病理学技术理论知识考核试题及答案

病理学技术理论知识考核试题及答案病理学技术理论知识考核试题及答案一、单项选择题（每题1分，共30分。每题只有一个最佳答案，请将正确选项字母填入括号内）1.在HE染色中，细胞核呈蓝色的主要机制是（）A.苏木精与DNA磷酸基结合形成不溶性蓝紫色络合物B.伊红与RNA的羟基结合形成红色沉淀C.苏木精被氧化后直接与细胞膜脂蛋白结合D.伊红在酸性条件下与核内组蛋白静电吸引答案：A解析：苏木精经氧化生成氧化苏木精，其带正电荷的铝离子与DNA磷酸基负电荷结合，形成不溶性蓝紫色络合物，故核呈蓝色。2.进行石蜡切片时，最理想的组织固定时间是（）A.5minB.30minC.6–24hD.72h答案：C解析：固定时间过短（<2h）易导致组织自溶；过长（>48h）则引起抗原遮蔽，6–24h为兼顾形态与抗原保存的最佳窗口。3.下列哪项不是冷冻切片优于石蜡切片的特点（）A.保留酶活性好B.切片厚度可达2μmC.耗时短，术中诊断快D.抗原性保存佳答案：B解析：冷冻切片厚度通常为5–10μm，难以达到石蜡切片的2μm薄度，因此B项错误。4.PAS染色阳性物质出现洋红色颗粒，其化学基础是（）A.高碘酸氧化1,2-乙二醇基生成醛，与Schiff试剂结合B.高碘酸直接还原Schiff试剂生成醌式结构C.过碘酸与糖原羟基酯化显色D.Schiff试剂与核酸磷酸基结合答案：A解析：PAS反应中，高碘酸氧化糖原等1,2-乙二醇基产生醛基，醛基与Schiff试剂缩合生成洋红色醌式染料。5.免疫组化染色中，DAB显色颗粒的最终颜色是（）A.蓝色B.红色C.棕褐色D.绿色答案：C解析：DAB（3,3'-二氨基联苯胺）在HRP催化下氧化聚合生成不溶性棕褐色沉淀。6.用于显示横纹肌横纹的磷钨酸苏木精（PTAH）染色中，横纹呈现（）A.蓝色B.红色C.黄色D.绿色答案：A解析：PTAH中磷钨酸与肌动球蛋白复合，苏木精染横纹呈深蓝，胶原纤维呈红棕色。7.组织透明剂二甲苯的折射率约为（）A.1.33B.1.45C.1.50D.1.62答案：C解析：二甲苯折射率1.497，与加拿大树胶（1.52）接近，可减少封片后折光差异。8.下列关于抗原修复的叙述，正确的是（）A.高温修复会完全破坏抗原表位B.酶消化法仅用于细胞核抗原C.高压锅热修复可提高抗原可及性D.修复后无需冷却即可直接染色答案：C解析：高压热修复通过高温高压打开蛋白交联，暴露抗原表位，提高抗体结合效率。9.在Masson三色染色中，胶原纤维呈（）A.红色B.绿色/蓝色C.黄色D.黑色答案：B解析：Masson染色使用苯胺蓝或亮绿，胶原纤维被酸性染料着色呈蓝或绿色，肌纤维呈红色。10.用于显示神经纤维的Bielschowsky银染，其银颗粒沉积于（）A.髓鞘磷脂B.神经轴索微管C.神经胶质纤维酸性蛋白D.神经元胞体尼氏体答案：B解析：银染法通过还原银离子沉积于轴索微管及神经原纤维，呈现棕黑色丝状结构。11.组织脱水时，下列哪种浓度梯度最合理（）A.50%→70%→90%→100%乙醇B.30%→50%→70%→90%→100%乙醇C.70%→80%→95%→100%乙醇D.直接100%乙醇答案：C解析：梯度脱水可减少组织收缩，70%→80%→95%→100%为经典三步法，兼顾速度与形态。12.免疫荧光双重标记时，为避免交叉反应，最佳策略是（）A.两种一抗来源于同一物种，二抗带不同荧光B.两种一抗来源于不同物种，二抗带不同荧光C.直接使用荧光标记一抗，无需二抗D.先用一种一抗，洗脱后再用第二种答案：B解析：不同物种来源的一抗配对应物种特异性荧光二抗，可完全避免交叉，实现真正共定位。13.石蜡包埋时，浸蜡温度一般控制在（）A.37°CB.45°CC.56–58°CD.80°C答案：C解析：石蜡熔点56–58°C，高于此温度易使组织变硬、抗原破坏，低于则渗透不足。14.下列哪项不是造成切片“裂纹”的常见原因（）A.刀口缺损B.组织脱水不彻底C.切片速度过快D.展片水温过高答案：D解析：展片水温过高（>55°C）可引起组织散开，但不会导致裂纹；裂纹多与刀口、脱水、速度有关。15.用于显示铁颗粒的普鲁士蓝反应，其最终产物为（）A.亚铁氰化铁（蓝色）B.铁氰化亚铁（红色）C.硫化铁（黑色）D.氧化铁（棕色）答案：A解析：酸性条件下，三价铁与亚铁氰化钾生成不溶性亚铁氰化铁（Turnbull蓝）。16.免疫组化中，阻断内源性过氧化物酶常用（）A.0.3%H₂O₂甲醇溶液B.1%醋酸C.5%牛血清白蛋白D.0.1%胰酶答案：A解析：0.3%H₂O₂甲醇可灭活组织内过氧化物酶，防止DAB非特异性显色。17.切片厚度与显微镜分辨率的关系，下列说法正确的是（）A.厚度越薄，分辨率越高，但信号减弱B.厚度与分辨率无关C.厚度越厚，分辨率越高D.厚度仅影响景深答案：A解析：薄切片减少光散射，提高光学分辨率，但抗原总量减少，信号下降。18.下列哪种固定剂最适合保存超微结构（）A.10%中性甲醛B.4%多聚甲醛+0.1%戊二醛C.95%乙醇D.丙酮答案：B解析：戊二醛交联能力强，可稳定膜蛋白与脂质，保存超微结构优于单用甲醛。19.用于显示淀粉样物的刚果红染色，其偏振光下呈现（）A.苹果绿色双折射B.红色双折射C.蓝色单折射D.黄色荧光答案：A解析：淀粉样物与刚果红结合后，偏振光下呈特征性苹果绿色双折光。20.免疫组化阳性对照应选择（）A.已知阳性组织B.实验组织自身C.PBS代替一抗D.阴性组织答案：A解析：阳性对照使用已知含靶抗原组织，验证染色系统有效性。21.组织切片封片时，中性树胶过量最易导致（）A.褪色B.结晶C.气泡D.荧光淬灭答案：B解析：树胶过浓或过量，溶剂挥发后易析出二甲苯不溶物结晶。22.下列哪项不是抗原热修复缓冲液（）A.柠檬酸缓冲液pH6.0B.Tris-EDTApH9.0C.PBSpH7.4D.乙二胺四乙酸pH8.0答案：C解析：PBSpH7.4无修复作用，常用柠檬酸或Tris-EDTA。23.用于显示脂质的油红O染色，其染色环境需（）A.水溶液B.60%异丙醇饱和液C.纯丙酮D.0.1M盐酸答案：B解析：油红O需60%异丙醇饱和液配制，防止染料沉淀，利于脂质溶解着色。24.石蜡切片脱蜡至水顺序正确的是（）A.二甲苯I→二甲苯II→100%乙醇→95%→80%→自来水B.100%乙醇→二甲苯→95%→自来水C.自来水→乙醇→二甲苯D.丙酮→二甲苯→乙醇答案：A解析：脱蜡需两次二甲苯彻底去蜡，再梯度乙醇复水，避免水化不全。25.免疫组化中，一抗4°C孵育过夜的主要优点是（）A.缩短时间B.降低背景C.提高特异性与信号强度D.减少抗体用量答案：C解析：低温慢孵育使抗原抗体结合充分，信号增强，背景降低。26.切片出现“搓衣板”状横纹，最先检查（）A.展片水温B.刀架松动C.组织块温度D.切片机皮带答案：B解析：刀架或组织夹头松动导致周期性震动，形成规则横纹。27.用于显示幽门螺杆菌的Warthin-Starry银染，菌体呈（）A.蓝色B.红色C.黑色D.金色答案：C解析：银离子还原沉积于菌体，呈黑色细丝状。28.组织固定后流水冲洗的主要目的是（）A.去除多余固定剂，防止后固定B.增强染色C.使组织变硬D.去除钙盐答案：A解析：冲洗去除残留甲醛，防止继续交联影响染色。29.免疫组化中，DAB显色后需（）A.直接封片B.流水终止反应C.酒精脱水D.高温复染答案：B解析：显色后流水冲洗终止HRP活性，防止过度显色。30.切片封片使用DPX与中性树胶相比，主要优点是（）A.折射率更高B.干燥快，不结晶C.荧光背景低D.耐酸答案：B解析：DPX为合成树脂，干燥快且长期无结晶，适合教学切片。二、多项选择题（每题2分，共20分。每题至少有两个正确答案，多选少选均不得分）31.下列哪些因素可导致免疫组化假阴性（）A.固定过度B.抗原修复不足C.一抗浓度过高D.切片脱蜡不彻底答案：A、B、D解析：固定过度遮蔽抗原，修复不足无法暴露，脱蜡残留蜡阻碍抗体渗透；一抗过高一般导致背景而非假阴。32.关于冷冻切片，正确的是（）A.使用OCT包埋剂B.切片后立即贴附于载玻片C.可保存酶活性D.需高温烤片答案：A、B、C解析：冷冻切片无需烤片，直接固定或染色。33.造成HE染色核浆共染（蓝红不分）的原因有（）A.苏木精氧化过度B.分化不足C.蓝化不足D.伊红过染答案：B、C解析：分化不足致苏木精残留胞浆，蓝化不足致红蓝对比差。34.下列属于特殊染色的是（）A.PASB.MassonC.免疫组化D.刚果红答案：A、B、D解析：免疫组化为免疫学技术，非传统特殊染色。35.提高免疫组化信噪比的措施有（）A.增加封闭时间B.降低一抗浓度C.延长DAB显色D.使用高盐洗液答案：A、B、D解析：延长DAB增加信号同时增加背景，非提高信噪比最佳方法。36.石蜡切片出现“空洞”可能与（）A.组织脱水不彻底B.透明不足C.浸蜡温度过高D.刀钝答案：A、B、C解析：刀钝导致裂纹非空洞。37.下列哪些属于荧光染料（）A.FITCB.Cy3C.DABD.AEC答案：A、B解析：DAB、AEC为发色底物，非荧光。38.用于显示神经髓鞘的染色有（）A.LuxolfastblueB.Weil髓鞘染C.PTAHD.油红O答案：A、B解析：PTAH示横纹，油红O示脂质。39.关于抗原修复，正确的是（）A.高温可逆转甲醛交联B.蛋白酶K可用于细胞表面抗原C.微波修复需防沸腾干涸D.修复后需自然冷却答案：A、C、D解析：蛋白酶K多用于胞内或核内抗原。40.切片封片后产生气泡的常见原因（）A.树胶过稠B.盖玻片放下角度过陡C.载玻片有水D.中性树胶含酸答案：A、B、C解析：酸与气泡无关。三、填空题（每空1分，共20分）41.免疫组化中，HRP催化DAB显色的化学反应式为：D产物DABₒₓ为________色沉淀。答案：棕褐42.石蜡切片展片最佳水温为________°C。答案：45–5043.用于显示钙盐的VonKossa染色的原理是将钙盐置换为________，再经日光或紫外光还原为金属银。答案：磷酸银44.免疫荧光中，FITC最大激发波长为________nm，发射波长为________nm。答案：495；51945.组织固定时，10%中性甲醛的pH为________。答案：7.0±0.246.切片厚度与显微镜景深的关系公式：d=答案：数值孔径47.刚果红染色后，需用________分化，去除非特异性着色。答案：碱性乙醇48.免疫组化中，封闭血清通常选择与________同种属的正常血清。答案：二抗49.冷冻切片保存长期抗原活性，需置于________°C冰箱。答案：−8050.组织脱水时，乙醇最终浓度为________%。答案：10051.用于显示黑色素的方法有________法和________法。答案：Masson-Fontana；Schmorl52.免疫组化中，ABC法里的“ABC”指________复合物。答案：Avidin-Biotin-peroxidaseComplex53.切片刀角度（clearanceangle）一般设定为________°。答案：5–1054.组织透明剂苯甲酸甲酯的折射率为________。答案：1.51655.免疫组化阳性信号呈点状分布而非弥漫，提示抗原________表达。答案：局灶56.用于显示弹性纤维的Verhoeff染色，弹性纤维呈________色。答案：黑57.免疫荧光淬灭剂DAPI发射________色荧光。答案：蓝58.组织块厚度超过________mm易导致固定不透。答案：559.免疫组化中，一抗稀释液通常含0.1%________以防风干。答案：Tween-2060.切片烤片温度一般设定为________°C，30min。答案：60四、判断题（每题1分，共10分。正确打“√”，错误打“×”）61.免疫组化中，一抗浓度过高一定导致背景增加。（√）62.冷冻切片可完全替代石蜡切片用于常规病理诊断。（×）63.二甲苯脱蜡后可直接用水冲洗。（×）64.PAS染色阳性可确定糖原存在，需加唾液淀粉酶消化对照。（√）65.免疫荧光染色后可用中性树胶封片。（×）66.组织固定时间越长，抗原保存越好。（×）67.切片刀钝可导致组织撕裂。（√）68.免疫组化阴性对照可用PBS代替一抗。（√）69.高温修复缓冲液pH越高，抗原暴露越充分，但组织脱落风险增加。（√）70.用于显示含铁血黄素的Perls染液需现配现用。（√）五、简答题（每题10分，共30分）71.简述免疫组化染色中“背景染色”产生的主要原因及解决策略。答案：原因：1.内源性生物素、过氧化物酶未阻断；2.一抗非特异性结合；3.二抗与组织内Ig交叉；4.组织干燥导致边缘吸附；5.抗体浓度过高或孵育时间过长。策略：1.0.3%H₂O₂甲醇阻断过氧化物酶，avidin-biotin封闭试剂阻断生物素；2.5%二抗同种属正常血清封闭；3.优化抗体稀释度，4°C过夜；4.保持湿盒，防止干涸；5.增加高盐洗液（0.3MNaCl）去除低亲和结合。72.说明Masson三色染色中各试剂的作用及颜色对应。答案：1.Weigert铁苏木精：染核呈蓝黑色，提供背景定位；2.酸性品红/丽春红：染肌纤维、胞浆呈红色；3.磷钼酸：作为媒染剂，同时选择性洗脱胶原外染料；4.苯胺蓝/亮绿：染胶原纤维呈蓝色或绿色；5.冰醋酸：分化并稳定染料，防止脱色。结果：核蓝黑、肌纤维红、胶原蓝绿。73.叙述冷冻切片与石蜡切片在免疫组化应用中的优缺点。答案：冷冻切片优点：1.保留酶活性及抗原性，适合磷酸化蛋白、膜蛋白；2.耗时短，术中快速诊断；3.避免高温石蜡对抗原破坏。缺点：1.厚度大（5–10μm），光学分辨率低；2.形态保存差，易冰晶损伤；3.长期保存易脱片。石蜡切片优点：1.形态结构佳，切片薄（2–4μm）；2.可长期存档；3.适合大量样本高通量。缺点：1.固定与包埋高温导致抗原遮蔽；2.需抗原修复，步骤繁琐；3.酶活性完全丧失，不适合酶活性检测。六、案例分析题（每题20分，共40分）74.病例：乳腺穿刺组织，HE示大量梭形细胞，考虑肌上皮来源。实验室拟用免疫组化鉴别肌上皮、纤维母细胞及血管平滑肌。问题：（1）列出三种可用标记及其细胞定位；（2）设计一抗组合及显色系统；（3）写出预期结果判断标准。答案：（1）p63：核阳性，肌上皮；SMA（α-平滑肌肌动蛋白）：胞浆阳性，肌上皮与血管平滑肌；CD34：胞