血液一般检查见习2

实验室注意事项安静有序，不要大声喧哗禁止在实验室喝水吃东西时刻警惕生物污染生物污染垃圾放入黄色塑料袋实验完毕将器材放入指定收集位置实验结束将自己的实验台打扫干净每组组长安排2人值日不得迟到早退，实习过程必须穿白大衣血液一般检查

GeneralExaminationOfBlood北医三院检验科Departmentoflaboratorymedicine,PekingUniversityThirdHospital

Content血液标本采集、涂片、染色全血细胞计数（CBC）、三分类显微镜下白细胞分类

1.血液标本采集

Bloodspecimencollection熟悉毛细血管与静脉穿刺采血方法掌握真空采血管的种类与正确使用正确分析检验结果与血液标本采集的关系血标本采集器材毛细血管采血一次性采血针一次性微量吸管消毒棉签安尔碘皮肤消毒剂静脉穿刺采血一次性采血针持针器止血带枕垫消毒棉签安尔碘皮肤消毒剂真空采血管真空采血管VacuumtubeCapcolorAdditiveSpecimentypeAnticoagulantfunctionUtilizationRedNoSerumChemistrySerologyYellowSeparationgelSerumAcceleratecoagulationChemistrySerologyLightblurSodiumcitratePlasmaCaeliminationCoagulationGreenLithiumheparinPlasmaEnhanceATⅢactivityChemistryGreySodiumfluoridePlasmaGlycolysisinhibitonGlucoseLavenderEDTAWholebloodIonseliminationCa,MgHematology2.全血细胞计数（CBC）了解血液分析仪的各项参数、参考值、操作方法与结果分析。熟悉血细胞计数板的使用方法。掌握血涂片的制备和瑞特-吉姆萨染色。掌握显微镜法外周血分类计数的方法、各种WBC的正常形态。血液分析仪

HematologyAnalyer两大功能细胞计数功能细胞分类功能原理电阻抗法光散射法SysmexKX-21：三分群BeckmanCoulterSTKS：五分类电阻抗原理

PrincipleofelectricalimpedanceCoulterprinciple根据血细胞相对非导电的性质，悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒，在通过计数小孔时可引起电阻的变化为基础，对血细胞进行计数和体积测定。电阻抗原理计数

Principleofelectricalimpedance将等渗电解质溶液稀释的细胞悬液置入不导电的容器中，将小孔管（transducer）插进细胞悬液中。小孔管内充满电解质溶液，并有一个内电极，小孔管的外侧细胞悬液中有一个外电极。接通电源后，位于小孔两侧的电极产生稳定的电流。当细胞通过小孔时，瞬间引起了电压变化而出现一个脉冲信号。脉冲大小反映细胞体积大小，脉冲数量代表细胞数量。SysmexKX-21电阻抗原理分类（三分群）不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显差异，根据这些脉冲大小，可对白细胞进行分群。小细胞区：主要是淋巴细胞单个核细胞区(也称作中间细胞):主要包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞大细胞区：主要是中性粒细胞容量、电导、光散射检测原理（VCS）

VolumeconductivitylightscantterVolume：应用电阻抗原理测量细胞体积Conductivity：根据细胞壁能产生高频电流的性能，采用高频电磁探针，测量细胞内部结构，即以细胞核和细胞质的比例、细胞内颗粒的大小和密度，来辨别体积相同，但性质不同的两个细胞群体。Lightscatter:来自激光的单色光直接扫描进入计数敏感区的每一个细胞，根据细胞产生的不同角度的散射光(10~70)，可提供细胞形态、核结构等光散射信息，并能鉴别细胞颗粒的构型和质量（粗颗粒的光散射比细颗粒更强）；光散射可区别粒细胞的类型。BeckmanCoulterSTKS血涂片制备

PreparingbloodsmearWright-Giemsasolutioningredients酸性染料伊红（钠盐）和碱性染料美蓝（氯盐）伊红钠盐有色部分为阴离子，可与带正电荷的物质结合。氯化美蓝有色部分为阳离子，可与带负电荷的物质结合。二者溶解在甲醇中形成可溶性的伊红化美蓝溶液，既可以固定细胞又利于细胞蛋白质选择性地吸附其中有色离子而着色。氯化美蓝放置久后可氧化为天青，对细胞核染色加强，添上更多色彩，染色效果更好。Wright-Giemsastainingprinciple血红蛋白、嗜酸性颗粒均为碱性物质，故与酸性染料伊红结合而染成红色。细胞核的核蛋白与原、幼细胞的胞质为酸性物质，故与碱性染料美蓝和天青相结合，染成深蓝色或深紫红色。中性颗粒与美蓝和伊红同时结合而染为淡紫红色。瑞氏染粉是由伊红化美蓝组成，对胞质及中性颗粒的着色性极佳，面姬姆萨染粉由天青、伊红组成，对细胞核着色较好，结构显示更清晰。蛋白质所带电荷随溶液的pH而定。故为使血片每次染色效果好且趋于一致，需配制pH6.4～6.8的缓冲液。Wright-Giemsastainingprocedure滴加瑞-姬复合染液数滴于血涂片上（以盖住血膜为度），静置约半min，目的在于用染液的甲醇成分固定血细胞。加相当于染液2倍量的缓冲液充分混匀。染色约l0min，用水冲去染液，干燥后镜检。白细胞分类计数

Whitebloodcelldifferentialcount,DC先用低倍镜选好薄厚适宜、染色良好、细胞分布均匀处，再用油浸镜观察。通常计数100个白细胞。按图所示方向移动血涂片，将所遇到的各类白细胞分别记录，直到计数100个白细胞为止。计算每类白细胞的数目，即其百分数值。Neutrophils(band)1~5%Neutrophils(segmented)50~70%Eosinophils0.5~5%Basophils0-1%Lymphocytes20-40%Monocytes3~8%血细胞形态学识别规律原则：核浆兼顾，以核为主次序：胞体、胞浆、胞核、核仁红细胞形态红细胞大小不均(anisocytosis)红细胞结构异常Howell-Jollybody,Cabotring球形红细胞椭圆形红细胞口形红细胞棘形红细胞靶形红细胞

泪滴形红细胞镰形红细胞锯齿形红细胞棘形红细胞红细胞缗钱状形成Neutrophils胞体10~15μm

胞浆量多，淡红色，含许多淡紫红色小颗粒胞核

band凹陷的程度超过核直径的一半，核最窄径大于最宽径的1/3，核弯曲成带形、S形、U形、W形等。核染色质粗糙，浓集成小块状，染色不均匀。Segmented通常分2~5叶，彼此间有较细的核丝或较粗的核桥，核最窄径小于最宽径的1/3。核染色质粗糙。LymphocyteLargelymphocyte胞体12~18μm，圆形。胞浆天蓝色，透明，可有少数较大的嗜苯胺蓝颗粒。胞核类圆形，核染色质固缩成一团，染成紫红色，着色比小淋巴细胞为淡。有时刻隐约可见核仁痕迹。Smalllymphocyte胞体5~10μm，圆形或椭圆形。胞浆甚少，几近无浆，或在核凹陷侧可见少量蓝色胞浆，颗粒可有可无，常因胞浆过少而看不到颗粒。胞核占细胞的极大部分，圆形或豆形，核染色质凝缩，染成紫红色，无核仁。Monocytes胞体圆形或不规则形，12~20μm胞浆较多，淡灰蓝色，可见灰尘洋细微红色或红紫色颗粒（嗜苯胺蓝颗粒）胞核呈肾形、马蹄形或分叶状等，有的扭曲折叠，偶见圆形核的。染色质呈疏松网状，染紫红色。无核仁，偶见核仁遗迹。Eosinophils胞体10~18μm

充满等大圆形桔红色颗粒胞核

band呈弯曲杆状、马蹄形，核最窄径大于最宽径的1/3，核染色质粗糙。Segmented多为2叶，呈双逗点状，也有3~5叶。叶间有核丝或较粗的核桥，核最窄径小于最宽径的1/3。核染色质粗糙。Basophils胞体10~14μm，类圆形