病理科常用染色技术详解

病理科常用染色技术详解在病理诊断的实践中，组织切片的染色技术是病理医师观察组织形态、识别病变特征、做出准确诊断的基础。这些技术历经多年发展与完善，如同病理医师的“眼睛”，将原本在普通光线下难以分辨的细微结构清晰地呈现出来。本文将详细介绍病理科日常工作中最常用的几种染色技术，包括其原理、主要应用及关键技术要点，旨在为病理技术人员及相关学习者提供实用的参考。一、苏木素-伊红染色（HematoxylinandEosinStaining,HE染色）苏木素-伊红染色，通常简称为HE染色，无疑是病理科应用最为广泛、最基础也是最重要的染色方法。几乎所有的病理切片都需首先进行HE染色，它为病理医师提供了组织和细胞结构的基本形态学信息。1.1染色原理HE染色的核心在于两种染料的特性及其与组织成分的选择性结合。苏木素是一种碱性染料，能够与细胞核内的染色质（主要成分为脱氧核糖核酸，DNA）中的酸性物质结合，使细胞核呈现蓝紫色。伊红是一种酸性染料，可与细胞质和细胞外基质中的碱性蛋白结合，使其呈现粉红色或红色。这种细胞核与细胞质、细胞外基质之间的鲜明对比，为观察细胞形态、组织结构以及病变细节提供了清晰的背景。1.2主要步骤与技术要点HE染色的流程看似标准化，实则每一步都对最终结果有着重要影响，需要技术人员的细致操作与经验积累。首先是烤片与脱蜡。组织切片在染色前需要经过充分的烤片，以确保切片与载玻片牢固黏附，避免后续处理过程中脱落。脱蜡则要求彻底，通常使用二甲苯等有机溶剂，若脱蜡不净，会导致染色不均或着色不佳。脱蜡后，切片需经过梯度乙醇逐级水化至水，为后续染色做好准备。接下来是苏木素染色。切片浸入苏木素染液中，细胞核逐渐着色。染色时间需根据染液新旧、切片厚度以及室温等因素灵活调整。染色过深或过浅都会影响后续观察。然后是分化步骤，这是控制苏木素染色深度的关键。通过酸性乙醇处理，将细胞核周围多余的染色洗脱，使细胞核结构更为清晰。分化程度的把握需要经验，过度分化会导致核着色过浅，分化不足则核质对比不清。分化之后的返蓝步骤，使用弱碱性溶液（如氨水或Scott液）使细胞核恢复蓝紫色，并能增强染色效果。随后进行伊红染色。伊红主要染细胞质和细胞外基质，其染色时间相对较短，通常数秒至数十秒即可。伊红的浓度和染色时间会影响细胞质的色泽，应与苏木素染色形成良好对比。染色完成后，切片需经过脱水、透明处理，最后用中性树胶封片。脱水不彻底会导致切片云雾状，影响观察。1.3结果判读与意义HE染色的结果判读是病理诊断的基础。细胞核被染成蓝紫色，细胞质、肌纤维、胶原纤维等呈不同程度的粉红色。红细胞则呈鲜明的橙红色。通过观察HE切片，病理医师可以识别组织类型、细胞形态、排列方式、有无异型性、炎症反应、坏死、出血等基本病变。几乎所有的病理诊断报告，都是以HE染色切片的观察为主要依据。因此，HE染色的质量控制至关重要，一张优质的HE切片是准确诊断的前提。二、特殊染色技术尽管HE染色用途广泛，但在许多情况下，仅靠HE染色难以清晰显示某些特定的组织结构、细胞成分或病原体。此时，特殊染色技术便发挥了其独特的作用。特殊染色是利用组织或细胞内各种化学成分的不同理化特性，选用特定的染料或试剂进行染色，从而使特定结构或成分得以选择性显示。2.1结缔组织染色结缔组织在维持组织器官的形态和功能中起重要作用，其成分复杂，包括胶原纤维、网状纤维、弹性纤维等。*Masson三色染色：这是显示胶原纤维最常用的方法之一。其基本原理是通过多种染料的组合，将不同的组织成分染成不同颜色。典型的Masson染色结果为：胶原纤维呈蓝色或绿色，肌纤维、细胞质呈红色，细胞核呈蓝黑色。该染色不仅能清晰显示胶原纤维的分布、数量和形态，还能与肌纤维等成分形成良好对比，常用于判断纤维化程度（如肝纤维化、肺纤维化）、区分肿瘤组织与间质成分等。*Gomori银染色（网状纤维染色）：网状纤维是纤细的胶原纤维，HE染色不易显示。Gomori银染色利用网状纤维具有嗜银性的特点，通过银氨溶液浸染后，经还原剂处理，使银离子还原为金属银，从而将网状纤维清晰地显示为黑色。细胞核可被复染为红色或淡绿色。网状纤维染色对于显示淋巴结、脾脏等造血器官的支架结构，判断肿瘤的起源（如癌与肉瘤的鉴别，癌巢周围常可见网状纤维包绕），以及肝硬化时肝小叶结构的破坏情况等具有重要价值。2.2碳水化合物染色细胞内和细胞外的碳水化合物，如糖原、黏液等，在HE染色中有时显示不清或难以明确区分其性质，特殊染色可以提供帮助。*过碘酸-雪夫反应（PeriodicAcid-Schiff,PAS）：PAS染色的原理是过碘酸能氧化多糖中的乙二醇基形成双醛基，后者与Schiff试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物。PAS染色可以显示糖原、中性黏液、基底膜、真菌、某些包涵体等。在肝细胞性肝癌中，癌细胞内常可见PAS阳性的糖原颗粒；在肾穿刺标本中，PAS染色可清晰显示肾小球基底膜；对于真菌感染，PAS染色能将真菌壁染成紫红色，易于识别。*阿利新蓝（AlcianBlue,AB）染色与AB-PAS联合染色：阿利新蓝是一种阳离子染料，在特定pH值条件下（通常为pH2.5）能与酸性黏液物质中的羧基或硫酸根结合，呈现蓝色。AB染色主要用于显示酸性黏液。而AB-PAS联合染色则可以同时显示酸性黏液（蓝色）和中性黏液（红色），对于鉴别黏液的性质（如胃黏膜肠化生时的酸性黏液，或某些黏液腺癌中黏液的类型）具有重要意义。2.3病原微生物染色在感染性疾病的病理诊断中，特殊染色对于检测病原体至关重要。*抗酸染色（如Ziehl-Neelsen法）：分枝杆菌（如结核杆菌、麻风杆菌）的细胞壁含有大量脂质，一般染料不易着色，一旦着色后能抵抗酸性酒精的脱色，故称为抗酸杆菌。抗酸染色正是利用这一特性，将抗酸杆菌染成红色，而其他细菌和背景组织呈蓝色。该染色是诊断结核病、麻风病等分枝杆菌感染的重要依据。操作中，涂片或切片的质量、染色液的浓度和温度、脱色时间的控制，均会影响染色效果。三、总结与展望病理科常用的染色技术，从经典的HE染色到种类繁多的特殊染色，共同构成了病理形态学观察的基础。HE染色作为常规染色，提供了组织和细胞的基本结构信息，是病理诊断不可或缺的第一步。而特殊染色则针对特定的成分或结构进行精准显示，为疑难病例的诊断、病变性质的判断、病原体的检出等提供了有力的支持。这些染色技术的操作看似常规，实则蕴含着丰富的经验和技巧。从组织固定、切片制备到染色过程中的每一个环节，如试剂的配制与保存、温度与时间的控制、切片的洗涤等，都会直接影响染色结果的质量，进而可能影响诊断的准确性。因此，病理技术人员必须具备严谨的工作态度、熟练的操作技能和持续的质量控制意识。随着医学科学的发展，免疫组织化学、分子病理等技术在病理诊断中发挥着越来越重要的作用，但传统的组织化学染色技术因其操作相对简便、成本较低、结果直