DB65绵羊冷冻胚胎

Frozenembryosofsheep2018-05-30实施2018-05-30实施新疆维吾尔自治区质量技术监督局发布本标准参照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求制定。本标准由新疆维吾尔自治区畜牧总站提出。本标准由新疆维吾尔自治区畜牧厅归口。本标准起草单位：新疆维吾尔自治区畜牧总站、新疆畜牧科学院生物技术研究所(新疆畜牧科学院中国-澳大利亚绵羊育种研究中心)、新疆华牛天俊种畜繁育工程有限公司。本标准起草人：耿娟、汪立芹、卢全晟、吴阳升、林嘉鹏、卫新璞、韩冰、张玲、程黎明、贾旭升、邓强、史洪才、黄俊成、黎霞。I绵羊冷冻胚胎本标准规定了绵羊冷冻胚胎的生产要求、抽样、试验方法、判定规则以及包装、标识、贮存和运输的技术要求。本标准适用于绵羊的冷冻胚胎产品。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T2828.2-2008计数抽样检验程序第2部分：按极限质量(LQ)检索的孤立批检验抽样方案GB/T2828.11-2008计数抽样检验程序第11部分：小总体声称质量水平的评定程序GB/T5458液氮生物容器GB/T16306声称质量水平复检与复验的评定程序3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。冷冻胚胎frozenembryo经过超低温冷冻处理的、能够在液氮中(-196℃)长期保存的胚胎。胚胎解冻后，存活胚胎占总胚胎的百分率，见公式(A.1)。复腔率blastocystrecover胚胎解冻后，经培养一段时间，恢复囊胚腔的胚胎数占总囊胚数的百分率，见公式(A.2)。4生产要求4.1种母羊行鉴定见表1,将胚胎依次分为下列4个等级：胞密度大，卵裂球均匀、边缘整齐、没有游离细胞或很少，变性细胞比例为10%;b)B级：胚龄与胚胎发育阶段符合，透明带完整无缺胞密度小，卵裂球较均匀、边缘整齐、有少部分游离细胞，变性细胞比例20%～30%;c)C级：透明带完整或有缺陷、轮廓不清晰，色泽过暗或过淡，细胞密度水泡，游离细胞占70%以上，细胞变性率为40%～50%;d)D级：透明带完整或有缺陷，胚龄与胚胎发育阶段不相符，未受精，发育停滞，卵裂球少而可观察到卵裂球，卵裂球间的界线不清晰，无法确定卵裂球的数量，卵裂球逐渐紧缩，占胚桑椹胚的细胞团继续紧缩，完全分不清卵裂球的界线，细胞团边的细胞团仅占据胚胎体积的60%～70%细胞团体积逐渐变大，在细胞团内部出现一个微小的、发亮的、充满法分清内细胞团和滋养层细胞，细胞团占据胚胎体囊胚腔增大明显，内细胞团和外周的滋养层细胞分离，细胚胎体积增至1.2倍～1.5倍，囊胚腔充分a)胚胎冷冻前后的质量均应达到B级(含B级)以上为合格；b)形态完整，细胞紧凑的比例不高于80%;d)冷冻胚胎解冻后，放入37℃~38.6℃二氧化碳培养箱培养1h后，胚胎存活率不低于80%;e)冷冻胚胎解冻后，放入37℃~38.6℃二氧化碳培养箱培养12h后，囊胚腔复腔率不低于70%。2对抽取样本的检验，按照GB/T2828.2-2008中5.2的规定，当d≤Ac,则判可接收；当d≥Re,对抽取样本的检验，按照GB/T2828.11-2008中6.10的规定，当d<L(不合格品限定数),则抽检样本符合要求，判定核查通过，当d≥L,则抽检样本不符抽取样本应在监督总体(一批绵羊冷冻胚胎)中随机抽取，按照监督抽样方案已知抽检绵羊冷冻检验项目常规检验型式检验水平抽检。质量监督检验可为不定期。3细管冷冻胚胎应在管壁(或包装袋)上印制以下内容，并且印制标志要清楚：4DB65/T4120-2018(资料性附录)绵羊冷冻胚胎质量检验方法A.1胚胎数量检查A.1.1仪器和器材显微镜，细管剪刀，塑料小皿。A.1.2检查方法取一支细管冻胚，在空气中停留10s,在37℃~39℃的水浴中解冻15s,细管剪刀剪去两端，把冷冻胚胎液倒入小皿中，在显微镜下检出胚胎，确定胚胎数量。A.2胚胎存活率的检查A.2.1主要仪器和器材显微镜、恒温水浴箱、塑料小皿、二氧化碳培养箱、捡胚针、移液枪、枪头。A.2.2培养液配制d)0.6μl/ml乳酸钠；h)0.299mg/ml二水氯化钙；j)2%必需氨基酸。A.2.2.2培养液配制成分如下：b)5mg/ml牛血清白蛋白。A.2.3检查方法在小皿上做0.5ml的滴液3个，将检出的胚胎，用培养液洗涤3遍，放入二氧化碳培养箱培养1h后，根据胚胎形态，检查胚胎存活率。二氧化碳培养箱培养12h,在显微镜下观察，确定囊胚腔恢复的胚胎数，检查冷冻胚胎复腔率。5库七七标准下载A.2.4计算a)绵羊冷冻胚胎的存活率按式