《生物制药工艺》课件-项目六：提取分离纯化技术

细胞破碎技术《生物制药工艺》如何破碎大肠杆菌获得门冬酰胺酶？湖北生物科技职业学院

大肠杆菌门冬酰胺酶门冬酰胺酶对治疗白血病有显著疗效。细胞破碎技术湖北生物科技职业学院

细胞破碎技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术，是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质(产品)的基础。动物细胞与细菌细胞结构湖北生物科技职业学院细胞破碎阻力来源湖北生物科技职业学院细胞破碎技术湖北生物科技职业学院通过机械运动产生的剪切力，使组织、细胞破碎。机械破碎捣碎法研磨法匀浆法超声法通过各种物理因素的作用，使组织、细胞的外层结构被破坏，而使细胞破碎。物理破碎温度差破碎法压力差破碎法通过各种化学试剂对细胞膜的作用，而使细胞破碎。化学破碎有机溶剂表面活性剂酸碱溶液通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使细胞外层结构受到破坏，而达到细胞破碎。酶促破碎自溶法外加酶制剂法机械破碎-匀浆器湖北生物科技职业学院

匀浆器常由精细加工的研棒、管子和电动搅拌器构成。用于使样品均匀化的装置，可使组织、细胞或细胞组分等破裂分散成小颗粒，成为比较均匀的悬浮液。机械破碎-高压匀浆器湖北生物科技职业学院

细胞浆液通过止逆阀进入泵体内，在高压下迫使其在排出阀的小孔中高速冲出，并射向撞击环上，由于突然减压和高速冲击，使细胞受到高的液相剪切力而破碎。机械破碎-高压匀浆器湖北生物科技职业学院

酵母菌大肠杆菌高压匀浆器适用于：丝状真菌高压匀浆器不适用于：机械破碎-高速珠磨机湖北生物科技职业学院

通过将细胞悬浮液与玻璃小珠、石英砂或氧化铝等研磨剂一起快速搅拌，使细胞获得破碎。机械破碎-超声波破碎仪湖北生物科技职业学院

利用超声波在液体中的分散效应，使液体产生空化的作用，从而使液体中的固体颗粒或细胞组织破碎。物理破碎-反复冻融法湖北生物科技职业学院

将待破碎细胞在-15℃-20℃条件下冷冻，然后放于室温或40℃迅速融化，反复冻融几次。由于反复的冷冻与融化时由于细胞中形成了冰晶及剩余细胞液中的盐浓度增高而引起细胞溶胀破碎，细胞内产物流出。物理破碎-干燥法湖北生物科技职业学院1空气干燥适用于酵母菌2真空干燥适用于细菌3冷冻干燥适用于不稳定活性物质4喷雾干燥单击此处添加文本具体内容

干燥条件下菌体细胞失水，细胞内盐分浓度增大，细胞渗透性发生变化，然后用丙酮、乙醇或缓冲液等溶剂抽提胞内物质。化学破碎-碱裂法湖北生物科技职业学院

在提取质粒的实验中使用的碱裂法，通过加入NaOH和SDS破坏细胞壁和细胞膜，使内容物释放出来。使用化学法时要注意选用适当的试剂，减小对目的产物的破坏，并使之与杂质分离。化学破碎-丙酮法湖北生物科技职业学院

将大肠杆菌细胞进行破碎提取门冬酰胺酶，可以用丙酮法，既可以破碎大肠杆菌，又可以使细胞脱水从而保护酶的活性。组织匀浆丙酮粉冷丙酮洗涤10倍体积丙酮真空干燥离心或过滤沉淀生物破碎-酶解法湖北生物科技职业学院

溶菌酶，又称为胞壁质酶，专门破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键。MGMGMGMGMGMGMGMGMGMGMGMG溶菌酶作用点细菌的细胞壁由胞壁质组成。胞壁质由N-乙酰氨基葡萄糖及N-乙酰胞壁酸交替组成的多聚物。细胞破碎技术小结湖北生物科技职业学院

溶菌酶，又称为胞壁质酶，专门破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键。——溶剂萃取技术《生物制药工艺》鲜榨西红柿汁有油西红柿汁生活小案列加入油知识点萃取的原理及萃取剂的选择分液漏斗的介绍分液的具体操作四氯化碳提取饱和碘水中的碘ACB萃取原理定义：利用溶质在互不相溶的两种溶剂里溶解度的不同，用一种溶剂（溶解度更大）把溶质从它与另一溶剂所组成的溶液中提取出来，这种方法叫做萃取。溶剂A和溶剂C互不相容萃取溶解度大溶解度小当油与水这种不互溶的液体混在一起的时候，我们该如何分离呢？想一想？分液漏斗的介绍其他。。。。勺子舀？滴管吸？小心倾倒？分液定义：将互不相容的液体分开的操作叫做分液。分液漏斗的介绍普通漏斗长颈漏斗分液漏斗分液漏斗介绍

带凹槽的磨口玻璃塞磨口瓶颈上带有小孔

带有小孔的活塞要打开玻璃塞，或者让凹槽与小孔对准，做到漏斗内外大气相通振荡倒置振荡时，应左手握住活塞部分，右手压住分液漏斗口部；要及时打开活塞放气装液小心将溶液从上端倒进去，注意关闭活塞检漏在分液漏斗中注入少量的水，塞上瓶塞，倒置看是否漏水，若不漏水，把瓶塞旋转180度，再倒置看是否漏水。若无漏水，则分液漏斗密闭性良好。静置分液上层溶液从上口倒出下层溶液从下口流下分液具体操作实验视频：CCl4萃取饱和碘水中的碘实验总结A萃取剂与原溶剂互不相容（CCl4与H2O互不相容）B溶质I2在萃取剂CCl4中的溶解度大于在H2O中的溶解度C萃取CCl4不与溶质I2反应D萃取剂与原溶剂密度不同课堂检测下列物质不能从碘水中萃取碘的是（）A汽油B石油醚C四氯化碳D酒精答案：（D）C解疑生活案例AB水番茄主要成分油

解释：水煮的西红柿溶液是均匀的，而有油的西红柿汤出现分层且上层颜色是鲜红的？

解释：水煮的西红柿溶液是均匀的，而有油的西红柿汤出现分层且上层颜色是鲜红的？有机溶剂萃取法生产角鲨烯《生物制药工艺》湖北生物科技职业学院导入——“神奇的食物制氧机”

深海鲨鱼能在水深500-1000米的深海中生存，水温仅2℃左右，水压是每平方米0.5-1吨，那里几乎没有阳光，植物和浮游生物几乎难于生成，以至于几乎没有光合作用来制造氧气，那深海鲨鱼为什么还能在这严酷的条件下生存呢？湖北生物科技职业学院导入——“天然的食物制氧机”

其实，鲨鱼这顽强的生命力来自于其巨大肝脏所含的角鲨烯。科学家把称角鲨烯称为——神奇的食物制氧机。这角鲨烯到底是什么物质呢，为什么可以给身体制氧呢？它来源于哪里，有什么样的性质呢?我们怎么提取它呢？

角鲨烯的功效角鲨烯的来源和自然分布角鲨烯的结构角鲨烯的理化性质角鲨烯的简介重点讲解从罗汉果中提取角鲨烯角鲨烯的提取方法知识要点湖北生物科技职业学院角鲨烯的功效之一——“生氧”作用角鲨烯对以下缺氧性疾病有预防作用常打哈欠身体疲倦、嗜睡注意力不集中头昏脑胀记忆力下降、眩晕湖北生物科技职业学院角鲨烯的功效之一——“生氧”作用

能提高铜兰蛋白和转铁蛋白的水平以及SOD酶和乳酸脱氢酶活性，提高氧化还原能力和代谢能力，增加耐氧力A像红细胞那样摄取氧，随血液运输到机体组织后释放出氧气增加机体氧的供给，治疗缺氧性疾病B机理：湖北生物科技职业学院角鲨烯的功效之二——净化血液，预防心血管疾病中和血液中的氢离子降低酸性使血液偏碱性，进而净化血液心脏病高血压中风湖北生物科技职业学院角鲨烯的功效之三——增强免疫力角鲨烯能增加免疫系统中白血球含量，对化疗中白细胞减少有恢复功能，还可以消炎杀菌感冒耳鼻喉炎皮肤病肝炎湖北生物科技职业学院角鲨烯的功效之四——美容养颜抗氧化能力强，消除自由基，抵抗紫外线保湿抗皱淡化黑色素抑制老年斑修复细胞、治疗烫伤湖北生物科技职业学院

角鲨烯的来源和自然分布角鲨烯深海鲨鱼的肝面包酵母中少数植物如：罗汉果、梅树、榄仁树、植物油：棕榈油、橄榄油、麦胚油角鲨烯又名三十碳六烯，最初由日本化学家Tsujimoto于1906年在黑鲨鱼的肝油中发现。角鲨烯是由6个异戊二烯单位构成的不饱和脂肪烯烃，分子式为C30H50，含6个全反式双键的开链三萜物质。结构式如下图湖北生物科技职业学院角鲨烯（Squalene）的结构双键湖北生物科技职业学院化学性质双键可以和氢离子进行加成反应，还可以与很多氧化剂发生氧化还原反应溶解性几乎不溶于水，溶于乙醚、石油醚、丙酮等，微溶于乙醇、冰醋酸。状态无色或微黄色透明油状液体,有微弱的令人愉快的气味；角鲨烯的理化性质：湖北生物科技职业学院角鲨烯的生产方法2溶剂提取法33超临界CO2萃取法13鲨鱼肝油减压蒸馏提取法1湖北生物科技职业学院罗汉果中提取角鲨烯——溶剂提取法将罗汉果种仁或种籽破碎有机溶剂浸取破碎后的脂溶性物质分液漏斗除去脂溶性物质中有机溶剂罗汉果角鲨烯粗品经硅胶层析柱，有机溶剂洗脱收集洗脱液无色部分减压蒸馏除去有机溶剂制得罗汉果角鲨烯精品分段盐析技术提取生产胸腺素F5《生物制药工艺》湖北生物科技职业学院内分泌腺与激素湖北生物科技职业学院胸腺与胸腺激素

胸腺组织在新生儿及幼儿时期生长迅速为10～15克，到青春期仍然发育最大为25～40克，性成熟期以后则开始萎缩，逐渐变小，老人仅有10～15克。湖北生物科技职业学院胸腺与胸腺素

胸腺素（thymocin）是由胸腺上皮细胞分泌，是一类激素样物质，有胸腺生长素、胸腺生成素、胸腺因子等10多种，具有增强人的免疫功能，对人体防癌、抗感染及延缓衰老都有着重要的作用。最早于1966年Goldstein等人首先从小牛胸腺组织中提取到一种具有生物活性的物质，命名为胸腺素。目前，关于胸腺激素制剂进行了大量研究并取得了较好的成果，如表所示为常用胸腺素制剂。湖北生物科技职业学院胸腺素名称结构与化学性质备注胸腺素组分5一族酸性多肽，平均相对分子质量为1000~15000具有免疫活性猪胸腺素注射液多肽混合物，平均相对分子质量15000以下

胸腺素α1具有28个氨基酸残基的多肽，平均相对分子质量3108，pI为4.2

胸腺体液因子多肽，平均相对分子质量3200，pI为5.7（5.6-5.9），31个氨基酸残基组成，氨基酸顺序未知，对热稳定。诱导正常和去胸腺小鼠淋巴细胞生成和免疫重建血清胸腺因子9肽，N端被封闭，是焦谷氨酸，自然分离的最小的胸腺肽，平均相对分子质量857，pI为7.5，已确定氨基酸顺序并进行了合成合成的血清胸腺因子与天然的具有相同的生物学与化学性质，由胸腺上皮细胞产生。胸腺生成素具有49个氨基酸残基的多肽，平均相对分子质量5562，pI为5.7体外诱导骨髓细胞分为为成熟的T细胞，由胸腺上皮细胞合成和分泌。胸腺因子X多肽，平均相对分子质量4200

胸腺刺激激素多肽混合物

自身稳定胸腺激素糖肽，平均相对分子质量1800-2500最早期的产品是胸腺素组分5，又称为胸腺素F5，是由在80℃热稳定的40~50种多肽组成的混合物。分子量在1000~15000道尔顿，等电点pI3.5~9.5。对胸腺素混合物进行免疫活性测定，对有活性的称为胸腺素，如胸腺素α1；对无活性者则称为多肽，如多肽β1。目前已经研究清楚，胸腺素组分5中，胸腺素α1、α5、α7、β3和β4等是具有调节胸腺依赖性淋巴细胞分化和体外免疫反应的活性组分。湖北生物科技职业学院理化性质：胸腺素F5湖北生物科技职业学院原料来源：小牛或猪湖北生物科技职业学院制备方法：小牛胸腺素提取工艺路线上清液F2丙酮粉F3上清液F4超滤液胸腺素F5【加热去杂蛋白】80℃，15min，冷却1500×g离心【沉淀】丙酮-10℃【分段盐析】pH7.0磷酸盐缓冲液25%饱和硫酸铵50%饱和硫酸铵pH4.0【超滤】10mmol/LTris-HClpH8.0缓冲液【脱盐】SephadexG-25至无Clˉ【干燥】真空干燥胸腺碎块上清液上清液F1绞碎【捣碎、提取】生理盐水离心小牛胸腺盐析物湖北生物科技职业学院制备步骤：1、提取胸腺碎块上清液上清液F1绞碎【捣碎、提取】生理盐水离心小牛胸腺湖北生物科技职业学院制备步骤：2、加热去杂蛋白上清液F1上清液F2【加热去杂蛋白】80℃，15min，冷却1500×g离心湖北生物科技职业学院制备步骤：3、沉淀上清液F2丙酮粉F3【沉淀】丙酮-10℃湖北生物科技职业学院制备步骤：4、分段盐析丙酮粉F3上清液F4【分段盐析】pH7.0磷酸盐缓冲液25%饱和硫酸铵50%饱和硫酸铵pH4.0盐析物制备步骤：4、分段盐析注意事项湖北生物科技职业学院23331pH硫酸铵搅拌534冰浴脱盐盐析的成败决定于溶液的pH值与离子强度，溶液pH值越接近蛋白的等电点，蛋白质越容易沉淀。盐析一般用的硫酸铵，容易吸潮，因此在使用前，一般先磨碎，平铺放入烤箱内60摄氏度烘干后再称量，这样更准确。在加入盐时应该缓慢均匀，搅拌也要缓慢，越到后面速度应该更注意缓慢，如果出现一些未溶解的盐，应该等其完全溶解后再加盐，以免引起局部的盐浓度过高，导致蛋白质失活。盐析后最好搅拌40分钟到一个小时而且再在冰浴中放置一段时间。盐析后的蛋白质最好尽快脱盐处理，以免变性，透析较慢，一般可用超滤或者SephadexG-25，G-50处理湖北生物科技职业学院制备步骤：5、超滤除蛋白超滤液【超滤】10mmol/LTris-HClpH8.0缓冲液盐析物湖北生物科技职业学院制备步骤：6、脱盐和干燥超滤物胸腺素F5【脱盐】SephadexG-25至无Clˉ【干燥】真空干燥湖北生物科技职业学院制备注意事项低温0-4℃用于原发性和继发性免疫缺陷病（如反复上呼吸道感染等）、自发免疫病（如肝炎、肾病、红斑狼疮、类风湿性关节炎、重症肌无力等）、变态反应性疾病（如支气管哮喘等）、细胞免疫功能减退的中年老年疾病并可抗衰老以及肿瘤辅助治疗等方面。湖北生物科技职业学院扩展知识：胸腺素产品临床应用湖北生物科技职业学院小结：胸腺素F5生产工艺丙酮脱水分段盐析超滤除大分子凝胶过滤脱盐分段盐析技术提取生产胸腺素F5《生物制药工艺》湖北生物科技职业学院内分泌腺与激素湖北生物科技职业学院胸腺与胸腺激素

胸腺组织在新生儿及幼儿时期生长迅速为10～15克，到青春期仍然发育最大为25～40克，性成熟期以后则开始萎缩，逐渐变小，老人仅有10～15克。湖北生物科技职业学院胸腺与胸腺素

胸腺素（thymocin）是由胸腺上皮细胞分泌，是一类激素样物质，有胸腺生长素、胸腺生成素、胸腺因子等10多种，具有增强人的免疫功能，对人体防癌、抗感染及延缓衰老都有着重要的作用。最早于1966年Goldstein等人首先从小牛胸腺组织中提取到一种具有生物活性的物质，命名为胸腺素。目前，关于胸腺激素制剂进行了大量研究并取得了较好的成果，如表所示为常用胸腺素制剂。湖北生物科技职业学院胸腺素名称结构与化学性质备注胸腺素组分5一族酸性多肽，平均相对分子质量为1000~15000具有免疫活性猪胸腺素注射液多肽混合物，平均相对分子质量15000以下

胸腺素α1具有28个氨基酸残基的多肽，平均相对分子质量3108，pI为4.2

胸腺体液因子多肽，平均相对分子质量3200，pI为5.7（5.6-5.9），31个氨基酸残基组成，氨基酸顺序未知，对热稳定。诱导正常和去胸腺小鼠淋巴细胞生成和免疫重建血清胸腺因子9肽，N端被封闭，是焦谷氨酸，自然分离的最小的胸腺肽，平均相对分子质量857，pI为7.5，已确定氨基酸顺序并进行了合成合成的血清胸腺因子与天然的具有相同的生物学与化学性质，由胸腺上皮细胞产生。胸腺生成素具有49个氨基酸残基的多肽，平均相对分子质量5562，pI为5.7体外诱导骨髓细胞分为为成熟的T细胞，由胸腺上皮细胞合成和分泌。胸腺因子X多肽，平均相对分子质量4200

胸腺刺激激素多肽混合物

自身稳定胸腺激素糖肽，平均相对分子质量1800-2500最早期的产品是胸腺素组分5，又称为胸腺素F5，是由在80℃热稳定的40~50种多肽组成的混合物。分子量在1000~15000道尔顿，等电点pI3.5~9.5。对胸腺素混合物进行免疫活性测定，对有活性的称为胸腺素，如胸腺素α1；对无活性者则称为多肽，如多肽β1。目前已经研究清楚，胸腺素组分5中，胸腺素α1、α5、α7、β3和β4等是具有调节胸腺依赖性淋巴细胞分化和体外免疫反应的活性组分。湖北生物科技职业学院理化性质：胸腺素F5湖北生物科技职业学院原料来源：小牛或猪湖北生物科技职业学院制备方法：小牛胸腺素提取工艺路线上清液F2丙酮粉F3上清液F4超滤液胸腺素F5【加热去杂蛋白】80℃，15min，冷却1500×g离心【沉淀】丙酮-10℃【分段盐析】pH7.0磷酸盐缓冲液25%饱和硫酸铵50%饱和硫酸铵pH4.0【超滤】10mmol/LTris-HClpH8.0缓冲液【脱盐】SephadexG-25至无Clˉ【干燥】真空干燥胸腺碎块上清液上清液F1绞碎【捣碎、提取】生理盐水离心小牛胸腺盐析物湖北生物科技职业学院制备步骤：1、提取胸腺碎块上清液上清液F1绞碎【捣碎、提取】生理盐水离心小牛胸腺湖北生物科技职业学院制备步骤：2、加热去杂蛋白上清液F1上清液F2【加热去杂蛋白】80℃，15min，冷却1500×g离心湖北生物科技职业学院制备步骤：3、沉淀上清液F2丙酮粉F3【沉淀】丙酮-10℃湖北生物科技职业学院制备步骤：4、分段盐析丙酮粉F3上清液F4【分段盐析】pH7.0磷酸盐缓冲液25%饱和硫酸铵50%饱和硫酸铵pH4.0盐析物制备步骤：4、分段盐析注意事项湖北生物科技职业学院23331pH硫酸铵搅拌534冰浴脱盐盐析的成败决定于溶液的pH值与离子强度，溶液pH值越接近蛋白的等电点，蛋白质越容易沉淀。盐析一般用的硫酸铵，容易吸潮，因此在使用前，一般先磨碎，平铺放入烤箱内60摄氏度烘干后再称量，这样更准确。在加入盐时应该缓慢均匀，搅拌也要缓慢，越到后面速度应该更注意缓慢，如果出现一些未溶解的盐，应该等其完全溶解后再加盐，以免引起局部的盐浓度过高，导致蛋白质失活。盐析后最好搅拌40分钟到一个小时而且再在冰浴中放置一段时间。盐析后的蛋白质最好尽快脱盐处理，以免变性，透析较慢，一般可用超滤或者SephadexG-25，G-50处理湖北生物科技职业学院制备步骤：5、超滤除蛋白超滤液【超滤】10mmol/LTris-HClpH8.0缓冲液盐析物湖北生物科技职业学院制备步骤：6、脱盐和干燥超滤物胸腺素F5【脱盐】SephadexG-25至无Clˉ【干燥】真空干燥湖北生物科技职业学院制备注意事项低温0-4℃用于原发性和继发性免疫缺陷病（如反复上呼吸道感染等）、自发免疫病（如肝炎、肾病、红斑狼疮、类风湿性关节炎、重症肌无力等）、变态反应性疾病（如支气管哮喘等）、细胞免疫功能减退的中年老年疾病并可抗衰老以及肿瘤辅助治疗等方面。湖北生物科技职业学院扩展知识：胸腺素产品临床应用湖北生物科技职业学院小结：胸腺素F5生产工艺丙酮脱水分段盐析超滤除大分子凝胶过滤脱盐硅藻土吸附技术生产尿激酶《生物制药工艺》尿激酶（英文名称urokinase，药典编号：EC3.4.21.73）是由人血液中的尿激酶原在部分降解后从尿液中排出的一种丝氨酸蛋白酶。天然尿激酶由相对分子质量分别约为31.3K和21.6K的两条肽链通过二硫键连接而成。湖北生物科技职业学院理化性质：尿激酶（urokinase，UK）天然尿激酶结构别名：雅激酶、尿活素、人纤溶酶、人纤维蛋白溶酶尿激酶的pI为pH8~9。溶液状态不稳定，冻干状态可维持数年。尿激酶是一种碱性蛋白酶，主要存在于人及哺乳动物的尿中。人尿平均含量5-6IU/mL。湖北生物科技职业学院理化性质：尿激酶（urokinase，UK）湖北生物科技职业学院提取原理：硅藻土吸附法——粗提

硅藻土主要成分是二氧化硅，由硅藻的遗体沉积而成。具有孔隙度大、吸收性强、化学性质稳定、耐磨、耐热等特点。

硅藻土

硅藻土的分子筛结构湖北生物科技职业学院提取原理：QAE-Sephadex和CMC色谱分离——精提QAE-Sephadex交联葡聚糖凝胶羧甲基纤维素钠（CMC）阳离子交换树脂湖北生物科技职业学院提取要点：★尿液必须在10℃以下尽快处理。防止产生热源和破坏酶活性。★生产酶过程中pH不宜太低，防止酶的降解。★在低蛋白浓度、低离子强度、无稳定剂及环境温度较高时，均易引起酶的失活。★尿中含有的盐的浓度及其酸性、碱性和中性蛋白质，会影响尿激酶的吸附。湖北生物科技职业学院制备方法：第一步尿液收集和预处理传统的尿液收集方法用的塑料桶公厕改造后的尿液收集用的塑料桶湖北生物科技职业学院制备方法：第二步硅藻土吸附、洗脱硅藻土柱酸化尿吸附物[吸附]硅藻土5℃[洗涤]5℃，水洗脱液[洗脱]氨水+NaCl搅拌缸硅藻土柱湖北生物科技职业学院制备方法：第三步除热原、去色素流出液[去热原、色素]QAE-Sephadex柱饱和磷酸二氢钠，pH8.0收集洗脱液QAE葡聚糖凝胶操作流程湖北生物科技职业学院制备方法：第四步浓缩洗脱酸化液收集流出液[酸化]乙酸pH4.2[浓缩][洗涤]乙酸-乙酸钠CMC柱收集含尿激酶流出液[洗脱]氨水+NaClpH4.2多柱串联离子交换湖北生物科技职业学院制备方法：第五步透析除盐[透析、冻干]4℃，24h成品收集含尿激酶流出液尿激酶为酶类溶血栓药，可将纤溶酶原转化为纤溶酶。主要针对心脑血管重症患者，尿激酶可以激活患者体内纤溶酶原转为纤溶酶，从而水解纤维蛋白使新鲜形成的血栓溶解。临床多用于急性心肌梗塞、急性脑血栓形成和脑血管栓塞等患者的抢救治疗。湖北生物科技职业学院扩展知识：尿激酶产品临床应用湖北生物科技职业学院扩展知识：尿激酶产品临床应用尿激酶生产新工艺基因工程生产重组人尿激酶原盐解-离子交换法生产肝素《生物制药工艺》湖北生物科技职业学院导入：糖类药物——按结构不同糖类药物的分类单糖糖的衍生物多糖低聚糖葡萄糖、果糖、氨基葡萄糖、维生素C等蔗糖、麦芽糖、乳糖、乳果糖6-磷酸葡萄糖、1,6-二磷酸葡萄糖磷酸肌醇香菇多糖、肝素等湖北生物科技职业学院导入：多糖药物——按来源不同Text1Text3Text6植物动物微生物海藻活性多糖甘露醇肝素透明质酸硫酸软骨素黄芪多糖枸杞多糖香菇多糖灵芝多糖湖北生物科技职业学院导入：多糖药物——按来源不同Text6肝素有很强的抗凝血作用广泛用于外科手术；防凝血、抗血栓肝素（heparin）是一种含有硫酸基的酸性黏多糖，其分子具有由六糖或八糖重复单位组成的线形链状结构。三硫酸双糖是肝素的主要双糖单位，三硫酸双糖与二硫酸双糖以2:1的比例在分子中交替联结。湖北生物科技职业学院理化性质：肝素

肝素及其钠盐为白色或灰白色粉末，无臭无味；有吸湿性，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮、二氧六环等有机溶剂，其游离酸在乙醚中有一定溶解性。肝素分子结构单元中含有5个硫酸基和2个羧基，呈强酸性，为聚阴离子，能与阳离子反应生产盐。湖北生物科技职业学院理化性质：肝素湖北生物科技职业学院提取原理：提取法生产肝素肝素广泛分布于哺乳动物的肝、肺、心、脾、肾、胸腺、肠黏膜、肌肉和血液里，因此肝素可由猪肠黏膜进行提取，而取肠黏膜剩下的肠衣还可用于灌制香肠。湖北生物科技职业学院提取原理：提取法生产肝素

肝素在组织内和其他粘多糖一起与蛋白质结合成复合物，因此肝素制备过程包括粗制和精制两个阶段，即肝素蛋白质复合物的提取、解离和肝素的分离纯化两个步骤。其生产工艺主要有：

盐解-离子交换法；233盐解-季铵盐沉淀法；31酶解-离子交换法；1%NaCl,pH1.5714树脂湖北生物科技职业学院制备方法：盐解-离子交换法生产工艺流程图[吸附]滤液3mol/LNaCl,30~32℃,4~5d[洗脱]提取液pH9,53-55℃,2h,,30~32℃,4~5d洗脱液[沉淀][脱色]肝素钠精品[除杂质]乙醇乙醇[洗涤][提取]猪肠粘膜粗品肝素滤液[溶解]H2O2，pH1.51.4mol/LNaCl,30~32℃,4~5d树脂吸附物树脂吸附物湖北生物科技职业学院制备方法：第一步提取滤渣是经高温灭菌的优质蛋白饲料，直接冲洗后可喂养动物或晒干后配制饲料。提取液pH9,53-55℃,2h[提取]3%NaCl，30%NaOH猪肠粘膜滤液[趁热过滤][加热]95℃，维持10min湖北生物科技职业学院制备方法：第二步离子交换吸附、洗涤714强碱性Cl–型树脂714树脂[吸附]提取滤液[洗涤]1.4mol/LNaCl,搅拌、滤干树脂吸附物树脂吸附物不锈钢搅拌锅湖北生物科技职业学院制备方法：第三步洗脱、沉淀不锈钢搅拌锅3mol/LNaCl,搅拌、滤干[洗脱]洗脱液树脂吸附物乙醇[沉淀]肝素钠粗品丙酮[脱水]湖北生物科技职业学院制备方法：第四步精制1%NaClHClpH1.5[溶解][过滤]滤液肝素粗品NaOH，pH1130%H2O2，2d[脱色][过滤]滤液乙醇[沉淀]肝素钠精品丙酮[脱水]临床广泛用作各种外科手术前后防治血栓形成和栓塞，输血时预防血液凝固和作为保存新鲜血液的抗凝剂。湖北生物科技职业学院扩展知识：肝素钠产品临床应用酸解提取法生产L-胱氨酸《生物制药工艺》L-胱氨酸是由两个β-巯基-α-氨基丙酸组成的含硫氨基酸，含两个氨基、两个羧基、一个二硫键。CHCH2HOOCNH2SSCH2CHNH2COOH湖北生物科技职业学院理化性质：胱氨酸

别名：双巯丙氨酸；3，3’-二硫代二丙氨酸。L-胱氨酸形状呈六角形板状，为白色结晶或粉末，微溶于水，不溶于乙醇及其他有机溶剂，溶于无机酸和碱。L-胱氨酸促进细胞氧化还原功能，使肝脏功能旺盛，并能中和毒素、促进白细胞增生，阻止病原菌发育等作用。主要用于脱发症，并有维持蛋白质构型的作用。湖北生物科技职业学院理化性质：胱氨酸湖北生物科技职业学院提取原理：酸水解法L-胱氨酸广泛存在于人发、猪毛、羊毛、马毛、羽毛等动物角蛋白中，角蛋白在盐酸的作用下逐渐水解为小分子，水解液为各种氨基酸的混合物。根据它们的等电点不同将其分离、提纯，最终得到纯的L-胱氨酸。在等电点时，氨基酸溶解度最小，溶液的混浊度最大，可以结晶析出。胱氨酸的pI为5.02，可利用等电点时溶解度最小使其沉淀析出。CH-NH+COOHRCH-NH+CH-NHRRCOOCOO--332+OH+H+OH+H(pK)(pK)--++12--pH＜pIpH＝pIpH＞pI净电荷为正净电荷=0净电荷为负湖北生物科技职业学院提取原理：胱氨酸等电点沉淀酸水解碱中和初步提纯提纯湖北生物科技职业学院制备方法：酸解提取法生产L-胱氨酸生产工艺全过程干净人发水解液【水解】盐酸110℃，7h湖北生物科技职业学院制备方法：第一步盐酸水解人发酸解液中和液胱氨酸粗品Ⅰ浓缩过滤，减压pH5.5湖北生物科技职业学院制备方法：第二步碱中和沉淀胱氨酸粗品Ⅱ酸化液滤液胱氨酸结晶精制胱氨酸【过滤】盐酸，水离心甩干【酸化】盐酸70℃【吸附，脱色，过滤】活性炭85℃，30min【中和酸】水，氢氧化钠80℃，pH3.5~4.0【结晶】静置【过滤】【洗涤】蒸馏水至无Clˉ【干燥】真空干燥湖北生物科技职业学院制备方法：第三步精制成品酸化液滤液除酸液【酸化】盐酸，水65~70℃，30min【吸附，脱色，过滤】2%活性炭85~90℃，30min【中和酸】30%氢氧化钠pH4.8【结晶】静置胱氨酸粗品ⅠL-胱氨酸具有增强造血机能、升高白细胞、促进皮肤损伤的修复及抗辐射作用。临床上用于治疗辐射损伤、重金属中毒、慢性肝炎、牛皮癣及病后或产后继发性脱发。湖北生物科技职业学院扩展知识：胱氨酸产品临床应用湖北生物科技职业学院课后思考：请总结一下氨基酸类药物的常用生产方法