溶血性贫血实验室检查课件

红细胞相关参数溶血性贫血实验室检查红细胞相关的实验室检查血细胞比容测定红细胞平均值：MCV、MCH及MCHC红细胞体积分布宽度测定溶血性贫血实验室检查一、血细胞比容血细胞比容定义：血细胞比容(Hematocrit,HCT)，又称血细胞压积（packedcellvalue,PCV），指血细胞在血液中所占容积的比值抗凝血离心后所测得溶血性贫血实验室检查参考值：RBC(×1012/L)Hb(g/L)Hct(%)平均成年男性4.0～5.5120～1600.40～0.500.45成年女性3.5～5.0110～1500.37～0.480.40新生儿6.0～7.0170～200溶血性贫血实验室检查临床意义血细胞比容增高血液浓缩：严重腹泻、呕吐等致脱水红细胞绝对值增高血细胞比容减低见于各种贫血红细胞比容的减少与红细胞数的减少并不一致溶血性贫血实验室检查二、红细胞平均值的计算：平均红细胞容积(meancorpuscularvolume,MCV)平均红细胞血红蛋白量(meancorpuscularhemoglobin,MCH)平均红细胞血红蛋白浓度(meancorpuscularhemoglobinconcentration,MCHC)溶血性贫血实验室检查1、平均红细胞容积(MCV)每个红细胞的平均体积。单位：fl。计算公式：

MCV=每升血液中血细胞比容=Hct(L/L)×1015

每升血液中红细胞数RBC(×1012/L)参考值：80～100fl溶血性贫血实验室检查2、平均红细胞血红蛋白量(MCH)每个红细胞内所含血红蛋白的平均量。单位：pg计算公式：

MCH=每升血液中血红蛋白量=Hb(g/L)×1012

每升血液中红细胞数RBC(×1012/L)参考值：27～34pg溶血性贫血实验室检查3、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)每升血液中平均所含血红蛋白浓度。单位：g/L（%）计算公式：MCHC=每升血液中血红蛋白量=Hb(g/L)

每升血液中血细胞比容Hct(L/L)参考值：

32～36g/L溶血性贫血实验室检查临床意义：贫血的形态学分类贫血形态学分类MCV(80～100fl)MCH(27～34pg)MCHC(32～36%)病因正常细胞性80～10027～3432～36AA、失血、溶贫、AL大细胞性>100>3432～36巨幼细胞性贫血、恶性贫血小细胞低色素性<80<27<32缺铁贫、珠蛋白生成障碍等单纯小细胞性<80<2732～36慢性感染、炎症、肝病、肿瘤、风湿性疾病、尿毒症溶血性贫血实验室检查贫血的形态学分类取决于红细胞计数、血红蛋白量、血细胞比容测定的准确性外周血涂片检查红细胞形态非常重要溶血性贫血实验室检查三、红细胞体积分布宽度：redbloodcellvolumedistributionwidth，RDW是反映红细胞体积异质性的参数。由血细胞分析仪测量而获得。是反映红细胞体积大小不等程度的客观指标。以变异系数(RDW-CV)来表示。参考值：11.5～14.5%临床意义：贫血的形态学分类；缺铁性贫血的诊断和鉴别诊断。溶血性贫血实验室检查贫血的形态学分型：MCVRDW贫血类型增高正常大细胞均一性部分再障增高大细胞非均一性MDS、巨幼贫正常正常正常细胞均一性急性失血性贫血增高正常细胞非均一性部分再障、PNH、G-6-PD缺乏减低正常小细胞均一性珠蛋白生成障碍性贫血、球形细胞增多症等增高小细胞非均一性缺铁性贫血溶血性贫血实验室检查溶血性贫血

的实验室检查溶血性贫血实验室检查什么叫溶血性贫血？

hemolyticanemia----指各种原因导致红细胞生存时间缩短、破坏增多或加速，骨髓代偿造血功能不足时所发生的一类贫血。什么叫溶血性疾病？指骨髓代偿能力尚足以补偿红细胞的损耗而不出现贫血。溶血性贫血实验室检查溶血性贫血的分类(病因和发病机制)1、RBC内在缺陷所致的溶贫（1）

RBC膜缺陷：遗传球PNH

（2）

HB结构异常：海洋性贫血（3）RBC内酶缺陷：G-6PD缺乏症2、RBC外来因素所致的溶贫

AIHA、药物、化学因素、感染因素溶血性贫血实验室检查溶血性贫血的分类（溶血的场所）1、血管内溶血：RBC在循环血液中直接破坏，如血型不合输血PNH2、血管外溶血：RBC在脾脏破坏，如球形RBC增多症、脾亢3、原位溶血：幼RBC在骨髓中溶血，如AL、巨幼贫溶血性贫血实验室检查如何诊断溶血性贫血？第一步确定是否有溶血第二步哪一类溶贫溶血性贫血实验室检查一、首先确定有无溶血（一）找出RBC破坏增多的依据（1）RBC寿命缩短（2）血片见RBC碎片（3）血浆游离HB增高（血管内溶血）（4）HB尿检测（＋），酱油色（5）尿含铁血黄素试验（＋）（6）血清非结合胆红素（间接胆红素）增高（7）尿胆原增高（8）血清结合珠蛋白减低（9）血浆高铁血红素清蛋白检测（＋）电泳法：区带溶血性贫血实验室检查Hb代谢示意图

珠蛋白血红素铁+卟啉单核巨噬系统脾脏血管外溶血RBC血管内溶血血浆游离Hb肾脏血红蛋白尿游离胆红素肝脏结合珠蛋白近曲小管上皮细胞肾阈结合胆红素粪胆原的肠肝循环含铁血黄素尿

Rous实验胆汁粪胆原肠道血液肾脏尿胆原高铁血红蛋白清蛋白/血红素蛋白溶血性贫血实验室检查溶血性贫血筛查红细胞寿命测定方法：51Cr标记红细胞，检测其半衰期正常红细胞半衰期25—32天溶血性贫血者半衰期小于5天确定溶血性贫血的可靠方法溶血性贫血实验室检查溶血性贫血筛查血浆游离血红蛋白测定参考值：＜50mg/L(1-5mg/dl)

临床意义：血管内溶血者明显升高AIHA、珠蛋白生成障碍性贫血者轻度升高血管外溶血时正常溶血性贫血实验室检查溶血性贫血筛查血清结合珠蛋白测定参考值：0.7-1.5g/L临床意义：各种溶血均可减低，血管内溶血减低最显著肝病、传单、先天性无结合珠蛋白血症减少或消失感染、创伤、糖皮质激素治疗、服用避孕药物、肝外阻塞性黄疸可增高溶血性贫血实验室检查溶血性贫血筛查血浆高铁血红素清蛋白测定方法：生化法：与硫化铵形成铵血色原，经光谱仪测定558nm吸收光带电泳法：醋酸纤维膜电泳正常值：阴性临床意义：阳性者表示严重的血管内溶血溶血性贫血实验室检查溶血性贫血筛查含铁血黄素尿试验（Rous试验）原理：铁离子+氰化钾铁氰化铁（蓝色）如肾小管上皮有含铁血黄素，该试验阳性正常值：阴性临床意义：阳性者表示慢性血管内溶血，如PNH溶血性贫血实验室检查含铁血黄素溶血性贫血实验室检查（二）显示红细胞代偿增生依据外周血网织红增多；外周血红细胞形态：

大小不均，大红细胞、嗜多色细胞及有核红细胞，Howell-Jolly小体、Cabot环、点彩红细胞等增生性贫血骨髓象：

增生明显活跃，红系显著增生，粒系相对减少，巨核系一般正常

溶血性贫血实验室检查二、哪一类溶血性贫血？（一）红细胞膜缺陷的检验

红细胞渗透脆性试验红细胞孵育渗透脆性试验自身溶血试验及纠正试验溶血性贫血实验室检查1、

红细胞渗透脆性试验原理:正常红细胞为双凹圆盘状,在低渗盐水中吸水膨胀的适应性较大(可增加70%的体积而不破裂)遗传性球形细胞增多症等红细胞的表面积/体积(S/V)的比值小,对低渗盐水的适应性小(脆性增大)本试验是测定红细胞在一系列不同浓度低渗氯化钠盐水内开始溶血和完全溶血的氯化钠浓度，检测其对不同浓度的低渗盐水溶血的抵抗力。

溶血性贫血实验室检查

红细胞渗透脆性试验

（erythrocyteosmoticfragilitytest)

原理：低渗溶液红细胞皱缩红细胞膨胀甚至破裂高渗溶液等渗溶液正常低渗溶液溶血性贫血实验室检查

参考值

0.6-0.8%NaCl溶液——红细胞不破裂

0.42-0.46%NaCl溶液——部分红细胞破裂

0.28-0.34%NaCl溶液——红细胞完全破裂NaCl0.85%0.6%0.42%0.34%0.8%0.7%对低渗溶液抵抗能力减小即RBC渗透脆性增加溶血性贫血实验室检查临床意义

（1）脆性增高

开始溶血及完全溶血时氯化钠浓度较正常对照提前两管，即0.04%以上;开始溶血＞0.5%，完全溶血＞0.38%主要见于遗传性球形红细胞增多症（2）脆性减低

小细胞低色素性贫血：海洋性贫血、缺铁性贫血溶血性贫血实验室检查2、红细胞孵育渗透脆性试验

原理

37℃孵育24小时，细胞内葡萄糖消耗增加，ATP减少，钠离子泵出减少，细胞膨胀，脆性增高。

参考值

未孵育50%溶血4~4.45g/LNaCl

孵育50%溶血4.65~5.9g/LNaCL

临床意义——常用于轻型遗传球、遗传性非球形细胞溶血的诊断

脆性增高遗传性球形红细胞增多症脆性减低缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、镰形细胞贫血、脾切除术后溶血性贫血实验室检查3、自身溶血试验及纠正试验

原理

先天性非球形红细胞溶血患者红细胞内酶缺陷，葡萄糖酵解障碍，ATP不足不能维持细胞钠泵作用患者红细胞在自身血浆中孵育48h，溶血增强，可加入葡萄糖、ATP，观察溶血能否被纠正

参考值

正常人孵育后轻微溶血、溶血度＜3.5%加葡萄糖和加ATP后，溶血明显纠正，溶血度＜1%溶血性贫血实验室检查3、自身溶血试验及纠正试验

临床意义——常用于遗传球、遗传性非球形细胞溶血的鉴别诊断

遗传性球形细胞增多症遗传性非球形细胞性溶贫（Ⅰ型）葡萄糖6磷酸脱氢酶缺陷症（Ⅱ型）丙酮酸激酶缺陷症孵育后溶血增强增强增强加葡萄糖后溶血明显纠正部分纠正不能纠正加ATP后溶血明显纠正部分纠正纠正溶血性贫血实验室检查（二）红细胞酶缺陷的检验

定义：红细胞酶缺陷所致溶血性贫血又称红细胞酶病，指参与红细胞代谢的酶由于基因缺陷，导致活性改变而发生溶血的一组疾病内容：高铁血红蛋白还原试验氰化物-抗坏血酸试验变性珠蛋白小体生成试验葡萄糖-6-磷酸脱氢酶荧光斑点试验和活性测定丙酮酸激酶荧光筛选试验和活性测定溶血性贫血实验室检查原理1、高铁血红蛋白还原试验G6PD正常NADPH还原型辅酶Ⅱ烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸高铁血红蛋白亚铁血红蛋白NADPH充足溶血性贫血实验室检查G6PD高铁Hb还原酶G6PG6-PANADPNADPH还原型美兰氧化型美兰高铁Hb（Fe3+）为褐色氧合HB（Fe2+）红色结果：光电比色法，正常还原率＞75%，低于75%为异常，提示G6PD活力↓，74～31%为G-6PD缺乏的杂合子（红棕色），30%以下为显著缺陷的纯合子（为棕色—目测比色法）。溶血性贫血实验室检查参考值高铁血红蛋白还原率＞75%高铁血红蛋白0.3~1.3g/L临床意义G6PD缺陷导致高铁血红蛋白还原率下降见于蚕豆病、伯氨喹型药物溶血性贫血1、高铁血红蛋白还原试验溶血性贫血实验室检查原理:6-磷酸葡萄糖

NADP

GSH

H202

氧合血红蛋白

6-磷酸葡萄糖酸

NADPH

GSSG

H20

高铁血红蛋白结果:正常人标本呈红色G-6PD2、氰化物-抗坏血酸试验临床意义:正常血液数小时后变成暗色纯合子G6PD缺乏者2h变色杂合子G6PD缺乏者3~4h变色溶血性贫血实验室检查3、变性珠蛋白小体生成试验又称“红细胞包涵体”、“赫恩小体”、“Heinz小体”、“海因小体”原理：G-6PD缺乏致红细胞内GSH减少，高铁血红蛋白增高，形成变性珠蛋白小体，沉着于红细胞膜上。

抗凝血+乙酰苯肼37℃温育2～4h充分的氧化

其Hb氧化成Heinz小体（用结晶紫、甲紫或煌焦油兰染色，油镜观察）溶血性贫血实验室检查1.正常人＜30%2.G6P缺陷症、不稳定Hb、HbH病等常高于45%结果：

该小体为圆形或多角形色涵体，φ0.2～2um。多位于红细胞边缘，一个红细胞含1～20个，多为1～2个，以含5个以上小体的红细胞计数溶血性贫血实验室检查4、G6PD荧光斑点试验和活性测定原理:

G6PD使NADP还原成NADPH,后者在紫外线照射下发出荧光

参考值：正常人强荧光；酶活性5U/gHb

6-磷酸葡萄糖NADPGSHH202

氧合血红蛋白

6-磷酸葡萄糖酸NADPHGSSGH20高铁血红蛋白G-6PD溶血性贫血实验室检查5、丙酮酸激酶荧光筛选试验和活性测定原理:

ADP+PK磷酸丙酮酸

丙酮酸NAPH

乳酸NAD（无荧光）溶血性贫血实验室检查参考值正常PK活性荧光在20min内消失酶活性15.1±4.99U/gHb临床意义PK严重缺乏（纯合子）荧光60min不消失杂合子荧光25~60min消失溶血性贫血实验室检查(三)、珠蛋白合成异常的检测溶血性贫血实验室检查血红蛋白的结构

原卟啉

血红素Hb（四聚体）铁

2条α链

珠蛋白：由4条多肽链组成

2条非α链正常人HbA（

22）97%HbA2（22）1.5-3%HbF（22）0.5-0.8%溶血性贫血实验室检查

血红蛋白病珠蛋白肽链量的不正常(地中海贫血)血红蛋白分子结构异常(异常血红蛋白病)遗传性溶血性疾病

溶血性贫血实验室检查

1.血红蛋白电泳蛋白质的两性性质—是由氨基酸的NH+与COO-

决定的。等电点—调节水溶液的pH，能使蛋白质的NH+与COO-数目相等呈电中性，此时蛋白质无电泳，在水中电解度小，并发生沉淀。

电泳：一个带电荷的离子或胶体颗粒在电场中可向一极移动。

原理：在一定的pH缓冲液中，缓冲液的pH大于Hb等电点，其带负电，在电场中向阳极移动；反之向阴极移动。由于各种Hb珠蛋白肽链结构不同，其等电点不同，电泳方向和速度亦不同，故可分离出不同的区带，对区带进行电泳扫描，可进行Hb定量分析。溶血性贫血实验室检查(+)HJKAGDE(-)

1.HbH增多是HbH病，为α-地中海贫血的一种；HbA2明显增高见于轻型β地中海贫血；HbF明显增高见于中重型β地中海贫血。

2.正常值：醋纤法（PH8.6）HbA96%~98%，HbA21.0%~3.1%，HbF＜2%电泳结果CAA2FA异常正常溶血性贫血实验室检查2.胎儿蛋白HbF（22）酸洗脱试验：含HbF红细胞着色原理：HbF抗酸力强临床意义：脐带血、新生儿、婴儿阳性成人小于1%地中海贫血轻者少数红细胞阳性地中海贫血重症阳性细胞增多溶血性贫血实验室检查

3.HbF定量测定（碱变性试验）:

原理：碱性溶液中HbF不易变性沉淀，可测定滤液中Hb量临床意义：2岁-成人HbF<2%，>4%为异常重型地贫80-90%AL、AA、淋巴瘤等可轻度升高溶血性贫血实验室检查

4.HbA2定量测定

诊断轻型地贫的重要依据5.限制性内切酶谱分析基因诊断溶血性贫血实验室检查(四)、自身免疫性溶血性贫血检测溶血性贫血实验室检查自身免疫性溶血性贫血

（autoimmunehemolyticanemia,AIHA)定义：体内免疫异常，产生自身抗体、补体，结合在红细胞膜上使红细胞破坏加速病因：尚未完全阐明，可能因素：病毒感染可激活多克隆B细胞或化学物与红细胞膜相结合，改变其抗原性，导致自身抗体产生分类：

可为原发性的，也可继发于结缔组织病、造血系统肿瘤、感染等按抗体反应最适温度分为温抗体型和冷抗体型，后者又分为冷凝集素综合征和阵发性冷性血红蛋白尿溶血性贫血实验室检查1.Coombs试验（抗人球蛋白试验）

原理：不完全抗体(IgG)，无法架接两个邻近的红细胞，而只能和一个红细胞抗原相结合。抗人球蛋白抗体是完全抗体,可与多个不完全抗体的Fc段相结合,导致红细胞凝集现象,称为抗人球蛋白试验阳性。

目的：检查红细胞表面的或血清中游离的不完全抗体，用于诊断AIHA。直接CoombsTest(+)说明病人RBC表面上包被有不完全抗体间接CoombsTest(+)则说明病人血清中存在着不完全抗体溶血性贫血实验室检查Coombs血清（抗人球蛋白血清）溶血性贫血实验室检查（1）直接试验１．正常人：阴性２．直接反应阳性，最常见于AIHA（其他有药物诱发的溶贫、阵发性冷性Hb尿、新生儿同种免疫溶血病、SLE、类风湿关节炎、恶性淋巴瘤等）。目的：测定吸附于红细胞表面的不完全抗体方法：结果：溶血性贫血实验室检查（2）间接试验有过剩抗体时直接、间接均为阳性。AIHA分三型：C3型12%，IgG型24%，IgG+C3型60%。冷凝集素病为IgM抗体。目的：测定血清中游离的不完全抗体方法：结果：间接阳性，见于AIHA，正常人为阴性。病人血清正常RBC抗IgG溶血性贫血实验室检查2.冷凝集素试验原理冷凝激素是可逆性抗体：低温时可与自身红细胞、O型红细胞、患者同型红细胞发生凝集，温度升高时，凝集块又复消失参考值