秦皇岛地区猪丹毒病流行情况调查及防治研究

秦皇岛地区猪丹毒病流行情况调查及防治研究摘要猪丹毒病是由猪丹毒杆菌引起的一种急性、热性人兽共患性传染病，属国家二类动物疫病。临床上可表现急性败血型、亚急性型皮肤出现疹块以及慢性关节炎和心内膜炎等不同病型。近几年来，秦皇岛地区规模化猪场降低了对猪丹毒疾病的防控意识，取消了猪丹毒疫苗的免疫方案，但是自2016年以来猪丹毒大有卷土重来的趋势，发病率逐步提高，中大猪和母猪急性死亡的病例在逐步提高，部分猪出现典型或非典型的疹块，给养猪生产带来了巨大危害。本次调查针对秦皇岛地区规模化猪场进行调查和研究，通过临床诊断，实验室诊断对猪丹毒病的流行情况和综合防控措施做全面的阐述。更加完善临床诊断的鉴别特点和流行特点的分析，完善综合防控措施的手段和方法，为规模化猪场管理人员和兽医提供更多的参考。关键词：猪丹毒临床症状诊断防控建议目录1.前言……………………1254131.1研究背景 错误!未定义书签。257581.2理论依据 11.3立题意义………………………119092.猪丹毒病的病原及流行特点 226582.1病原特点 2270192.2流行病学特点 错误!未定义书签。246773.临床症状及病理变化…………………3181523.1主要临床症状 33.2主要病理变化 3230514.实验室诊断 358364.1实验室检验 34.2检验结果分析 45.流行病学调查…………56.综合防控建议…………67.讨论与总结………………………758367.1讨论 77.2总结 8后记………………………8参考文献…………………91.前言1.1研究背景猪丹毒病是由猪丹毒杆菌引起的一种急性、热性人兽共患性传染病，其主要特征高热急性败血症、亚急性疹块型和慢性疣状心内膜炎及多发性化脓性关节炎。自20世纪30年代首次报道该病的流行以后，一些证据表明大约每隔10年就会再次发生更为严重的猪丹毒爆发流行[1]。近几年全国各地都有猪丹毒疾病的报道，其中多以夏季发生为主，部分地区呈爆发式流行[2]。在规模化养殖中由于饲养管理不当、卫生条件恶劣、饲料和环境的突然变化及长途运输等，都是发生本病的诱因。近年来，秦皇岛市多家规模化养猪场突然发生以母猪、部分育肥猪为主的急性、烈性猪病。病猪表现食欲减退、体温升高41-42℃甚至更高、呼吸急促、昏睡卧地不起。部分猪出现下颌部、腹部以及全身皮肤出现潮红，严重的耳朵或全身皮肤发紫。病猪陆续出现急性败血症的症状，在发病1-2天出现死亡。整体病程表现发病急、传染快、病程短、死亡率高等特征。给该地区的养猪业带来极大损失。此疫病通过流行病学调查、临床诊断、实验室诊断和治疗诊断最终确诊为败血型猪丹毒病。该病全世界都有分布，也为我国主要的猪传染病之一。本病一年四季都有发生，常为散发和地方性流行，尤其是炎热潮湿多雨季节更易发生，主要感染中大猪和母猪，发病率一般为10-15%，严重的死亡率可达50%[4]。20世纪80时年代之前，人们对猪丹毒病的防控非常重视，每个猪场都会使用猪丹毒疫苗，猪丹毒得到了有效的控制，发病率逐步降低。近几年来，秦皇岛地区规模化猪场降低了对猪丹毒疾病的防控意识，取消了疫苗的免疫方案，但是自2012年以来猪丹毒大有卷土重来的趋势，发病率逐步提高，中大猪和母猪急性死亡的病例在逐步提高，部分猪出现典型或非典型的疹块，给养猪生产带来了巨大危害。由于在规模化猪场的管理人员和临床兽医，对本病的重视程度不够、诊断经验不足，相关的检测方法缺失、防控措施与治疗方案不合理等因素，往往导致本病给猪场带来严重的危害。1.2理论依据猪丹毒杆菌为正直或弯曲的小杆菌，长0.6–2.5微米、宽0.2-0.4微米。本菌为微需氧型或兼性厌氧菌。在血琼脂培养基中培养24-48小时后，生成针尖状露珠样的小菌落，菌落呈圆形、灰白色、透明，有的形成狭窄的绿色溶血环[5]。猪丹毒病一年四季均可发生，常为散发和地方性流行。营养不良、酷热、潮湿、阴雨等环境因素影响发病率。该病潜伏期3-5天。临床上分为急性型、亚急性型和慢性型。急性型多表现败血症，病程3-4天，死亡率在80%左右。亚急性型，其特征为皮肤表面出现方形、菱形，偶有圆形疹块。慢性型多表现关节炎、心内膜炎和皮肤坏死。于病猪高温时取耳静脉血，死后取心、肝、脾等脏器病料接种到含血清的胰蛋白胨大豆琼脂，，37℃培养24小时，如发现细长、成对、成丛的杆菌，革兰氏染色阳性即可初步诊断[6]。对疑似猪丹毒杆菌的菌落，进行PCR鉴定。1.3立题意义秦皇岛地区规模化猪场众多，养猪是秦皇岛畜牧业的重要产业，全市有两个“生猪调出大县”，养殖数量庞大，养殖规模化程度较高，很多规模化猪场都自建有实验室或与外部实验室开展合作，具有无菌采样的条件。规模化猪场的检测化验意识相对较强，能为采样提供很多便利条件。在加上笔者在此地区从业多年，有良好的客户基础。能从一线掌握更多疾病流行情况，为诊断提供更多素材。同时与秦皇岛职业技术学院动物医学实验室有很好的合作，能为本研究提供良好的实验室基础和实验条件。本研究根据发病情况、临床症状、流行情况、病原的分离培养、PCR鉴定与综合防控措施，提高临床兽医对猪丹毒的诊断方法的了解程度，提高猪场管理者猪丹毒的防控意识。合理使用疫苗，综合防控。降低经济损失，提升生产成绩，为当地的养猪生产提供技术参考。2.猪丹毒病的病原及流行特点2.1病原特点猪丹毒自然病例遍布世界各地，主要是由血清型为1a、1b或2的猪红斑丹毒丝菌所引起，不常见的血清型对猪没有感染力。猪丹毒丝菌是一类不能运动、无芽孢、不耐酸、细长的革兰氏阳性杆菌[7]。是一类兼性厌氧菌，且能够在5-44℃的温度范围生长，最适的生长温度为30-37℃。丹毒丝菌形成的菌落光滑或粗糙，其中粗糙型菌落稍大，边缘不规则。在琼脂培养基上，35℃或27℃温度下孵育24h后可形成透明的环形小菌落（直径0.1-0.5mm)；在孵育48h后菌落增大（直径0.5-1.5mm）。大多数菌株在血琼脂培养基上能够诱导产生狭窄的溶血带，其通常呈现绿色。改病原菌喜碱性，pH在7.2-7.6之间。丹毒丝菌一般不运动且与过氧化氢酶、氧化酶、甲基红或吲哚不发生反应，但在三糖铁琼脂培养基中能够产酸和硫化氢。猪丹毒丝菌对不良环境的抵抗力相当强，抗干燥，动物组织内的细菌在各种条件下能存活数月。因此，本菌在冻肉、腐尸、血痂及鱼粉中可长期存活。猪丹毒丝菌能被一些常规的消毒剂灭活，然而对结构复杂含有有机质的设备消毒剂很难发挥更好的作用。2.2流行病学特点据估计，大约有30-50%外观健康猪的扁桃体和其他淋巴组织内潜伏有猪丹毒丝菌。这些携带者能通过排泄物和口鼻分泌物散布病菌，因此将其列为传染源。另外，从近半数的啮齿动物和野鸟体内分离出猪丹毒丝菌，因此这些动物尤其是养殖场中常见的啮齿动物是该病的间接传染源。猪丹毒病的传播途径广泛，接触传染是重要的传播途径之一。猪丹毒丝菌被认为通过口鼻分泌物和粪便直接传播，并且能通过环境污染物间接传播。也可以通过被污染的饲料、饮水、土壤、猪舍用具传染给易感猪。也可以通过蚊、蝇、虱、蜱等吸血昆虫叮咬传播。猪丹毒病主要发生于青年猪，及1-2胎的母猪。仔猪和6胎以上的母猪很少。其他多种动物、野生动物和禽类，如马、牛、羊、犬、鸡、鸭等有发病的报道。小鼠和鸽对猪丹毒丝菌最敏感，在该菌的动物试验中广泛使用。本病一年四季都有发生，常散发和地方流行。但每年的夏季高温多雨的季节，是发病的高峰期。营养不良、潮湿、高温等环境和应激因素也影响猪的易感性。3临床症状及病理变化3.1主要临床症状近年来我市多家养殖场发生以母猪和育肥后期生猪发病的急性猪病。病猪表现为体温升高，41-42℃，呼吸急促、食欲低下或废绝，多数晚上采食正常，第二天早上病死于栏中，病程急死亡率高。猪群个别猪下颌部、腹部以及全身皮肤出现充血、淤血。病程稍长的发病猪，2-3d后皮肤出现方形、菱形和圆形紫色疹块、凸起、指压不褪色(图1，图2）。图1皮肤疹块图2紫色疹块、凸起3.2主要病理变化病猪解剖的主要症状是全身性的败血症病变，在心脏、脾脏、肝脏、肾脏、淋巴等多个组织器官都可见到败血性的出血。心肌和心外膜上有斑点状出血。腹股沟和肠系膜淋巴结充血肿胀、脾脏肿大出血、肺淤血水肿。肾脏皮质出血。关节轻度肿胀，滑膜及关节周围组织可见有浆液性纤维蛋白渗出物。胃底部和幽门部弥漫性出血。肝脏充血出现白斑。4实验室诊断4.1实验室检测4.1.1实验材料与设备病料采集：通过采取疑似病猪的心、肝、肺脏、淋巴结等组织作病料料。主要试剂和培养基：TapDNAPolymerase、dNTPs、Trans2kDNAmarker均购自takara公司，其他常规试剂和设备均为秦皇岛职业技术学院实验提供。4.1.2实验室检验方法细菌的分离和培养：病料分别接种于含血清的TSA平板，37℃烛缸培养24小时；然后挑取单个菌落进行革兰氏染色镜检，对疑似猪丹毒丝菌的菌落挑出接种到新的TSA平板上进行纯化培养。生化试验：用接种环将TSA培养基上生长纯化的细菌接种到生物微量发酵管中，37℃条件下培养24h后观察结果。生物试验参考《常见细菌系统鉴定手册》[8]提出的方案。分离菌株PCR鉴定：参照文献[9]设计猪丹毒杆菌的检测方法，扩增片段的理论长度为472bp。药敏实验：挑取分离菌株，涂布于TSA平板，用无菌镊子将药敏片贴于培养基表面，于37℃烛缸中培养24h后测量抑菌圈直径。判断标准：抑菌圈直径≤10mm为不敏感（耐药），10-20mm为中度敏感，≥20mm为高度敏感。4.2检验结果分析细菌分离培养：在平板上生长出灰白色、透明、表面光滑、圆形、针尖大小（直径小于1mm)单个菌落(图3），挑取单个菌落进行革兰氏染色镜检，可见革兰氏阳性纤细的杆状细菌（图4）。图3：表面灰白色透明、光滑、圆形针尖大小菌落图4：涂片经革兰氏染色可见阳性纤细杆菌生化鉴定结果：分离菌生化特性试验结果表明，能分解葡萄糖、乳糖、半乳糖、果糖，产酸不产气，不分解甘露醇、山梨糖、蜜二糖、淀粉、蔗糖，β-半乳糖苷阳性，能产生硫化氢，不产生靛基质，触酶反应阴性。基本符合《常见细菌鉴定手册》中对中丹毒杆菌的描述。PCR鉴定结果：猪丹毒丝菌疑似菌株经PCR反应得到目的条带大小为472bp,与预期片段大小一致（图5），进一步证明分离菌株为猪丹毒丝菌。图5注：从左到右按顺序为Mark、阳性对照、阴性对照、样品1、样品2药敏实验结果：药敏试验结果表明：分离菌株对阿莫西林、青霉素G、头孢氨苄、氟苯尼考、表现较高度敏感，与国内相关文献报道基本一致[10-11]；对多西环素、恩诺沙星中度敏感，对卡那霉素、庆大霉素、四环素、磺胺不敏感,与陆萍[12]、薛辉[13]报道一致（表1）表1药敏片抑菌圈直径(mm)结果判定阿莫西林30高度敏感青霉素G28高度敏感头孢氨苄（先锋霉素Ⅳ）26高度敏感氟苯尼考23高度敏感恩诺沙星20中度敏感多西环素15中度敏感卡那霉素0不敏感庆大霉素0不敏感四环素0不敏感磺胺0不敏感5流行病学调查本次调查针对秦皇岛地区多家规模化猪场。通过既往病史与疫病信息总结、现场临床及病理变化，结合相应实验室诊断等手段，经过各宗信息汇总：近年来发生过猪丹毒的猪场48家，占调查总数的80%，发生的主要集中在育肥的中大猪和2-3岁的母猪，发生的年份集中在2012-2014年，其中2013年发生的比例最高，与中国兽医学报发布全国的猪丹毒流行相吻合（图5）。发生的月份主要集中在6-10月间，这也和我市高温多雨的季节相吻合，也与来自全国流行的情况相吻合(图6）。我市的猪丹毒疫情看似偶然，其实在全国的疫情发生过程来看应该说也是必然的。应该说它完全符合猪丹毒疾病的发生发展规律，符合疫病的流行与控制的防控过程。图5图65综合防控措施由于本病原的生物学特性，其是环境中的常在病原菌，属于条件性致病菌。预控猪丹毒的根本办法，必须贯彻“预防为主”的方针，加强疫苗免疫，加强饲养管理，做好卫生和消毒，增强猪的抗体水平和抵抗力。特别是在规模化养殖条件下，由于饲养密度、环境卫生、舍内湿度与温差等所造成的不利因素，一定要加以改善。加强管理：猪场要建立全面系统的生物安全体系，防止通过人员、车辆、饲料、饮水、野生动物将猪丹毒病原菌传入猪场。要全进全出，每批都要进行严格的清洗、消毒、通风干燥。搞好猪舍内外的环境卫生，保持舍内清洁干燥；饲养密度不宜过大，特别是易发病的夏季潮湿高温、是猪丹毒病发生的高发季节。提升免疫力：猪蓝耳病、猪圆环病、霉菌毒素、滥用抗生素及营养不均衡造成猪体免疫力下降，抵抗力降低也造成猪丹毒病流行的重要原因。要消除免疫抑制性因素，猪群可以添加提升免疫力的中药制剂，如黄芪多糖、参芪粉、杜仲提取物等。同时猪群添加多种维生素，提升营养水平，促进机体机能的恢复。免疫接种：定期使用猪丹毒弱毒活疫苗或者灭活苗对全场猪群免疫接种，要严格按照免疫接种程序执行疫苗免疫。药物控制与预防:为更全面的控制猪群发生猪丹毒病，在母猪分娩前后、猪群转群移动、气候多变等不利因素发生前或发生过程中，使用敏感性药物是十分必要的。如猪群零星出现症状，应将病猪及可疑病猪隔离治疗，对假定健康猪群及时使用敏感药物进行投放，越早发现，越早控制，效果越好，损失越小。定期消毒：多种消毒液对猪丹毒菌都有很好的杀灭作用，可以选择使用戊二醛、聚维酮碘、二氯异尿酸钠、过硫酸氢钾等消毒液，对全场进行消毒。每周2-3次，发病阶段可以加强消毒的频次。病猪治疗与处理：根据前文所描述的该病基本信息与相关实验室诊断方法和结果，针对病猪可选用阿莫西林、青霉素G、头孢氨苄等药物进行治疗，或结合临床实际情况与药敏实验结果，选择敏感性高的药物，并结合对症治疗。治疗时要严格按治疗剂量和用药频次和疗程进行。病死猪要及时做好无害化处理，以免形成新的传染源。规模猪场的饲养管理水平是影响发病率的主要因素，而规模猪场管理者与基层兽医工作者的责任态度有直接影响猪场的管理水平。猪场要建立完善的生物安全体系，加强和改善饲养管理，合理进行免疫接种和药物控制能有效的防止猪丹毒病的发生。7讨论与总结7.1讨论近年来我市流行的主要发生于新母猪及育肥生猪的急性、高死亡率的传染病是由猪丹猪丝菌引起的猪丹毒病。临床表现为发病急、病程短、死亡快，死后皮肤无出血、发绀及猪丹毒典型的打火印特征，直至部分病程长的发病猪皮肤才出现指压褪色的“打火印”，因此在发病初期很难确诊。此外，猪丹毒病与猪蓝耳病、猪瘟、伪狂犬病、猪弓形体病及猪肺疫等疾病的临床症状和病理变化相似，极易容易误诊，不能及时的确诊会给猪场造成极大的经济损失。近年来猪丹毒在我市的流行情况，与猪丹毒在全国范围的流行情况十分相似并且密切相关。发生的高峰年份主要集中在2012-2016这几年，发生的月份也主要集中在6-10月间。这与2012年夏季我市的强降水，气温偏高，气候潮湿，有利猪丹毒疫情的传播。夏天蚊蝇的泛滥，养殖场疏于对蚊蝇的防范，也加剧了猪丹毒疫情的肆虐。由于高致病性蓝耳病、圆环病毒病等病毒的影响，养殖场将防控重点转移到了这些病毒病的防控，从降低了对猪丹毒病的重视，致使对该病的预警预测、基础研究及防控研究都出现了断层。一线养殖场对该病的预防空白和野毒毒力增强及年轻技术人员对猪丹毒的诊断、防治了解有限。在该病发生时，技术人员对疫情的处理存在缺陷，导致猪场疫情的反复，造成重大经济损失。通过对分离菌株的药敏试验结果，对阿莫西林、青霉素G、头孢氨苄高度敏感。但在临床上对抗生素的剂量、给药途径也有很大的误区。在发生猪丹毒病后，猪只能否获得足够的有效的药物抑菌浓度非常关键，同时辅助性治疗也至关重要。对刚发病猪使用青霉素肌注必须达到治疗剂量，且一天不少于3次，同时配合解热镇痛类药物[14]。对全群防控、治疗采用脉冲式饮水给药，切忌饲料投药治疗。为防止猪群复发，免疫疫苗是关键。7.2总结根据流行病学调查、临床症状、解剖症状、病原分离培养、生化试验、PCR鉴定，这次流行于秦皇岛地区的流行病为猪丹毒丝菌引起的猪丹毒病。此次猪丹毒发病情况和以往的临床表现不一样，以往通常感染育肥猪，母猪少见，本次发病急，而且导致感染母猪急性死亡，所以根据此次猪场发病情况，大家要对猪丹毒丝菌引起的母猪急性死亡提高警惕。本次药敏试验选择兽医临床上常用的几种药物对分离的病菌原菌进行药敏试验，结果显示该菌株对阿莫西林、青霉素G、头孢氨苄高度敏感。临床治疗过程应选用高度敏感的药物。猪丹毒病的防控的根本办法，必须贯彻“预防为主”的方针，消除降低猪体抵抗力的不良因素，加强饲养管理，做好兽医防疫卫生工作，以增强猪体的抵抗力[15]。另外这次疫病的流行也规模化猪场管理者的意识有很大原因，忽视了猪丹毒疫苗的免疫工作，发病过程由于死亡急、发病快、症状不明显等特点造成了前期的误诊，耽误了最佳的治疗时期。同时猪场的环境卫生和生产管理水平也发病的重要因素，特别是在规模化养殖条件下，由于饲养密度、舍内空气质量与温差等所造成的不利因素，一定要加以改善。要时刻绷紧疾病病防控这根弦，加强管理提高意识杜绝疾病发生。预防最重要，最有效的手段就是接种疫苗，可以选择商品化的灭活苗和弱毒疫苗，根据猪场的实际疫病情况选择疫苗及制定科学合理的免疫程序。采取多种手段，综合防控，稳定生猪生产。后记论文成文之际，首先要感谢我的论文辅导老师中国农业大学的庞宇梓老师。从论文选题、开题报告的撰写以及论文写作的各个阶段，庞老师多次在百忙中抽出时间对我进行指导。并就论文写作过程中的存在问题提出许多极为中肯的修改建议，在此向庞老师表示最衷心的感谢。感谢河北秦皇岛电大给我提供的优良的学习环境，两年多的网络学习生活即将结束，在这里我逐渐成长为一名具有一定专业知识和管理能力的畜牧兽医工作人员。今后我一定要学以致用