《血清4型禽腺病毒病诊断技术》编制说明

《血清4型禽腺病毒病诊断技术》

编制说明

一、工作简况，包括任务来源、协作单位、主要工作过程、主要起草人及其所做的工

作

1、任务来源

血清4型禽腺病毒（Fowladenovirusserotype4）呈世界性分布，侵染对象为鸡、鸭

等主要禽种及其他家养和野生动物，各年龄段家禽均易感。自2015年以来，国内大部分

家禽密集养殖地区均爆发由高致病性血清4型禽腺病毒（FAdV-4）感染引起的肝炎-心包

积液综合症，造成严重的经济损失。目前FAdV-4仍在中国广泛流行，防控形势依然严峻。

国际上诊断FAdV抗体的标准方法为琼脂扩散试验（AGP），其灵敏度较低，已经远不能

适应当前和今后我国防控需要。虽然国内外已有一些FAdV-4快速检测方法的研究报道，

但是国内目前尚无FAdV-4的标准化病原分离及其特异性抗原、抗体诊断技术国家标准、

行业标准、地方标准或团体标准。因此，起草专家组结合多年的研究成果和应用经验，

参考相关文献起草了《血清4型禽腺病毒病诊断技术》标准。该技术标准具有科学性、实

用性和可操作性。标准发布后，将对我国FAdV-4的诊断、监测、检验检疫和流行病学调

查等工作提供重要技术支撑。

2、协作单位

本项目的协作单位：扬州大学、中国农业科学院上海兽医研究所。

3、主要工作过程

（1）2017年7月-2017年12月，制备了FAdV-4的Fiber-2蛋白原核表达产物，作为ELISA

检测技术中的特异性包被物质；2017年9月-2018年9月，研究、制备并获得针对于FAdV-4

的Fiber-2蛋白的特异性单克隆抗体，作为间接免疫荧光技术中识别检测目标的特异性抗

体。

（2）2015年9月-2018年9月，第一，广泛收集中国各地区流行的FAdV-4毒株、其他

血清型的禽腺病毒毒株等实验材料，确定FAdV-4攻毒模型和体外培养方法；第二，广泛

收集禽类组织、拭子、粪便、血清等临床样本，同时采用标准研制的方法与相关国标方

法，完成标准方法的特异性试验和灵敏度试验。

（3）2018年9月-2020年2月，分别建立PCR诊断技术、病毒分离技术、间接免疫荧光

（IFA）鉴定技术、ELISA血清抗体检测技术，优化了各项检测参数，完成了特异性试验

和灵敏度比对试验。同时与背景清楚的实验材料完成比对验证检测。最终确定了标准草

稿的各个检测步骤操作的具体内容。

（4）2020年2月-2020年11月，完成了标准制定相关资料的收集、汇总。

3、主要起草人及其所做的工作

2020年9月，项目主持人组建标准起草小组，制定了项目工作计划，明确了起草小

组中每个人的职责及工作内容。主要起草人及其分工如下：

叶建强：项目主持人，负责项目设计与实施。

陈鸿军：项目共同主持人。

秦爱建：指导项目设计与实施。

谢松桦，谢泉：负责PCR诊断技术与病毒分离技术的起草。

王伟康，吕璐，邵红霞：负责ELISA血清抗体检测技术的起草。

万志敏，李拓凡：负责间接免疫荧光（IFA）鉴定技术的起草。

按照任务分工，起草小组制定了《血清4型禽腺病毒诊断技术》征求意见稿。

二、确定江苏省农学会团体标准主要技术内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、

实验方法、检验规则等）的论据（包括试验、统计数据）

（一）标准的编写原则

本标准的编制依据《中华人民共和国标准化法》，按照中华人民共和国国家标准

GB/T1.1—2020给出的规定进行。

（二）FAdV-4抗体间接ELISA试剂盒的验证试验研究

本试验是将纯化的Fiber-2蛋白作为包被抗原，建立了检测FAdV-4抗体的间接ELISA

方法，并对ELISA各参数进行了优化；测试所建立ELISA方法的特异性、灵敏度、重复

稳定性，同时统计试剂盒与琼脂扩散试验、间接免疫荧光方法、荷兰Biochek公司生产销

售的商品化FAdV抗体间接ELISA试剂盒检测的符合率。

特异性检测发现，该ELISA仅与抗FAdV-4及FAdV-10病毒血清发生特异性反应，

而与所检测的其他各型禽腺病毒（FAdV-1、-2、-3、-5、-6、-7、-8a、-8b、-9、-11）阳

性血清、其他禽源病毒阳性血清（NDV、CAV、ALV、IBDV、IBV）以及SPF鸡血清

均无反应；灵敏度检测发现，ELISA检测血清效价在1：6400以上，最高可达1；51200；

重复稳定性试验发现该ELISA批间重复和批内重复的变异系数均低于8.0%；符合率统

计发现该ELISA能够有效的检测出感染FAdV-4的鸡群以及免疫FAdV-4疫苗的鸡群中

抗FAdV-4抗体。检测结果与间接免疫荧光试验、琼脂扩散试验、商品化FAdV抗体间

接ELISA试剂盒比较，符合率均高于88.0%。

（三）检测FAdV-4病原的间接免疫荧光技术的验证试验研究

本试验是将纯化的Fiber-2原核表达蛋白作为免疫原，免疫7周龄Balb/c小鼠后，通过

ELISA方法筛选出能稳定分泌抗FAdV-4病毒Fiber-2蛋白抗体的杂交瘤细胞株1D7；以此

细胞株分泌的单克隆抗体1D7为检测FAdV-4病原的特异性抗体的基础上建立间接免疫

荧光方法，并测试此方法的特异性、灵敏度。

特异性检测发现，此方法仅与接种FAdV-4感染鸡肝组织研磨液上清或FAdV-4病毒

的LMH细胞反应并产生特异性荧光信号，而接种其他各型禽腺病毒（FAdV-1、FAdV-5、

FAdV-6、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-10）以及其它禽源病毒的LMH细胞均无特异性反

应；灵敏度检测发现，在培养时长为72h的情况下，该方法可检测病毒滴度的最低值为

50个TCID50/孔。

三、主要试验（验证）的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效果

按照标准编制的有关要求，起草小组对临床诊断及已发布的相关实验室诊断标准进

行了梳理，制定了FAdV-4诊断判定的标准和依据，为开展FAdV-4的诊断、监测、流行

病学调查和检验检疫等提供了依据。通过本标准的实施，可实现FAdV-4的诊断预警及免

疫防控，可最大程度的减少该病的发生，降低经济损失，具有重要的社会、经济及生态

效益。

四、采用国际标准的程度及水平的简要说明

目前，国内外均尚未有针对于FAdV-4的PCR诊断技术、病毒分离技术、ELISA血清

抗体检测技术、间接免疫荧光（IFA）鉴定技术的国际标准，本标准所拟定的技术方法

达到国际领先水平。

五、重大分歧意见的处理和依据

无。

六、采用江苏省农学会团体标准的措施建议

本标准的各项技术参数是起草小组在大量实验室研究数据的归纳总结，以及长期临

床应用的基础上确定和起草的，科学性强，可行度高，可作为推荐性国家标准在FAdV-4

的诊断、监测、流行病学调查和检验检疫等工作中进一步推广应用。

七、其它应予说明的事项。

无。

江苏省农学会团体标准

《血清4型禽腺病毒病诊断技术》

编制说明

2020年11月

《血清4型禽腺病毒病诊断技术》

编制说明

一、工作简况，包括任务来源、协作单位、主要工作过程、主要起草人及其所做的工

作

1、任务来源

血清4型禽腺病毒（Fowladenovirusserotype4）呈世界性分布，侵染对象为鸡、鸭

等主要禽种及其他家养和野生动物，各年龄段家禽均易感。自2015年以来，国内大部分

家禽密集养殖地区均爆发由高致病性血清4型禽腺病毒（FAdV-4）感染引起的肝炎-心包

积液综合症，造成严重的经济损失。目前FAdV-4仍在中国广泛流行，防控形势依然严峻。

国际上诊断FAdV抗体的标准方法为琼脂扩散试验（AGP），其灵敏度较低，已经远不能

适应当前和今后我国防控需要。虽然国内外已有一些FAdV-4快速检测方法的研究报道，

但是国内目前尚无FAdV-4的标准化病原分离及其特异性抗原、抗体诊断技术国家标准、

行业标准、地方标准或团体标准。因此，起草专家组结合多年的研究成果和应用经验，

参考相关文献起草了《血清4型禽腺病毒病诊断技术》标准。该技术标准具有科学性、实

用性和可操作性。标准发布后，将对我国FAdV-4的诊断、监测、检验检疫和流行病学调

查等工作提供重要技术支撑。

2、协作单位

本项目的协作单位：扬州大学、中国农业科学院上海兽医研究所。

3、主要工作过程

（1）2017年7月-2017年12月，制备了FAdV-4的Fiber-2蛋白原核表达产物，作为ELISA

检测技术中的特异性包被物质；2017年9月-2018年9月，研究、制备并获得针对于FAdV-4

的Fiber-2蛋白的特异性单克隆抗体，作为间接免疫荧光技术中识别检测目标的特异性抗

体。

（2）2015年9月-2018年9月，第一，广泛收集中国各地区流行的FAdV-4毒株、其他

血清型的禽腺病毒毒株等实验材料，确定FAdV-4攻毒模型和体外培养方法；第二，广泛

收集禽类组织、拭子、粪便、血清等临床样本，同时采用标准研制的方法与相关国标方

法，完成标准方法的特异性试验和灵敏度试验。

（3）2018年9月-2020年2月，分别建立PCR诊断技术、病毒分离技术、间接免疫荧光

（IFA）鉴定技术、ELISA血清抗体检测技术，优化了各项检测参数，完成了特异性试验

和灵敏度比对试验。同时与背景清楚的实验材料完成比对验证检测。最终确定了标准草

稿的各个检测步骤操作的具体内容。

（4）2020年2月-2020年11月，完成了标准制定相关资料的收集、汇总。

3、主要起草人及其所做的工作

2020年9月，项目主持人组建标准起草小组，制定了项目工作计划，明确了起草小

组中每个人的职责及工作内容。主要起草人及其分工如下：

叶建强：项目主持人，负责项目设计与实施。

陈鸿军：项目共同主持人。

秦爱建：指导项目设计与实施。

谢松桦，谢泉：负责PCR诊断技术与病毒分离技术的起草。

王伟康，吕璐，邵红霞：负责ELISA血清抗体检测技术的起草。

万志敏，李拓凡：负责间接免疫荧光（IFA）鉴定技术的起草。

按照任务分工，起草小组制定了《血清4型禽腺病毒诊断技术》征求意见稿。

二、确定江苏省农学会团体标准主要技术内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、

实验方法、检验规则等）的论据（包括试验、统计数据）

（一）标准的编写原则

本标准的编制依据《中华人民共和国标准化法》，按照中华人民共和国国家标准

GB/T1.1—2020给出的规定进行。

（二）FAdV-4抗体间接ELISA试剂盒的验证试验研究

本试验是将纯化的Fiber-2蛋白作为包被抗原，建立了检测FAdV-4抗体的间接ELISA

方法，并对ELISA各参数进行了优化；测试所建立ELISA方法的特异性、灵敏度、重复

稳定性，同时统计试剂盒与琼脂扩散试验、间接免疫荧光方法、荷兰Biochek公司生产销

售的商品化FAdV抗体间接ELISA试剂盒检测的符合率。

特异性检测发现，该ELISA仅与抗FAdV-4及FAdV-10病毒血清发生特异性反应，

而与所检测的其他各型禽腺病毒（FAdV-1、-2、-3、-5、-6、-7、-8a、-8b、-9、-11）阳

性血清、其他禽源病毒阳性血清（NDV、CAV、