《一次性使用病毒采样管》（征求意见稿）

ICS

2.0.1

标本采集系统专业委员会团体标准

T/SDMDAXXX-2022

一次性使用病毒采样管

Single-usetubesforvirusspecimencollection

（征求意见稿）

2022-09-19发布2022-10-01实施

上海长三角医疗器械产业发展促进会发布

T/SDMDAXXX-2022

前言

本标准的全部技术内容为推荐性。

本标准按照《GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给

出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由上海长三角医疗器械产业发展促进会标本采集系统专业委员会（SAC/TCXXX)提出。

本标准主要起草单位：

本标准主要起草人：

II

T/SDMDAXXX-2022

引言

对于含病原微生物，特别是流感病毒（普通流感、高致病性禽流感、甲型H1N1流感病毒等）、

新型冠状病毒、手足口病毒等生物样本的采集、运送，一次性病毒采样管是一种重要的工具，在采

集过程中，应保持样品的原始性，运送过程中应能够降低生物安全风险，同时还应保证生物样本所

含核酸物资在一定时间内的完整性和稳定性，以保证后续检测结果可靠、真实。本标准对一次性使

用病毒采样管进行了标准化规范。

采样过程中配套使用的一次性使用采样拭子不包括在本标准中。

III

T/SDMDAXXX-2022

一次性使用病毒采样管

1范围

本标准规定了一次性使用病毒采样管的术语和定义、理化要求、生物学要求、检验规则、包装、

标志以及贮存要求。

本标准适用于一次性使用病毒采样管的生产与检验。

本标准不包括一次性使用采样拭子。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于

本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T40982新型冠状病毒核酸检测试剂盒质量评价要求

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

WS/T775新型冠状病毒消毒效果实验室评价标准

YY/T0466.1医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号第1部分：通用要求

《中华人民共和国药典》

《全国临床检验操作规程》

《消毒技术规范》

3术语和定义

3.1采样管：采集、保存、运输样品的容器，一般由盖子、管体和添加剂（保存液）等组成。

3.2盖子：密闭采样管的组件。

3.3保存液：为了进行预定的培养增殖或检验，放置在采用管内的液体添加剂。

3.4病毒灭活：病毒失去感染性，称为灭活。使病毒蛋白的高级结构受到破坏，蛋白不再有生理

活性，失去感染、致病和繁殖能力，但不影响病毒蛋白的一级结构，病毒蛋白的序列没有变化，不

损伤其体内有用的抗原、核酸等标志物。

1

T/SDMDAXXX-2022

3.5病毒培养保存液(非灭活型)：以运送培养基为基础改良的病毒存活维持型保存液，可以保护

病毒的蛋白质外壳以及病毒核酸，使病毒在体外保持蛋白抗原表位和核酸的完整性，在一定条件下

可以进行病毒的增殖培养以及鉴定。

3.6病毒灭活保存液（灭活型）：以核酸提取裂解液为基础改良的病毒灭活保存液，含有裂解盐

或蛋白酶，能够迅速高效地使样本中的病毒蛋白外壳裂解失活，释放出核酸，同时又含有核酸分解

酶抑制剂，能够保护病毒核酸不被降解，以供后续的核酸检测使用。

3.7样品：获得的生物物资，用来检测其特性或测量一个或多个特性与特征。

4材料与结构设计

4.1采样管管体应使用可清晰观察内容物的材料制造，不应有杂质，外观整洁；不应有能使使用

者皮肤或者手套受到意外划伤、刺破或磨伤的毛刺及锐边。

4.2按照制造商说明书的要求，采样管应能经受4次取下和装上盖子，采样管应无断裂、塌陷、

破裂或其他可见损坏；采用螺口密封的采样管不会出现管盖滑丝、锁死等损坏。

4.3按照附录A规定的方法进行容器泄露试验时，采样管应通过该泄露实验，即未检测出荧光。

4.4预期用于分子诊断的采样管，所用材料不得淬灭或吸附核酸，不得含有荧光素或荧光增白剂，

制造商有责任对材料与采样管预期使用的适合性进行验证并确认。

注：制造采样管管体的材料应该选用疏水性高分子材料，特别是在高张力离子浓度时，

Polyethylene（聚乙烯）比Polypropylene（聚丙烯）更容易吸附DNA。

4.5物理尺寸：采样管尺寸以采样管管口外径×采样管高度（含盖）的毫米数标示。制造商标示

的采样管尺寸与实际测试的数值误差不得＞5%。

5保存液

5.1病毒培养保存液(非灭活型)应能够保持病毒的完整外壳，以维持抗原表位和核酸的完整性。

一般应由无机盐、缓冲盐、氨基酸、葡萄糖和蛋白质等组成，可以添加抗生素和酸碱指示剂。

5.2病毒灭活保存液（灭活型）应能够在采样后迅速灭活病毒，并有效防止样本中的核酸分解。

一般应由缓冲盐、病毒裂解剂、表面活性剂、核酸降解防止剂等组成，可以添加酸碱指示剂和抗冻

剂。

注：附录E提供了保存液通用规范。

2

T/SDMDAXXX-2022

5.3制造商有责任对病毒保存液的适用性进行验证，并通过产品使用说明书等形式提供给使用者。

5.4附录B提供了保存液对病毒保存能力的检测方法、附录C提供了保存液对病毒灭活能力的检

测方法、附录D提供了保存液对核酸保存稳定性的试验方法。

5.5保存液容量：保存液的容量误差应在标示值的±5%之内。

5.6酸碱度（pH值）：保存液的pH值误差应在制造商标示值的±0.5。

6制造商提供的信息

6.1每一采样管上都应附有关于正确使用的信息，信息中应考虑对用户的培训及其知识水平，并

能识别出制造商。如果允许，这些信息应标在采样管上、随附文件上和（或）初包装上。

6.2采样管标签上应标明下列信息：

a)产品名称及保存液种类；

b)制造商名称或商标；

c)产品制造批号、生产日期、有效期；

d)特殊贮存和（或）处置条件；

e)采样管规格和（或）保存液容量；

f)相应的警示和（或）采取的措施。

7运输与贮存

7.1如果采样管预期在规定的条件下运输、贮存、使用，则应在采样管上、或标签上或初包装中随

附文件上清晰地表述出来。

7.2存放核酸检测样本的冰箱不应该有自动除霜（Frost-free）的功能，因为冰冻解冻的温度循环，

会造成核酸的断裂退化。

3

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附录A

（规范性附录）

采样管泄漏试验

A．1试剂和仪器

A.1.1溶液：2.5g荧光素钠（Cas号518-47-8）溶于100ml病毒保存液1）中。

A.1.2水：暗室中紫外光（A.1.3）下，在不放大的情况下，观察者以正常视力或矫正视力观察时

无荧光。

A.1.3紫外(UV)光源：发射365nm单一波长。

A.1.4移液器：移液量1—5mL。

A.1.5培养箱：具备37℃恒温功能的培养箱。

A.1.6烧杯：容量100mL。

A．2试验步骤

A.2.1从采样管上取下盖子，用移液器吸取A.1.1溶液2mL，加入采样管底部，注意不要使溶液污染

采样管口和管外壁，按照规定的封闭扭矩旋紧盖子。

A.2.2在无放大条件下，在暗室紫外光下观察，确保外表面没沾上溶液。必要时用水冲洗污染物，

按上述方法在紫外光下重新检验。

A.2.3准备50mL水加入100mL容量的烧杯内，在无放大条件下，在暗室紫外光下观察，无荧光。

A.2.4将采样管倒置浸入A.2.3的烧杯内，使水浸没盖子，在恒温37℃的培养箱内放置72小时。

A.2.5取出采样管，在无放大条件下，在暗室紫外光下，对浸过采样管的烧杯中的水进行检验，若

水中未检测出荧光则证明通过该实验。

1)用于溶解荧光素钠的溶剂选择使用病毒保存液而不是水，因为病毒保存液的配方中含有高浓度

的盐及表面活性剂，这些成分与采样管的密封部分接触后可能会影响采样管的密封性。生产企

业在试验验证阶段对采样管的泄漏试验宜采用拟使用的病毒保存液做为溶剂，进行泄漏试验。

4

T/SDMDAXXX-2022

附录B

（资料性附录）

病毒存活性能检测方法（适用于非灭活保存液）

本方法用于保存液病毒存活性能的检测。对于囊膜病毒样本的灭活性能测定可采用甲型流感病

毒标准毒株WSN作为检测样本；对于非囊膜病毒的灭活性能测定可采用肠道病毒71型作为检测样

本。

C.1实验材料与试剂

C.1.1实验材料（可选）

流行性感冒病毒A/WS/33(ATCCVR-825)

肠道病毒71型（ATCCVR-1432）

非洲绿猴肾传代病毒（VERO，ATCCCCL-81）

犬肾细胞（MDCK，ATCCCCL-34）

C.1.2实验试剂

C.1.2.1病毒保存液

C.1.2.2培养基

C.1.2.2.1DMEM细胞培养基:高糖（含L-谷氨酸和丙酮酸钠）。

C.1.2.2.2无血清DMEM培养液：DMEM+100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素。

C.1.2.2.3DMEM培养液：DMEM+10%胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素。

C.1.2.2.4DMEM维持液：DMEM+2%胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素。

C.1.2.2.52×无酚红DMEM细胞维持液：2X无酚红DMEM+4%胎牛血清、200U/mL青霉素和200

μg/mL链霉素。

C.1.2.3无酚红DMEM细胞培养基。

C.2仪器与器材

C.2.1仪器

离心机、二氧化碳培养箱、倒置显微镜、冰箱、生物安全柜、移液器、恒温水浴箱。

C.2.2器材

采样管、平底培养板（12孔、96孔）、细胞培养瓶、无菌移液管。

C.3操作步骤

C.3.1病毒样本制备

将保存的甲型流感病毒或肠道病毒71型按照与保存液1：10比例添加至采样管中，如取300

7

微升病毒（10TCID50/mL）加入到含有3mL保存液的采样管中，室温放置4小时，并设立对照组，

如下表C.1所示。

5

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表C.1保存病毒样本制备方法

组别试验方法

7

试验组300μL病毒（10TCID50/mL）加入到含有3mL保存液的采样管中

7

对照组300μL病毒（10TCID50/mL）加入到含有3mLC.1.2.2.3采样管中

C.3.3病毒存活验证

C.3.3.1实验前准备

染毒前一天T75培养瓶中的MDCK或Vero细胞进行1:4传代，调整细胞浓度，12孔板每孔加

入1×105细胞，置二氧化碳培养箱培养至单层细胞。

C.3.3.2样本接种细胞（可选）

a)第一代感染：弃细胞培养液，用PBS清洗细胞1次。取100μL已去除灭活成分的灭活病

毒液，以无血清DMEM培养液进行1:3稀释，将得到的300μL病毒稀释液感染12孔板的

1个细胞孔，补加无血清DMEM培养液至1mL（感染流感病毒时感染液中TPCK-Trypsin

终浓度为1μg/mL），做3个复孔，37℃、5%CO2孵育1h，吸弃孔中液体，补加1mL含

2%血清的DMEM维持液，继续培养72h；取培养基上清，4℃、3000rpm离心5min，收

集上清。标记为第一代。

b)二代、三代感染：分别从3个一代病毒液中取300μL感染12孔板的1个细胞孔，补加无

血清DMEM培养液至1mL（感染流感病毒时感染液中TPCK-Trypsin终浓度为1μg/mL），

37℃、5%CO2孵育1h，吸弃孔中液体，补加1mL含2%血清的DMEM维持液，继续培养

72h；取培养基上清，4℃、3000rpm离心5min，收集上清。标记为第二代。重复二代操

作，收获第三代病毒液。

c)病毒检测

1）细胞病变观察

每代病毒培养时，在倒置显微镜下观察Vero细胞或MDCK细胞的病变情况。观察细胞圆缩、

脱落、细胞膜边缘不整齐、胞浆中出现颗粒样凋亡小体等现象，并记录。

2）TCID50测定

取每代病毒液进行TCID50测定。先用无血清DMEM培养液（感染流感病毒时感染液中

TPCK-Trypsin终浓度为1μg/mL）对待滴定样本做10倍系列稀释，然后将稀释后的样本按100μL/

孔加入96孔培养板，每个稀释度5个重复孔，在37℃，放置1～2小时，以确保残留病毒全部吸附

在细胞上。取出培养板，用无血清DMEM培养液清洗细胞2-3次，更换为DMEM维持液。继续放

入二

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氧化碳培养箱中（37℃，5%二氧化碳）培养，每隔12h在显微镜下观察细胞病变，连续观察3天，

逐孔观察并记录细胞病变情况。

终点稀释法病毒感染滴度计算：以半数细胞感染剂量（TCID50）表示。根据Reed-Muench氏法

计算。

d)结果判定

根据所选择的实验对象和实验方案判定结果，并给出如下2种实验结果：

①每代病毒培养物在显微镜下观察未出现细胞病变。

-3.8

②每代病毒液TCID50测定≥10/0.1mL。

进行判定的标准是：实验结果需同时满足①和②，方可证明病毒存活。

7

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附录C

（资料性附录）

病毒灭活性能检测方法

本方法用于病毒保存液灭活性能的检测。对于囊膜病毒样本的灭活性能测定可采用甲型流感病

毒标准毒株WSN作为检测样本；对于非囊膜病毒的灭活性能测定可采用肠道病毒71型作为检测样

本。

C.1实验材料与试剂

C.1.1实验材料（可选）

流行性感冒病毒A/WS/33(ATCCVR-825)

肠道病毒71型（ATCCVR-1432）

非洲绿猴肾传代病毒（VERO，ATCCCCL-81）

犬肾细胞（MDCK，ATCCCCL-34）

C.1.2实验试剂

C.1.2.1病毒保存液

C.1.2.2生理盐水

C.1.2.3中和剂（含0.5%吐温80、0.5%卵磷脂、0.5%甘氨酸、0.5%硫代硫酸钠的30mMPBS溶液）。

C.1.2.4消化液（含0.03%乙二胺四乙酸及0.25%胰蛋白酶的PBS溶液或类似消化液）。

C.1.2.5培养基

C.1.2.5.1DMEM细胞培养基:高糖（含L-谷氨酸和丙酮酸钠）。

C.1.2.5.2无血清DMEM培养液：DMEM+100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素。

C.1.2.5.3DMEM培养液：DMEM+10%胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素。

C.1.2.5.4DMEM维持液：DMEM+2%胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素。

C.1.2.5.52×无酚红DMEM细胞维持液：2X无酚红DMEM+4%胎牛血清、200U/mL青霉素和200

μg/mL链霉素。

C.1.2.6PBS配制的2%低熔点琼脂

C.1.2.74%多聚甲醛溶液

C.1.2.8结晶紫（Crystalviolet）：以20%乙醇(体积比)配制成1%的溶液，4℃避光保存，临用前以

双蒸水按1:10稀释使用。

C.1.2.9配制1mg/mL甲苯磺酰-苯丙氨酸氯甲基酮处理的胰酶（TPCK-Trypsin）储存液。

C.1.2.10无酚红DMEM细胞培养基。

C.2仪器与器材

C.2.1仪器

离心机、二氧化碳培养箱、倒置显微镜、冰箱、生物安全柜、移液器、恒温水浴箱。

C.2.2器材

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采样管、超滤器（截流分子量100Kda）、平底培养板（12孔、96孔）、细胞培养瓶、无菌移

液管。

C.3操作步骤

C.3.1灭活病毒样本制备

将保存的甲型流感病毒或肠道病毒71型按照与保存液1：10比例添加至采样管中，如取300

7

微升病毒（10TCID50/mL）加入到含有3mL保存液的采样管中，室温放置10分钟，并设立对照组，

如下表C.1所示。

表C.1灭活病毒样本制备方法

组别试验方法

7

试验组300μL病毒（10TCID50/mL）加入到灭活采样管中

7

阳性对照300μL病毒（10TCID50/mL）加入到3mL生理盐水中（体积与保存液一致）

阴性对照300μL生理盐水加入到灭活采样管中

C.3.2去除灭活成分（超滤法）

将0.5mLC.3.1步骤制备的含病毒保存液加入到截流分子量为100KDa的超滤管中，然后再添加

4.5mL生理盐水，4℃，3000g离心超滤，至超滤管内上层液体体积约为0.5mL时停止离心，再次

加入4.5mL的生理盐水，4℃，3000g离心超滤，同样步骤共超滤5次，第5次超滤后，加入0.5mL

无血清DMEM培养基混匀。同时按照表C.1中阳性对照组和阴性对照组，以同样的超滤法进行操作。

C.3.3病毒灭活验证

C.3.3.1实验前准备

染毒前一天T75培养瓶中的MDCK或Vero细胞进行1:4传代，调整细胞浓度，12孔板每孔加

入1×105细胞，置二氧化碳培养箱培养至单层细胞。

C.3.3.2样本接种细胞（可选）

a)第一代感染：弃细胞培养液，用PBS清洗细胞1次。取100μL已去除灭活成分的灭活病毒

液，以无血清DMEM培养液进行1:3稀释，将得到的300μL病毒稀释液感染12孔板的1个细胞孔，

补加无血清DMEM培养液至1mL（感染流感病毒时感染液中TPCK-Trypsin终浓度为1μg/mL），

做3个复孔，37℃、5%CO2孵育1h，吸弃孔中液体，补加1mL含2%血清的DMEM维持液，继续

培养72h；取培养基上清，4℃、3000rpm离心5min，收集上清。标记为第一代。

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T/SDMDAXXX-2022

b)二代、三代感染：分别从3个一代病毒液中取300μL感染12孔板的1个细胞孔，补加无血

清DMEM培养液至1mL（感染流感病毒时感染液中TPCK-Trypsin终浓度为1μg/mL），37℃、5%

CO2孵育1h，吸弃孔中液体，补加1mL含2%血清的DMEM维持液，继续培养72h；取培养基上清，

4℃、3000rpm离心5min，收集上清。标记为第二代。重复二代操作，收获第三代病毒液。

c)病毒检测

1)细胞病变观察

每代病毒培养时，在倒置显微镜下观察Vero细胞或MDCK细胞的病变情况。观察细胞圆缩、

脱落、细胞膜边缘不整齐、胞浆中出现颗粒样凋亡小体等现象，并记录。

2）TCID50测定

取每代病毒液进行TCID50测定。先用无血清DMEM培养液（感染流感病毒时感染液中TPCK-Trypsin

终浓度为1μg/mL）对待滴定样本做10倍系列稀释，然后将稀释后的样本按100μL/孔加入96孔培

养板，每个稀释度5个重复孔，在37℃，放置1～2小时，以确保残留病毒全部吸附在细胞上。取

出培养板，用无血清DMEM培养液清洗细胞2-3次，更换为DMEM维持液。继续放入二氧化碳培

养箱中（37℃，5%二氧化碳）培养，每隔12h在显微镜下观察细胞病变，连续观察3天，逐孔观察

并记录细胞病变情况。

终点稀释法病毒感染滴度计算：以半数细胞感染剂量（TCID50）表示。根据Reed-Muench氏法

计算。

3）噬斑实验

取每代病毒液进行噬斑实验。先用无血清DMEM培养液（感染流感病毒时感染液中

TPCK-Trypsin终浓度为1μg/mL）对待滴定样本做10倍系列稀释，然后接种于细胞培养孔中（12

孔板），滴定各稀释度样本中残留病毒量。接种细胞前，将汇合度约90%的单层细胞中的培养液倾

出，加入1mL待测样品，放置37℃吸附1～2小时，吸弃上清，用无血清DMEM培养液清洗细

胞2～3次；将2%低熔点琼脂（37℃）与2×无酚红DMEM细胞维持液（37℃）等体积混合后

迅速混匀并加入到细胞培养孔中；将培养板放入4℃冰箱冷却10min，置于37℃细胞培养箱中倒

置培养48-72小时。实验终点后，向每个孔中加入1mL4%多聚甲醛溶液固定30分钟，用自来

水冲洗后加结晶紫染色20分钟，冲洗干净后计数。细胞孔内圆形不着色的透明区即为一个噬斑单

位，每毫升测试样品中病毒含量（Pfu/mL）计算：

病毒含量=平板平均噬斑数×稀释倍数

平均灭活对数值的计算

平均灭活对数值按下式计算：设阳性（病毒）对照组平均病毒感染度（TCID50或Pfu）为N0，

实验组平均病毒感染滴度（TCID50或Pfu）为NX。

平均灭活对数值=logN0-logN×A

d)结果判定

根据所选择的实验对象和实验方案，确定判定结果。应当给出如下3种实验结果：

10

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①每代病毒培养物在显微镜下观察未出现细胞病变。

0.67

②每代病毒液TCID50测定<10TCID50/mL。

③每代病毒液空斑滴定在10-1滴度未见明确空斑形成。

进行判定的标准是：实验结果需同时满足①和②或者①和③，方可证明病毒被彻底灭活。

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附录D

（资料性附录）

核酸稳定性检测方法

D.1试剂与仪器

D.1.1试剂

核酸提取试剂盒符合GB/T37875-2019；荧光定量PCR试剂盒（检出限≤500copies/mL）；新

型冠状病毒核酸标准物质（GBW(E)091089）；流行性感冒病毒A/WS/33（ATCCVR-825）。

D.1.2仪器

荧光定量PCR仪。

D.2操作步骤

D.2.1样本制备

D.2.1.1核酸标准物质

用无RNA酶水对新型冠状病毒核酸标准物质（GBW(E)091089）（108copies/mL）进行梯度稀

释，制备成不同浓度梯度的新型冠状病毒核酸样本，分别取100μL样本溶液，添加至采样管中（1:10

稀释），混合均匀，制备成终浓度为（1×105～5×105）copies/mL的高浓度样本和（5×102～1×103）

copies/mL的低浓度样本。

D.2.1.2病毒

将已热灭活且标定浓度的流感病毒（≥107copies/mL）用无灭菌磷酸盐缓冲液（pH7.4）进行

梯度稀释，制备成不同浓度梯度的病毒样本，分别取100μL样本溶液，添加至采样管中（1:10稀

释），混合均匀，制备成终浓度为（1×105～5×105）copies/mL的高浓度样本和（5×102～1×103）

copies/mL的低浓度样本。

D.2.2样本保存处理

将样本分成两组，一组立即进行病毒核酸的提取，另一组在4℃条件下放置48小时后进行病毒

核酸的提取。每种浓度下每组设置三个复管。

D.2.3核酸提取

提取步骤参照核酸提取试剂盒说明书的要求。

D.2.4荧光定量检测

D.2.4.1试剂盒检测方法

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采用国家行政主管部门批准的商业化新冠病毒PCR检测试剂盒或流感病毒PCR检测试剂盒进行

荧光定量PCR；也可采用以下引物探针自行配制体系进行荧光定量PCR的检测。

D.2.4.2配制方法

采用表D.1中的引物和探针进行配制反应溶液，建立反应体系（表D.2）进行检测。

表D.1引物、探针的序列和浓度

引物和探针序列（5’→3’）工作浓度

N-FGGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT20µM

N-RCAGACATTTTGCTCTCAAGCTG20µM

N-PROX-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA10µM

新冠病毒核酸

ORF-FCCCTGTGGGTTTTACACTTAA20µM

标准物质

ORF-RACGATTGTGCATCAGCTGA20µM

FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG

ORF-P10µM

-BHQ1

Flu-FGACCRATCCTGTCACCTCTGAC20µM

流行性感冒病毒Flu-RAGGGCATTYTGGACAAAKCGTCTA20µM

Flu-PFAM-TGCAGTCCTCGCTCACTGGGCACG-BHQ110µM

表D.2荧光定量PCR反应体系

组分体积（μL）

无RNA酶水6

2×RT-PCR反应混合液（Mix）12.5

探针（10µM）0.5

上游引物（20µM）0.5

下游引物（20µM）0.5

核酸模板5

共计25

13

T/SDMDAXXX-2022

表D.3荧光定量PCR反应条件

温度时间循环数

50℃15min

1

94℃1min

94℃15s45

58℃30s*

注：*FAM荧光收集在60℃延伸阶段

D.3结果计算

计算不同保存时间段的Ct值，每次检测样本重复3次，计算求得平均Ct值，计算不同保存时

间段的Ct值变化率。

Ct值变化率按下式计算：设CtX为不同保存时间点的荧光定量PCR的Ct值，Ct0为样本加入采

样管后最初时刻的荧光定量PCR的Ct值。

Ct值变化率=(CtX-Ct0)/Ct0×100%

D.4结果判定

|Ct值变化率|≤5%判断核酸稳定性合格。

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T/SDMDAXXX-2022

附录E

（资料性附录）

保存液通用规范

E．1水

制造保存液所用的水应为无核酸酶的超纯水，

全部生产用水应经过验证，RNases＜0.01ng/mL,Dnases＜4pg/μl。

E.2试剂

如果采用的试剂已经列入《中国药典》、分析试剂等级或其他等同规范，则化学试剂应满足这

些典籍的要求，或在分析证书（COA）或供应商提供的其他文件中明确载明。

如果采用的试剂未列入上述典籍，则应由制造商规定具体的验收标准，并在生产规范中明确记

录。

E.3抗生素与防腐剂

病毒培养保存液可以使用抗生素，选用常规抗生素的目的是为了防止细菌生长而不影响病毒的

存活。预期用于病毒分离、培养及核酸检测使用的保存液不得使用叠氮钠、硫柳汞及醛类防腐剂。

E.4螯合剂

为防止金属离子螯合影响检测，可以使用乙二胺四乙酸及其盐、柠檬酸及其盐做为金属螯合剂，

但不能使用肝素及其盐，因为肝素抑制Taq酶作用很强，且在核酸提取中很难去除。

E.5酸碱指示剂

病毒培养保存液可选用苯酚红及其钠盐、甲酚红及其钠盐做为酸碱指示剂，不能选用吖啶橙、

中性红等指示剂，因为此类染料可与病毒的核酸结合，暴露于光线之下可使核酸分解，而使病毒失

活。

E.6灭活剂

病毒灭活保存液可选用胍盐（硫氰酸胍、盐酸胍）、季铵盐、苯酚、脱氧胆酸钠、蛋白酶K做

为病毒灭活剂，不能选用β-丙内酯、甲醛、乙醚、次氯酸钠等通过改变病毒核酸结构达到灭活病

毒的灭活剂，以免影响核酸检测。

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T/SDMDAXXX-2022

目次

前言............................................................................................................................................II

引言..........................................................................................................................................III

1....范围.......................................................................................................................................1

2....规范性引用文件...................................................................................................................1

3....术语和定义...........................................................................................................................1

4....材料与结构设计...................................................................................................................2

5....保存液...................................................................................................................................2

6....制造商提供的信息...............................................................................................................3

7.....运输和贮存...........................................................................................................................3

附录A（规范性附录）..............................................................................................................4

附录B（资料性附录）..............................................................................................................5

附录C（资料性附录）...............