微生物实验室实验前玻璃仪器的处理

实验前玻璃仪器的预先处理

一、实验目的要求

1、进一步加强学习、掌握玻璃器具等器材的清洗、烘干、包扎的包扎技术。

2、为下一次的课做好器材的准备工作。

二、原理

为确保实验顺利地进行，要求把实验所用的玻璃器皿清洗干净。为保持灭菌

后和无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。这

些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不安操作规定去做，则会影响实验结

果，甚至会导致试验的失败。

灭菌原理：高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，

通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气

从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了

灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于10DC的温度。导致菌体蛋白质凝

固变性而达到灭菌的目的。适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具。

一般培养基在121.3℃灭菌20分钟即可。干热灭菌是利用高温使微生物细胞内

的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有

关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水

量越小，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高

（160-170℃）,时间长（1-2小时）o但干热灭菌温度不能超过180℃,否则，

包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧，因而一般塑料制品不能用干热灭菌。

三、试剂和仪器

（一）仪器

高压蒸汽灭菌锅、电热烘箱、试管、三角瓶、培养皿和吸管、棉线、纱布、

棉花、牛皮纸、报纸、硅胶塞等

四、实验内容

（一）玻璃器皿的清洗：

新购的玻璃器皿的洗涤

将器皿放入2%盐酸溶液中浸泡数小时，以除去游离的碱性物质，最后用流

水冲净。

对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器

使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上

晾干，即可使用。

常用旧玻璃器皿的洗涤

确实无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用前后，可按常规用洗衣粉水进行刷

洗；

吸取过化学试剂的吸管，先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。

带菌玻璃器皿的洗涤

凡实验室用过的菌种以及带有活菌的各种玻璃器皿，必须经过高温灭菌或消毒后

才能进行刷洗：

1、带菌培养皿、试管、三角瓶等物品，做完实验后放入消毒桶内，用0.IMPa

灭菌20〜30min后再刷洗。含菌培养皿的灭菌，底盖要分开放入不同的桶中，

再进行高床灭菌c

2、带菌的吸管、滴管，使用后不得放在桌子上，立即分别放入盛有3〜5先及苏

尔或5%石炭酸或0.25%新洁尔灭溶液的玻璃缸（筒）内消毒24h后，再经0.IMPa

灭菌20min后，取出冲洗。

3、带菌载玻片及盖玻片，使用后不得放在桌子上，立即分别放入盛有3〜5%来

苏尔或5%石炭酸或0.25%新洁尔灭溶液的玻璃缸（筒）内消毒24h后，用夹子取

出经清水冲干净。

如用于细菌染色的载玻片，要放入50g/L肥皂水中煮沸lOmin,然后用肥皂水

洗，再用清水洗干净。

最后将载玻片浸入95%泗精中片刻，取出用软布擦干，或晾干,

保存备用。

若用皂液不能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。

4、含油脂带菌器材的清洗

单独高压灭菌：用0.IMPa灭菌20〜30minf趁热倒去污物-＞倒放在铺有吸

水纸的篮子上一用100℃烘烤0.5h-＞用5%的碳酸氢钠水煮两次一再用肥皂水刷

洗干净。

（二）、玻璃器材的晾干或烘干

不急用的玻璃器材：可放在实验室中自然晾干：

急用的玻璃器材：把器材放在托盘中（大件的器材可直接放入烘箱中），

再放入烘箱内，用80〜120c烘干，当温度下降到60℃以下再打开取出器材使用。

（三）器皿的包扎：

要灭菌后的器皿仍保持无菌状态.需在灭菌前进行包扎c

（1）培养皿：洗净的培养皿烘干后每10套（或根据需要而定）叠在一起，用牢

固的纸卷成一筒，或装入特制的铁桶中，然后进行灭菌。

（2）吸管：洗净、烘干后的吸管，在吸口的一头塞入少许脱脂棉花，以防在

使用时造成污染。塞入的棉花量要适宜，多余的棉花可用酒精灯火焰烧掉。每支

吸管用一条宽约435CIT.的纸条，以3（T5（TC的角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在

头部，另一端用剩余的纸条打成一结，以防散开，标上容量，若干支吸管包扎成

一束进行灭菌。使用时，从吸管中间拧断纸条，油出试管。

（3）试管和三角瓶：试管和三角瓶都需要做合适的棉塞，棉塞可起过滤作用，

避免空气中的微生物进入容器。制作棉塞时，要求棉花紧贴玻璃壁，没有皱纹和

缝隙，松紧适宜。过紧易挤破管口和不易塞入；过松易掉落和污染。棉塞的长度不

小于管口直径的2倍，约2/3塞进管口。

目前，国内己开始采用塑料试管塞，可根据所用的试管的规格和试验要求

来选择和采用合适的塑料试管塞。

若干支试管用绳扎在一起，在棉花部分外包裹油纸或牛皮纸，再用绳扎紧。

三角瓶加棉塞后单个用油纸包扎。

（四）、玻璃器材的灭菌

灭菌：干热灭菌：160〜165℃烘箱中灭菌2h；或湿热灭菌：121℃20〜30min

干热灭菌法

1、将包扎好的玻璃器皿摆入电热烘箱中，相互间要留有一定的空隙，以便空气

流通。

2、关紧箱门，打开排气孔，接上电源。

3、待箱内空气排出到一定程度时，关闭上排气孔，加热至灭菌温度后，固定温

度进行灭菌：160℃—165℃保持2小时。2小时后切断电源。

4、待烘箱内温度自然降温冷却到60℃以下后，再开门取出玻璃器皿，避免由于

温度突然下降而引起玻璃器皿碎裂。

高压蒸汽灭菌法

1、关好排水阀门，放入纯净水或蒸偏水至标度。注意水量一定要加足，否则容

易造成事故。

2、将须要灭菌的器材、培养基等装入灭菌锅中，加盖密封。旋紧螺旋时，先将

每个螺旋旋转到一定程度（不要太紧），然后再旋紧相对的两个螺旋，以达到平

衡旋紧，否则易造成漏气，达不到彻底灭菌的目的。

3、通电加温，打开排气活门，排尽锅内的空气。通常当压力表指针升至5磅

或0.05MPa时，打开排气活门放气，待压力表指针降至零点一小段时间后，再关

闭活门。即活门冲出的全部是蒸汽时则表示彻底，此时可关闭排气活门，如果过

早关闭活门，排气不彻底，也达不到彻底灭菌的目的。

4、恒温灭菌：0.IMPa或15磅压力保持20〜30分钟。压力表的指针上升时，锅

内温度也逐渐升高，当压力表指针升至0.IMPa时或15磅时，锅内温度相当于

120℃-121℃（等于一个大气压），此时开始计算灭菌时间，控制热源，使处于

0.IMPa或15磅压力保持20〜30分钟，即能达到完全灭菌的目的，然后停止加

温。当达到所需温度时开始计时，并在此温度下保持所需的时间。

5、降温：自然降温或打开活门排汽降温。稍微打开一点排气活门，使锅内蒸汽

缓慢排除，然后逐渐开大活门，气压徐徐下降，注意勿使排气过快，否则会使锅

内的培养基沸腾而冲脱或沾染棉花塞，但排气太慢乂使培养基在锅内，受高温处

理时间过长，对培养基也是不利的。一般从排气到打开锅盖以10分钟左右为好。

6、当锅内蒸汽完全排尽时即压力表指针降到零时，要立即打开锅盖。

7、取出灭菌物品：当锅内温度下降到60℃