双环醇的研究进展

双环醇的研究进展摘要双环醇(bicyclol,商品名“百赛诺”)是由我国自主研发，是临床上治疗病毒性肝炎所导致的转氨酶升高的一线用药，是一种联苯双脂结构的类似物。经过广泛的动物实验以及临床实验，现已证实双环醇可以显著降低扑热息痛、异烟肼、紫杉醇等药物引起的急性肝损伤。双环醇通过清除自由基，保护受损肝细胞核的DNA和线粒体，减少细胞凋亡，预防肝纤维化，减轻肝脏炎症损伤。双环醇能够与恩替卡韦、甘草酸二铵、还原型谷胱甘肽等多种药物联合使用可以发挥协同作用，服用后不会产生明显不良反应，且停药后反跳率低。本文主要对它的药理作用、临床应用、合成路线以及含量分析等方面进行了描述，并指出现阶段该药物发展所面临的问题和挑战，并对其今后的发展提出美好的期望。关键词：双环醇；肝炎；临床应用；合成路线；含量分析

ResearchprogressofbicyclolAbstractBicyclol(bicyclol,tradename“Bicyclol”)isindependentlydevelopedbyourcountry.Itisafirst-linedrugforthetreatmentofelevatedtransaminasescausedbyviralhepatitisinclinicalpractice.Itisananalogofbiphenylbilipidstructure.Afterextensiveanimalexperimentsandclinicalexperiments,ithasbeenconfirmedthatbicyclolcansignificantlyreduceacuteliverinjurycausedbydrugssuchasparacetamol,isoniazid,andpaclitaxel.Bicyclolcanreducetheapoptosis,preventliverfibrosis,andreducetheinflammatorydamageoftheliverbyscavengingfreeradicals,protectingthedamagedlivercellnuclearDNAandmitochondria.Bicyclolcanbeusedincombinationwithentecavir,diammoniumglycyrrhizinate,reducedglutathioneandotherdrugstoplayasynergisticeffect,therewillbenoobviousadversereactionsaftertaking,andthereboundrateislowafterstoppingthedrug.Thispaperintroducedthepharmacologicaleffects,thechlinicalapplications,syntheticroutes,thecontentdeterminationofbicyclol.Moreover.itpointedouttheshortageofthedevelopmentofbicyclolandexpectedthenicedevelopmentofbicyclol.Keywords:Bicyclol;hepatitis;clinicalapplication;syntheticroute;contentdetermination

前言病毒性肝炎是一种由肝炎病毒引起的，以肝脏病变如肝肿大，肝纤维化是乙类传染病的主要表现。主要临床表现为厌食、恶心、上腹部不适、肝区疼痛、乏力。有的患者会出现黄疸、发热，多数伴有肝功能损害。慢性病患者甚至发展为肝硬化，少数人发展为肝癌。我国是病毒性肝炎的高发国家，每年约有30万人死于肝炎或肝癌[1]。病毒性肝炎不但影响我国国民健康水平，扰乱卫生保健系统，同时也给国家带来巨大的经济负担。双环醇的出现使得这一现状得到改善。双环醇于上世纪70年代由中国医学科学院药物研究研究人员历经数十年研制成功，2020年4月在全国上市（规格为25mg），是中国首个具有国际自主知识产权的抗肝炎一级新药，它在治疗慢性肝炎上取得的显著效果得到广泛的认可并使之成为国内外研究慢性肝炎用药的研究热点。

1双环醇的研发历程双环醇，化学名为4,4′,-二甲氧基-5,6,5′,6′-双（亚甲二氧基）-2′,-羟甲基联苯-2-甲酸甲酯。呈白色或白色晶状粉末，无臭。溶于氯仿或丙酮；溶于乙腈；微溶于乙酸乙酯；微溶于乙醇；几乎不溶于水。化学结构式如图1所示[2]。图1双环醇的结构双环醇这款药是从我国已有2000多年临床治疗历史的中药五味子中提取并经人工合成所制。五味子中含活性成分——联苯环辛烯型木脂素。木脂素具有保护肝细胞膜和抗脂质过氧化作用，能有效增强肝脏解毒功能。苗锡永在《本草经疏》中提出“五味子以益气为主，肺以益气为主，酸可收，正入肺补气，故益气”[3]，目前，五味子已成为治疗肝炎的一线药物。上世纪70年代，中国医学科学院医学研究所的研究人员发现五味子素C在治疗肝炎方面具有很强的活性，随后又发现五味子素C用于治疗转氨酶水平升高引起的慢性病毒性肝炎。毒性小，安全性好。2010年12月，双环醇片被列入消炎、抗氧化、保肝的推荐药物。此外，自2004年以来，双环已在乌克兰、越南、韩国、俄罗斯等9个国家上市。双环醇使我国新药在国际市场上崭露头角，提高我国新药在国际市场的地位，推动了我国新药的自主研发，刺激了我国的社会效益和经济效益。2双环醇的临床研究2.1双环醇治疗慢性乙型肝炎的临床研究本实验采用双盲法，将407例慢性乙型肝炎患者按2:1的比例随机分为双环醇组（269例）和联苯双酯组（138例）。观察治疗24周后的肝功能，并随访12周。结果：双环醇组治疗前ALT水平≥200U·L的患者在治疗12周和24周时平均ALT水平分别为62.5％和64.5％，约50％的患者在停药12周后仍保持稳定。治疗12周和24周时，联苯双酯组平均ALT下降53.6％和61.6％，低于双环醇组。双环醇组停药后12周HBeAg阴转率为48％，血清HBeAg阴转率为38％，明显高于联苯双酯组(22％和12％)[4]。治疗期间无明显不良反应。结论：双环醇能显著降低乙型肝炎患者转氨酶水平，且无明显不良反应，患者耐受性好。2.2宫颈癌化疗期间双环醇片预防肝损害临床研究本研究将90例宫颈癌化疗患者随机分为治疗组（双环醇片45例）和对照组（甘草酸二胺肠溶胶囊45例）。两组化疗前肝功能均正常。化疗期间，治疗组服用双环醇片，对照组服用甘草酸二胺肠溶胶囊。化疗后检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和总胆红素(TBIL)水平变化，并进行比较。结果显示，两组化疗期间肝损害程度不同，其中治疗组肝功能异常率为28.9％,对照组为51.1％，以对照组为甚[5]。实验表明：双环醇片能够减轻化疗药物对肝功能的损害，且用药过程中无严重不良反应，血常规、肾功能未见异常改变。2.3双环醇片对非酒精性脂肪肝患者肝功能的影响一项研究将非酒精性脂肪肝患者随机分为实验组（49例）和对照组（49例）。观察期间，试验组用双环醇片治疗，对照组用护肝片治疗。疗程2个月。比较两组患者临床总有效率及不良反应发生情况。结果实验组总有效率为83.67％，明显高于对照组（65.31％），无明显不良反应[6]。结果表明，双环醇片具有较好的稳定性。通过清除自由基和其他有毒物质，保护肝细胞膜和线粒体。能显著降低血清氨基酸转移酶水平，减轻肝组织炎症坏死，抑制肝纤维化[7]。综上所述，双环醇片能够显著改善非酒精性脂肪肝患者的肝功能水平，值得临床进行深入研究。3双环醇的临床应用双环醇作为我国首个具有国际知识产权的抗肝炎药物，自上市以来得到业界的认可。作为抗肝炎一线用药，在肝炎的临床治疗上起到了不可估量的作用。3.1临床适用范围双环醇临床用于慢性乙型和丙型肝炎、非酒精性肝炎、酒精性肝炎[8]和药物性肝损伤。3.2使用方法及疗程3.2.1病毒性肝炎：常规剂量为25~50mg／次，3次／天，疗程一般为3～6个月[9]。根据病情的严重程度可以延长疗程。患者切勿突然停药，建议减量停药，每次减量间隔期为1个月，减量期间应复查血清氨基转移酶水平。血清氨基转移酶水平下降前要保持稳定才可继续减量。首次给药剂量为25mg／次，3次／天的患者，可减量至25mg／次，2次／天。1个月后，若血清氨基转移酶持续稳定，可停药；首次给药50mg／次，3次／天的患者，可减量至25mg／次，3次／天。1个月后如果血清氨基转移酶持续稳定，便可按照原方法减量停药。3.2.2脂肪性肝病：非酒精性脂肪肝：常规剂量为25~50mg／次，3次／天，至少口服6个月以上，注意减量停药[10]。此外，患者服药期间应注意肝功能的监测，只有肝功能恢复正常、影像学检查显示脂肪肝消退，才能停药。酒精性肝病：建议剂量为25~50mg／次，3次／天，根据患者情况，酌情停药。3.2.3药物性肝损伤：双环醇可以显著降低扑热息痛、异烟肼[11]等药物引起的急性肝损伤所导致的氨基转移酶升高的水平。起到保护肝脏的作用。预防性用药：对正在服用肝损伤药物和药物性肝损伤高危因素的患者，建议服用双环醇片预防肝损伤。常规剂量为25mg／次，3次／天。如遇特殊情况（如血液病大剂量化疗），可采用50mg／次，3次／天进行预防。治疗性用药：对于已经出现出药物性肝损伤的患者，常规剂量为25~50mg／次，3次／天。3.3不良反应及注意事项偶见皮疹、恶心、上腹部不适等症状。极少数患者会出现头痛、失眠、血小板下降等,可视具体情况采取相应措施。无严重不良反应。一般无需停药，对症治疗即可缓解。对于肝功能失代偿者应谨慎使用。4双环醇的联合用药4.1双环醇与恩替卡韦联合应用治疗慢性肝炎抗病毒是临床治疗慢性肝炎的关键。恩替卡韦可选择性抑制HBV-DNA的复制。其作用机制是磷酸化为三磷酸盐，与HBV-DNA多聚酶的天然底物三磷酸脱氧鸟嘌呤核苷竞争性抑制。最终达到抑制HBV-DNA复制的目的[12]。而且对野生株和变异株均能起到抑制作用。对于乙肝患者来说，双环醇能促进淋巴细胞分泌γ干扰素和白细胞介素功能，使抗病毒水平得到提高。除此之外，双环醇还能够通过上调糖脂转移蛋白水平起到限制病毒复制的作用[13],从而达到治疗丙肝的目的。此外，双环醇还具有减轻炎症反应、抑制肝细胞纤维化、保护肝脏的作用。临床试验表明恩替卡韦与双环醇的联合应用不但可以有效的抑制乙肝病毒复制，还可以改善肝脏功能。4.2双环醇与甘草酸二胺脂质复合物联合应用治疗非酒精性脂肪肝病毒性肝炎患者大多伴有肝细胞膜和组织结构的损伤，并且伴有磷脂水平降低情况，甘草酸二胺脂质复合物是由甘草酸二胺与磷脂酰胆碱形成的一种磷脂复合物，并且亲脂性得到了提升。将磷脂引入肝细胞膜结构，增强细胞膜流动性与跨膜转运系统的活性，受损膜结构从而得到修复[14]。同时磷脂酰胆碱能降低血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯水平，提高高密度脂蛋白胆固醇水平。双环醇可降低转氨酶水平，减少肝细胞内脂质堆积，促进脂质的氧化代谢，改善肝脏纤维化和线粒体的膜流动性以及抗肿胀的能力。临床试验表明二者联用产生协同作用，具有较强的抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能作用。4.3双环醇联合还原型谷胱甘肽对抗结核药物性肝炎患者的影响肺结核需要长期使用抗结核药物联合治疗。临床上使用的抗结核药物大多由经肝脏代谢，经肾脏排泄，长期使用会不同程度的损伤肝脏，进而导致药物性肝炎，严重者甚至导致肝功能衰竭。还原性谷胱甘肽能够很好的治疗药物性肝炎，强化肝细胞的解毒能力和肝细胞的修护再生，缩短肝功能恢复的进程[15]。双环醇具有清除自由基，保护肝细胞膜和线粒体的作用[16]。还有预防肝脏纤维化和缓解肝脏产生炎性反应的作用。研究表明双环醇和还原性谷胱甘肽联合使用可以改善药物性肝炎患者的肝功能。4.4双环醇片联合甘草酸二铵胶囊治疗自身免疫性肝炎AIH(自身免疫性肝炎)是一种难以治愈的肝脏炎症性疾病，目前临床尚未完全研究出AIH的发病机制,普遍认为发病与药物以及个体因素有关，并且大部分患者存在肝脏的纤维化[17]。临床治疗AIH主要是缓解临床症状，减轻组织炎症，减轻肝细胞损伤[18]。甘草酸二铵能与肾上腺皮质激素代谢酶结合，提高肾上腺皮质激素水平，起到抗炎作用[19]。双环醇片具有良好的抗炎、保肝作用,是临床治疗慢性肝炎的常用药物。其能够有效抑制IL-1（白细胞介素-1）、TNF-α（肿瘤坏死因子）等炎性因子的表达，清除体内自由基，减轻肝损伤[20]。二者联合使用能够有效发挥协同作用，提高临床疗效。5双环醇的合成5.1合成路线一路线描述：本路线首先由联苯二酸单甲酯即化合物2用氯化亚砜进行卤代，制得化合物3，然后在TEA（三乙胺）存在下，DMPA（2,2-二羟甲基丙酸）催化与2-巯基噻唑啉缩合，制得化合物4，再经硼氢化钠还原，制得目标化合物双环醇即化合物1[21]。路线第一步采用联苯二酸单甲酯为起始物料，经查询，此物料目前市场上没有批量生产的供货商，且本步骤用氯化亚砜进行卤代，会产生大量废气，如果尾气吸收不完全，会造成大气污染，且反应后处理会产生大量废酸溶液，造成三废处理成本过高。第二步采用2-巯基噻唑啉进行缩合，此物料有恶臭，且会多一种起始物料，增加起始物料的控制难度。5.2合成路线二路线描述：本路线采用联苯双酯即化合物2为起始物料，经水解制得联苯双酸即化合物3，联苯双酸经乙酸酐脱水制得联苯酸酐即化合物4，进而联苯酸酐经甲醇醇解得联苯二酸单甲酯即化合物5，最后经硼烷还原羧基制得双环醇即化合物1[22]。最终总收率在81%-85%之间，收率虽然比较高，但是在双环醇的合成过程中，用到了硼烷，此物质不可单独存在，遇水，遇氧都极不稳定，容易失效，对反应条件十分苛刻，且毒性很大。5.3合成路线三路线描述：本路线首先联苯双酯经碱水解制得联苯二羧酸，联苯二羧酸经乙酸酐脱水制得联苯二羧酸酐，然后经硼氢化钠还原制得联苯酸醇，联苯酸醇经硫酸二甲酯甲基化制得双环醇[23]。此路线最后一步所用的甲基化试剂硫酸二甲酯具有基因毒性，应尽量避免[24]。5.4合成路线四路线描述：经查询，该合成方案关键起始物料联苯双酯已经满足商业化供应，并且价格适中，故此路线以联苯双酯为起始物料，经水解、脱水缩合、硼氢化钠还原、碳酸二甲酯甲基化和精制得到终产物。反应步骤适中，各步骤的反应条件温和，无需在高温条件下进行且合成过程中产生的废气不会对大气造成污染。所用设备无特殊要求，原料易得，操作简便易行，尽量避免了使用危险，毒性大的反应物。综上所述：合成路线四相较于其他合成路线，原料价廉易得，反应条件温和且合成过程中不会产生对大气有污染的中间体。 6双环醇含量测定及其有关物质分析方法6.1双环醇的含量测定依照《中华人民共和国药典》中双环醇的含量测定方法。色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶（SymmetryC18，4.6mmx250mm，5μm）或柱效相当的色谱柱。流动相为乙腈-水-醋酸（55∶45∶0.01）；检测波长228nm；流速0.5mL/min；柱温40℃。实验所用溶剂乙腈为高效液相色谱级。系统适用性溶液的配制:分别取适量双环醇对照品与杂质I（联苯双酯）对照品，加入乙腈溶解，稀释至成每毫升含双环醇20μg与杂质I10μg的混合溶液。注入液相色谱仪10μl，并记录色谱，使色谱峰的保留时间约8min，双环醇峰与杂质I峰的分离度应大于2.0。测定方法取本品适量，精密称取，加乙腈溶解，定量稀释，制成每毫升约10μg的溶液，作为供试品溶液，进样10μl记录色谱图；另取双环醇对照品，测定方法相同。按外标法计算峰面积，即得。6.2双环醇的有关物质分析方法依照药典中双环醇的有关物质分析方法。色谱条件与含量测定方法相同。取本品10mg，加入10mL容量瓶中，加乙腈溶解稀释，制成每1mL中约含1mg的溶液作为供试品溶液；精密量取1mL，置于200mL容量瓶中，用乙腈稀释定容，摇匀，作为对照溶液；另精密称取联苯双酯（杂质I）与甲醚化双环醇（杂质II）对照品各适量，加乙腈溶解并稀释制成每1mL中约含杂质I1μg与杂质II3μg的混合溶液，作为对照品溶液。按照含量测定中的色谱条件进行试验，精密量取供试品溶液、对照溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。运行时间为主成分峰保留时间的5倍。供试品溶液色谱图中如有与对照品溶液中杂I保留时间一致的色谱峰，其峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍（0.1%），如有与对照品溶液中杂质II保留时间一致的色谱峰，其峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.6倍（0.3%），其他单一杂质的峰面积不应大于对照溶液主峰面积的0.3倍（0.15%），各杂质峰面积之和不应大于对照溶液的主峰面积（0.5%）[25]。7个人展望我国肝炎发病率高，致病原因有多种且发病机制复杂。双环醇的出现使临床治疗肝炎进入了新的阶段，其上市后的各项临床研究也在积极进行中，包括加强不良反应的报告反馈，对肝上皮细胞恶变的预防作用研究等。且多数研究结果均预示双环醇的应用前景令人鼓舞。但目前有关双环醇合成的研究成果尚不成熟，我相信通过广大研究人员的努力，双环醇的发展前景会越来越光明，会为临床医学提供更多科学的临床成果以及更加有效的治疗手段。

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