneicproIV.Bofthisguidance.4通常通过患者（对于自体产品）或健康供体（对于同种异体产品）的白细胞分离，来获得生产CART细胞的起始物料。如本指南第IV.B节所述，自体和同种异体产品的安全性和clinicalstudiesduetolackofresponsetothepreviouslyadministeredCARTcells,relapseofthestartingmaterial(e.g.,leukapheresis)fmaydifferfromthesampatientswhohavenot.PrevunexpectedeffectsonCARTcellmanufacturing(e.g.,expansionortransductionrates),invivoexpansion,safety,andefficacy.Therefore,evaluationofthepreviouslyadministeredCARTcelllevelsinthecelluassociatedwithincreasedvectorintegrationfrequencies,CARTcelltestievaluationofthevectorcopynumber(VCN)inthefiandpreviouslyadministeredCARTcells,ifthepreviouslyadministeredCARTcellsaredetectable.IfanautologousCARTcellCARTcellspreviouslyandpwhetheranygivenpatientwouldstitheadministrationofanadditionalCARTcellpreparativeregimen,suchaschemotherapyortotalbodyradiation,whichmayposelife-threateningriskofmyeloablationtopatientswhohavebeenpreviouslyextensivelytreated.Werecommendsponsorsdiscusstheseconside4SeealsoFDA’sdraftguidanceentitled“HumanGeneTherapyProductsIncorporatingHumanGenomeEditing:DraftGuidanceforIndustry,”March2022(GEDraftGuidance)(Ref.15).Whenfinalized,thisguidancewillrepresentFDA’scurrentthinkingontheseissues.另见FDA的指南草案，题为“包含人类基因组编辑的人类基因治疗产品：行业指南草案”，2022年3月（GE草案指南参考文献15）。最终确定后，该指南将代表FDA目前对这些问题的看法。8andclinicalstudydesig之前接受过CART细胞的患者可能会考虑进行不同的CART细胞临床研究，因为对之前给予的CART细胞缺乏反应、相同疾病的复发或不同恶性肿瘤的治疗。对于使用来自先前接受过CART细胞的患者的细胞起始物料（例如，白细胞分离术）产生的CART细胞，其可能不同于使用来自未接受过CART细胞的患者的细胞起始材料产生的相同类型的CART细胞。对于CART细胞生产（例如扩增或转导率）、效力、体内扩增、安全性和功效而言，先前在起始物料中施用的CART细胞可能具有意想不到的影响。因此，评估细胞起始物料中先前施用的CART细胞水平可能是适当的。此外，基于与增加的载体整合频率相关的风险，如果先前施用的CART细胞是可检测的，CART细胞检测应包括评估成品中新引入的和先前施用的CART细胞的载体拷贝数(VCN)。如果一项自体CART细胞临床研究将招募两种类型的患者：既往接受过CART细胞的和未接受过CART细胞的，则应在临床研究设计中评估和考虑CART细胞的潜在差异。发起人还应考虑任何特定患者是否仍有资格接受额外的CART细胞治疗所需的辅助治疗，包括另一种非清髓准备方案，如化疗或全身放疗，这可能对先前接受过广泛治疗的患者造成危及生命的清髓风险。我们建议，发起人在IND提交之前，与OTAT讨论产品表征、检测、给药和临床研D.FreshorCryopreservedFinalProducts新鲜或冷冻保存choiceofformulationdependsontheproductdevelopmentstrategyandpracticalconstrainCART细胞可配制用于新鲜输注或冷冻保存以备后FreshCARTcellshavealimitedshelflifebeforeproductqualitydegrades.Werecommendtthemaximumtimebetweenformulationandinfusionbedefinedandstudies.Additionally,thetimeframeinwhichreleasetestscanbeperformedislimited.Therefore,Assurance(QA)reviewforlotreleasofthefreshproductattheclinicalsite.新鲜的CART细胞在产品质量下降之前的保质期有限。我们建议，确定制剂和输注之间开发和实施精心设计的流程至关重要，其中可能包括：取样时间和批次放行检测；报告质Ontheotherhand,cryopreservationallowssufficienttimefschedulingpatientsforiaremanufacturedatacentrallocatiocryopreservedCARTcells,therisksassociassessed,andcontrolledthawingoftheproductattheclinproductquality.Regardlessoftheformulation,thereshouldbeappradequatecontroloftheCARTcellsduringshippingtotheclinicalsite.ThesbedescribedintheIND,inplacebeforeinitiatingclinicalstudies,andvalidatedp另一方面，冷冻保存为完全放行检测和安排患者输注的灵活性提供了足够的时间。当CART细胞在中心位置生产并运送到临床场所进行给药时，对于冷冻保存的CART细胞，应评估与输注冷冻保护剂相关的风险，并且临床现场受控下解冻产品可能对保持产品质量至关重要。无论配方如何，都应该有适当的程序来确保在运送到临床场所期间对CART细胞进行充分控制。这些程序应在IND中进行描述，在开IV.CMCRECOMMENDATIONSCMC建议WerecommendsponsorsorganizeinformationintheCommonTechnformatwiththevectorCMCinformationdescrandtheCARTcellinformationorganizedintoaseparateDSsectionandasepara(DP)section,asdiscussedinsectionIV.BoftheGTCMCGuidance(Ref.3).WhenCARTcellsaremanufacturedusingacontinuousprocesswherethereisnocleardivisionbetweentheDSandDP,werecommendthatyouprovideanexplanationtosupportyourDS/DPdistinctsummaryinformationinModule2oftheCTDsubtheformatandnumberingschemerecommendedinModule3ofFDA’sGuidanc“M4Q:TheCTD–Quality,”AugusfromoneanotherbyincludingtheDSnameandmanufacturerintheheading3.2.S.1GeneralInformation[name,manufacturer]).我们建议，发起人以通用技术文件(CTD)格式组织信息，将载体CMC信息描述在完整的原料药(DS)部分中，并将CART细胞信息组织到单独的DS部分和单独的药品(DP)部分中，如GTCMC指南（参考文献3）第IV.B节所述。如果CART细胞是使用连续工艺生产的，其中DS和DP之间没有明确的区分，我们建议，您在CTD提交的模块2的摘要信息中提供解释以支持您的DS/DP区分。CTDDS部分应遵循FDA行业指南模块3中推荐标题中包含DS名称和生产商来区分各个部分（例如，第3.2.S.1节一般信息[名称，生产TheemphasisforCMCinallphasesofdevelopmentisproductsafetyandmanufacWerecommendthatCARTcellsbedevelopedfollowingalifecmanner.TheamountofCMCinformationtobesubmittedinyourINDdependsonthephaseandthescopeoftheclinicalinvestigationpvectorsaretobemanufacturedunappropriateforthestageofCosmeticAct(FD&CActinformationmaybeneededtoalignproductdeveespeciallywhenthelatterisrapidlyprogressingunderanexpediteddevelopmentpCMC在所有开发阶段的重点是产品安全和生产控制。我们建议，按照生命周期方法开发CART细胞，在产品开发过程中收集信息、并以适合阶段的方式提交。要在您的IND中您可能不需要完成原始IND提交中的所有CTD部分。同样，CART细胞和载体将在适合开发阶段的GMP条件下制造（《联邦食品(2)(B)节21U.S.C.351(a)(2)(B)另见参考文献17）。可能需要额外的CMC信ForCARTcellsintheearlystagesofclinicaldevelopment,andsometestsmaystillbeunderdevelopment(secti3)).Cellularcharacterizationdatacollectedduringearlystudiesclaterdevelopmenttoensureprimaryobjectiveistogathermeaningfuldataaboutproductefficacy,werecommendthatacceptancecriteriaberefinedtoensurebatchesarewell-definedandconsistentlymanufactured.对于处于临床开发早期阶段的CART细胞，最终确定的质量标准很少，一些检测可能仍在开发中（GTCMC指南（参考文献3）的VA4.a部分对于支持产品开发和可比性评估，特性研究至关重要。对于主要目标是收集有关产品功效的有意义数据的研究，我们建议，改进可接受标准，以确保批次定义明确并始终如一地生A.VectorManufacturingandTesting载体生产TheGTCMCGuidance(Ref.3)providesrecommendationsformanufacturingvector.Thevectorshouldbewell-characterizedpriortoinitiationofclinicalstudies.Forlicensure,thevectormustbemanufacturedaccordingtoCGMPstandards(2LicenseApplication(BLA)review,vectormanufacturingfacilitiesaresubjecttoinspectGTCMC指南（参考文献3）为载体的生产和检测提供了建议。在开始临床研究之前，应充分表征载体。为获得许可，载体必须按照CGMP标准（21CFR第210和211部分）生产，并且分析方法必须经过验证（21CFR211.165(e)，参考文献18）。在CART细胞生VectorqualitydirectlycontributestothequalityandconsistencyoftheCARTrecommendthatsponsorsdescribethevectorstructure,characterizationandtestingoftheMasterandWorkingCellBanks,characterizationofreferencematerials,vectormanufactureandtesting,andvectorstability.Vectorlotreleasetestingshouldincludemeasuresofsafety,identity,purity,andpotency.Apotencyassaythatassessesthebiologicalactivityofthetransgemeasureofpotencymaybesufficienttosupportearly-pmeasuresofbiologicalpotencywilllikelyberequestedforcliprimaryevidenceofeffectivenesstosupportamarrecommendvectorlotreleasetestingincludecanbeusedtonormalizetheamountofvectorusedfortransductionduringCARTcellmanufacturing.Forexample,werecommendtestingviralvectorsfortransducingunitspermilliliter(mL)inasuitablecellthenbeoptimizedtodeterminetheamounpercentageofCAR-positivecellsintheCARTcellDP.载体质量直接影响CART细胞的质量和一致性。我们建议，发起人描述载体结构、主细体批放行检测应包括安全性、鉴别、纯度和效力的测量。可以与CART细胞效力测定一起开发评估转基因生物活性的效力测定。单独的转基因表达作为效力的衡量标准可能足以支持早期IND研究；然而，临床研究可能需要额外的生物效力测量，旨在提供有效性的主要证据来支持上市申请。此外，我们建议，载体批放行检测包括确定载体浓度的测定，该测定可用于标准化CART细胞生产工艺中用于转导的载体量。例如，我们建议，在合适的细胞系或健康供体细胞中检测病毒载体的每毫升(mL)转导单位。随后，可以优化T细胞转导以确定每个细胞添加的载体量，以实现CART细胞DP中CAR阳性细胞的目标百分比。Vectorsafetytestingshouldincludemicrobiologicaltestingsuchassterility,AdditionaltestingmayberecommendeddependingonthetypeoftransgenevectForexample,thereareadditionalsafetyconcernsrelatedtotheuseofretroviral-basedvectorsandadditionaltestingexp19)).TherecommendationsforlonconcernsassociatedwiththevectorandthepropensityforthevectortointeCART细胞DP不受影响。根据所使用的转基因载体的类型，可能会建议如，与使用基于逆转录病毒的载体和额外的检测预期相关的其他安全问题（GTB.Collection,Handling,andTestingofCellularStartingunction.Duetopatientordonorvarsourceoflot-to-lotvariability.Here,wedescribeconsusingstartingmaterofcellularstartingmaterialaswell.用作起始物料的细胞的性质可能对CART细胞的质量和功能至关重要。由于患者或供体的变异性，细胞起始物料可能是批次间变异性的主要来源。在这里，我们以从白细胞分离本节中的建议也可能适用于其他类型的细胞起Werecommendthatproceduresusedforhandlingtheleukapheresisstartingmaterialfromcollectiontothestartofthemanufacturingprocessaredescribedasdiscussedinsectcryopreservationprocedures.Werecommendtheseproccollectionsitestoensurequalityoftheprocess,ithemanufacturingsite.Youshocontroloftheleukapheresisstartingmatemperaturecontrol),andinformatioshouldbeprovided.Validationoftheshippingprocesincludingassessmentofleukapheresisstartingmateriashouldbeincludedforlicens我们建议，按照GTCMC指南（参考文献3）的VA2.c.ii部分中的讨始生产工艺的用于处理白细胞分离起始物料的程序。该描述应包括任何洗涤步骤或冷冻保存程序。我们建议，在所有白细胞分离采集点实施这些程序，以确保过程质量，包细胞和运送到生产场所。您应该有适当的程序，来确保在运输到生产设施期间对白细胞分离起始物料进行充分控制（例如，温度控制并且应该提供有关运输容器和温度监测的信息。运输过程和任何保留或冷冻保存步骤的验证，包括在预期条件下评估白细胞分离起Theprobabilityofmanufacturingsuccessmaybeincreasedbyestablishingacceptancecriteriaforspecifyaminimumcellnumber,viability,andpercentCD3+cells.Werecommtheleukapheresisstartingmaterialformicrobialcontamination(e.g.,stereventofaDPsterilitytestfailure.Additionalcharacterizationoftheleukapheresisstartingmaterial(e.g.,forpercentandabsolutenumberofCD4+andCD8+Tcells,NKcells,monocBcells)mayinformtheCARTcellmanufacturingprocessasthesecharacteristicTcellselectionandexpansionand通过建立用于CART细胞生产的白细胞分离起始物料的可接受标准，可以提高生产成功始CART细胞生产之前检测白细胞分离起始物料的微生物污染（例如，无菌或生物负对数量）可能会为CART细胞生产工艺提供信息，因为这些特征可能会影响T细胞的选Autologousleukapheresisstarttheotherhand,doesrequiredonoreligibilitydeterminationandscreenicellbanksoriginatingfromallog自体白细胞分离术起始物料不需要确定供体资格（参考文献23）、筛选或检测（21CFR1271.90(a)(1)）。另一方面，同种异体白细胞分离术起始物料确实需要根据21CFR第1271部分的C子部分确定供体资格、以及对相关传染病病原体进行筛查和检测。在GTCMC指南（参考文献3）的V.A.2.c.ii.b部分中，讨论了来自同种异体细胞或组织的细胞TomaintaintheChainofIdentity(COI),labelingandtrackingofmaterial,fromcollectionalltheAdditionally,werecommendlabelibuiltintothebatchrecordpriortoeachprocessingstep.TheCOIshouldalsoclinicalsitewithtwoIV.C.3ofthisguidanceforconsiderationsregardinglabelingfortheCARTcellDP.为了维护鉴别链(COI)，必须记录从收集到CART细胞管理的材料标签和跟踪（21CFR骤之前将标签检查内置到批记录中。COI还应在临床现场进行维护，并在床边进行两名独立的患者和标签检查。有关CART细胞DP标记的考量，请参阅本指南的第productprofile(Refs.24,25).Recommendationsforthemaearlyproductcharacterization(sectionIV.A);characterizationoandii);manufacturingprocessdevelopment(sectionsV.A.2.fanddetailsforCARTcellmanufacturingandtesting.CART细胞生产是一个复杂的过程，应进行定制以实现目标产品配置（参考文献24、的建议。我们建议，发起人考虑GTCMC指南（参考文献3）中的建议（如适用）：早期产品表征（第IV.A节）；杂质的表征（第VA3.bi和ii部分）；生产工艺开发（VA2.f和VB2.c部分和设施考虑（第VC1节）。本指南提供了有关CART细胞生产Coupledwithdonor-to-donorvariabilityinherenttothecellularstartingmaterial,multi-smanufacturingprocessescanbeasourceofvariability.TominconsistencybetweenCARTcelllots,werecommendthemanufacturingprocessbewell-controlled.Thiscanbeachievedviatheuseofqualitymaterials,in-processcprocesstesting,andtestingofintermediatesandthefinalproductforCQAs(Ref.26).再加上细胞起始物料固有的供体间变异性，多步骤生产工艺可能是变异性的来源。为了最大限度地减少变异性、并促进CART细胞批次之间的一致性，我们建议，对生产工艺进CARTcellmanufacturingoftenrequiresspecializedancilqualityofsuchmaterialexample,werecommendthathumanoranimal-derivedcomponentsarenotsogeographicalareasofconcernforpotentialviraland/ortransmissiblespon(TSE)agentcontaminaLot-to-lotvariabilityandstabilityofreagentscqualifyancillarymaterialsforquality,safety,andpotencythroughvendorqualificationprogramsandincomingmaterialqualificationprograms,includingquarantine,CertificateofAnalysis(COA)andCertificateofOrigin(COO)assessment,visualinspection,andtesting,asappro例如，我们建议，人源或动物源性成分不得来自可能受到病毒和/或传染性海绵状脑病(TSE)病原体污染的地理区域，并且建议对成分进行适当的外源性病原体检测。试剂的批次间变异性和稳定性也可能存在问题。我们建议，通过供应商确认计划和进料确认计划（包括检疫、分析证书(COA)和原产地证Toassureproductsafety,Chowever,thefinalDPcannotbeterminallysterilizedascellsneedtfunctional.Therefore,manufacturingshouldbeconductedbundercurrentgoodmanufacturingpractice(CGMP)conditions(Ref.27supportedbytheuseofsterilitytestingChapter71oranappropriatelyqualifiedandvalidatedtestmethod.为确保产品安全，CART细胞应不含活的污染微生物；然而，最终的DP不能最因为细胞需要完全存活并发挥功能。因此，应在cGMP条件下使用经过验证的无菌工艺进TheINDshouldcontaininformationdemonstratingtheabitotheproposedmanufacturingprocessthroughtheproductionofdevelopmentalorenginebatches.Tosupportprocessdevelopment,sponsorsmaycrossreferenceinformationfconstruct)atthesamefacility.Generally,startimanufacturingprocessdevelopmentalbatches.However,patient-derhaveintrinsicpropertiesthataffectCARTcellman