柿叶中有效成分的提取与纯化

柿叶中有效成分的提取与纯化【摘要】目的：对柿叶中黄酮类和三萜类有效成分进行提取、富集和纯化，从而获得柿叶中富含黄酮类和三萜类成分的总部位，并对其中含有的槲皮素、山柰酚、齐墩果酸和熊果酸的纯化方法进行考察。方法：以70%乙醇为提取溶剂，按照液固比15:1进行加热回流提取，石油醚脱脂后，乙酸乙酯萃取可得富含黄酮类成分的总部位，再用聚酰胺柱进行纯化；三萜类成分经石油醚脱脂后，以乙酸乙酯为溶剂，按照液固比6:1进行加热回流提取得到富含三萜类成分的总部位，再经石油醚二次脱脂和活性炭吸附脱色纯化。利用HPLC法，通过全波长扫描获得紫外光谱和色谱峰面积进行分析。结果：按照以上提取纯化方法可以获得了柿叶的黄酮类成分的富集部位和三萜类成分富集总部位。经聚酰胺色谱柱梯度洗脱，可以很好的纯化其中含有的槲皮素和山柰酚。利用活性炭吸附样品，其对齐墩果酸和熊果酸能产生一定的纯化效果。结论：获得了柿叶的黄酮类成分的富集部位和三萜类成分富集总部位，并对其纯化方法进行了一定研究，为后续药理活性的研究奠定基础以及快速获取其中的槲皮素、山奈酚单体化合物提供一定的技术支撑。【关键词】柿叶；黄酮类成分；三萜类成分；提取纯化；高效液相色谱法ExtractionandPurificationofActiveComponentsfromPersimmonLeaves[Abstract]Objective:Thisstudyaimedtoextract,enrich,andpurifyflavonoidsandtriterpenoidsfrompersimmonleavestoobtaintotalfractionsrichinthesecomponents.Thepurificationmethodsforquercetin,kaempferol,oleanolicacid,andursolicacidwerespecificallyinvestigated.Methods:70%ethanolwasusedastheextractionsolventwithaliquid-solidratioof15:1forheatingrefluxextraction.Afterdefattingwithpetroleumether,theethylacetateextractwasobtained,whichwasrichinflavonoidsandfurtherpurifiedbypolyamidecolumnchromatography.Fortriterpenoids,afterdefattingwithpetroleumether,theethylacetateextractwasobtainedwithaliquid-solidratioof6:1forheatingrefluxextraction,andthenpurifiedbysecondarydefattingwithpetroleumetherandadsorptiondecolorizationwithactivatedcarbon.HPLCwasusedforanalysis,andtheultravioletspectraandchromatographicpeakareaswereobtainedthroughfullwavelengthscanning.Results:Theenrichedfractionsofflavonoidsandtriterpenoidsfrompersimmonleaveswereobtainedbytheaboveextractionandpurificationmethods.Thepolyamidechromatographycolumngradientelutioncouldeffectivelypurifyquercetinandkaempferol.Activatedcarbonadsorptionhadacertainpurificationeffectonoleanolicacidandursolicacid.Conclusion:Theenrichedfractionsofflavonoidsandtriterpenoidsfrompersimmonleaveswereobtained,andthepurificationmethodswerestudiedtoacertainextent,layingafoundationforsubsequentpharmacologicalactivityresearchandprovidingtechnicalsupportfortherapidacquisitionofquercetinandkaempferolmonomercompounds.[Keywords]PersimmonLeaves;Flavonoids;Triterpenoids;ExtractionandPurification;High-PerformanceLiquidChromatography(HPLC)目录TOC\o"1-3"\h\u103021前言 [20]。因此选择210nm作为三萜类化合物的检测波长。

6结论本实验使用溶剂提取法，利用70%乙醇为提取溶剂，按照液固比为15：1加入溶剂进行加热回流提取，经石油醚脱脂和乙酸乙酯萃取后，成功实现了柿叶中黄酮类成分的高效富集，再用聚酰胺柱进行纯化，采用等度洗脱和梯度洗脱的方法，梯度70%乙醇洗脱样品相较于等度70%乙醇洗脱样品中槲皮素纯化率提高3倍；山柰酚纯化率提高15倍，说明聚酰胺材料柱层析法梯度洗脱可以很好的纯化柿叶富含黄酮部位中的槲皮素和山奈酚；三萜类成分是由柿叶粉通过石油醚脱脂后，以乙酸乙酯为溶剂，按照液固比6:1进行加热回流提取三次后，成功实现了柿叶中三萜类成分的高效富集，再经石油醚二次脱脂和按照活性炭与样品比例为1：1进行吸附脱色纯化，得到石油醚脱色和活性炭吸附纯化后的乙酸乙酯提取物样品，对比石油醚脱色纯化后的乙酸乙酯提取物样品，其纯化率提高，由此说明活性炭吸附具有一定的纯化效果。通过高效液相色谱法的紫外图谱对以上两类成分进行初步定性，未来还需要利用质谱法的手段对其进行进一步的结构鉴定。本研究对柿叶中的有效成分进行提取和纯化，得到富含黄酮类成分和三萜类成分的总部位，为深入研究其药理活性和综合开发利用柿叶资源提供研究基础。

参考文献兰茂.滇南本草第一卷[M].云南人民出版社,1975.国家中药学管理局《中华本草》编委会.中华本草:精选本[M].上海科学技术出版社,1998.于波.辽宁省中药材标准[M].辽宁科学技术出版社,2009.广东省食品药品监督管理局编.广东省中药材标准[M].广东科技出版社,2011.陈科成,甄丹丹,甄汉深,等.柿叶的研究概况[J].中国民族民间医药,2017(13):4.周江煜,李耀华,侯小涛,等.广西产柿叶的HPLC指纹图谱研究[J].华西药学杂志,2011,26(6):2.JakubE,MarcinK,MichałW.BeneficialEffectsofUrsolicAcidandItsDerivatives-FocusonPotentialBiochemicalMechanismsinCardiovascularConditions[J].Nutrients,2021,13(11):3900-3900.陈光.柿叶化学成分及生物活性的研究[D].沈阳药科大学,2003.陈静芹.壮药山柰提取物山柰酚抗前列腺癌作用机制研究[D].广西中医药大学,2022.张欣,董春力,陈嘉彦,etal.槲皮素对宫颈癌细胞SiHa迁移和侵袭能力的影响[J].中国妇幼健康研究,2018,29(3):4.DingH,WangH,ZhuL,etal.UrsolicAcidAmelioratesEarlyBrainInjuryAfterExperimentalTraumaticBrainInjuryinMicebyActivatingtheNrf2Pathway[J].NeurochemicalResearch,2016,42(2):1-10.郭海彪,董福越,李雯珊,等.一测多评法测定柿叶提取物中6种黄酮类成分[J].中国现代应用药学,2021,38(07):831-835.袁恩.柿叶多酚的低共熔溶剂提取工艺优化及生物活性研究[D].华南理工大学,2023.梅为云,李娜,刘录,等.HPLC法测定不同采收期的云南甜柿叶中三种黄酮的含量[J].食品工业科技,2017,38(13):4.张京京,李钦,陈海莉,等.不同产地和品种柿叶中熊果酸和齐墩果酸的含量测定[J].时珍国医国药,2015,26(1):3.石锦芹,黄绍华.柿叶黄酮类化合物乙醇提取工艺的研究[J].南昌大学学报:理科版,1999,023(003):264-267.贝伟剑,彭文烈,罗杰.柿叶黄酮的大孔吸附树脂分离提纯富集[J].中成药,2005,(03):13-17.杨少娟,赵海燕,马永平,等.聚酰胺树脂层析纯化甘草黄酮的研究[J].广