微生物学检验葡萄球菌属

球菌种类:革兰阳性葡萄球菌属、链球菌属（链球菌、肺炎链球菌）、肠球菌属、微球菌属等革兰阴性奈瑟菌属、布兰汉菌属四种革兰阳性菌的比较葡萄球菌属微球属链球菌属气球菌属排列方式葡萄串状、四联或成对链状成双或四联触酶试验++-弱+氧化/发酵发酵氧化发酵发酵厌氧生长+不生长+弱葡萄球菌属最常见的化脓性球菌医务人员的葡萄球菌带菌率高革兰阳性、葡萄串状排列产生不同的脂溶性色素触酶试验阳性发酵葡萄糖金黄色葡萄球菌是主要致病菌形态染色革兰阳性球菌、葡萄串状排列无鞭毛、无芽孢、一般不形成荚膜葡萄球菌革兰染色镜下图染色性：形态：排列：常用培养基及菌落特征血平板（营养培养基）：中等大小、光滑型菌落、脂溶性色素色素、透明溶血环（致病葡萄球菌）高盐甘露醇平板（选择鉴别培养基）：淡橙黄色菌落（致病葡萄球菌）卵黄高盐琼脂平板（选择鉴别培养基）：菌落周围形成白色沉淀圈（致病葡萄球菌）生化反应触酶试验：+葡萄糖氧化发酵试验：发酵+甘露醇分解试验：+（致病菌株）抗原构造★葡萄球菌A蛋白（SPA）存在于金黄色葡萄球菌细胞壁可与人和其它哺乳动物IgGFc段非特异性结合，应用于协同凝集试验抵抗吞噬细胞的吞噬★多糖抗原具有型的特异性,有助于金葡菌感染的诊断分类和分型葡萄球菌包括32种及亚种根据产生色素的不同分类根据产生凝固酶与否进行分类按噬菌体分型法分类葡萄球菌传统分类金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌产生溶血毒素+－－产生凝固酶+－－产生耐热DNA酶+－－产生SPA+－－新生霉素敏感性SSR致病性强弱无金葡菌噬菌体分型分型：分五个群，共22型意义：追踪传染源抵抗力是抵抗力最强的无芽孢细菌耐干燥对龙胆紫敏感易形成耐药性：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）已成为医院感染最常见的致病菌致病物质凝固酶葡萄球菌溶素杀白细胞素肠毒素剥脱毒素毒性休克综合征毒素－1凝固酶游离凝固酶：采用试管法检测结合凝固酶：采用玻片法检测金葡菌凝固酶试验均为阳性凝固酶试验是鉴定金葡菌的重要标志游离凝固酶协同因子凝血酶纤维蛋白原纤维蛋白血浆凝固结合凝固酶（位于菌体表面）纤维蛋白原纤维蛋白细菌凝集所致疾病侵袭性疾病化脓性感染：疖、痈、甲沟炎、中耳炎、脑膜炎、败血症等毒素性疾病：食物中毒、假膜性肠炎等免疫性有一定天然免疫力病后获得的免疫力作用不强、不持久微生物学检验细菌鉴定的基本程序标本直接涂片革兰染色镜检分离培养取可疑菌落鉴定试验和药敏试验结果报告标本采集根据病种不同，采集不同标本脓液、创伤分泌液、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便检验程序脓、穿刺液、尿液、痰脑脊液血液粪便、呕吐物增菌培养分离培养分离培养分离培养直接涂片染色鉴定试验和药敏试验菌落涂片染色血浆凝固酶耐热核酸酶药敏试验其它试验报告金葡菌脓标本检验程序脓标本分离培养(血平板)直接涂片染色鉴定试验和药敏试验报告血浆凝固酶耐热核酸酶药敏试验其它试验涂片染色检验方法—直接镜检方法:取标本直接涂片,革兰染色后镜检初步报告:“查见革兰阳性葡萄串状排列球菌，疑似葡萄球菌”“查见革兰阳性球菌”检验方法—分离培养脓、痰、脑脊液标本－→接种血平板菌落特征：光滑型、中等大小、脂溶性色素、透明溶血环（β-溶血环）检验方法—分离培养粪便标本－→高盐甘露醇平板菌落特征：光滑型、中等大小、淡黄色菌落检验方法—分离培养血标本－→增菌（葡萄糖肉汤）－→分离培养（血平板）生长现象：混浊、胶胨状凝固、溶血金葡菌的鉴定依据血平板上金黄色色素、β-溶血环血浆凝固酶+发酵甘露醇+耐热核酸酶+凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）条件致病菌医院内感染的重要病原菌对多种抗生素耐药耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）是院内感染的重要病原菌之一，MRSA、MRCNS对多种抗生素耐药，MRSA不仅对青霉素类、头孢菌素类等β－内酰胺类抗菌药物耐药，同时也对四环素、红霉素、氯霉素、克林霉素及庆大霉素等常用抗菌药物耐药，对利褔平和磺胺的耐药率也达30％，但通常对万古霉素敏感。MRSA、MRCNS常常引起院内感染与播散，且难于治疗和控制，病死率高。有资料表明两者的耐药谱及机理都有许多相似的地方，其传播方式是患者――医护人员――患者之间的传播，特别是医护人员手的传播，这些带菌者是有可能成为传染源，推测病房医护人员MRSA,MRCNS带菌可能是由于长期工作在病房，接触患者较多所致。鉴定试验：血浆凝固酶试验玻片法：检测结合型血浆凝固酶，简便快速试管法：检测游离型血浆凝固酶，灵敏生理盐水待检细菌新鲜兔血浆协同凝集试验金葡菌SPASPA细胞膜细胞质细胞壁链球菌属分布：自然界、人和动物肠道、健康人鼻咽部所致疾病：致病链球菌引起各种化脓性炎症、猩红热、风湿热等疾病。生物学性状形态染色培养特点生化反应抗原构造分类抵抗力形态染色革兰阳性球菌，链状排列，无鞭毛，无芽孢，可形成荚膜

在液体培养基中易形成长链致病性强的菌株多为长链在脓汁标本中多为短链链球菌电镜图链球菌革兰染色培养特点－－生长条件营养要求高，在含血液、血清培养基上生长良好需氧、兼性厌氧D群链球菌可在10℃、45℃生长培养特点－－生长现象液体培养基：呈沉淀生长现象血平板：灰白色、细小、圆形、光滑的、有不同溶血现象的菌落分类菌落特征甲型（α）溶血性链球菌灰色、针尖状菌落、周围有草绿色溶血环（α溶血）乙型（β）溶血性链球菌灰白色、细小菌落、周围有宽大透明溶血环（β溶血）丙型（γ）链球菌灰白色小菌落、无溶血环链球菌在血平板上菌落特征甲链乙链丙链分类－－根据溶血现象分类甲型链球菌：属条件致病菌乙型溶血性链球菌：致病力强丙型链球菌：无致病力分类－－根据抗原构造分类群特异性抗原（C抗原）：细胞壁多糖抗原，可将链球菌分为20群（A、B、C、D、E、D、E等），引起人类感染的链球菌90％为A群。

型特异性抗原（表面抗原）：细胞壁蛋白抗原，有M、T、R、S四种，根据M抗原不同，可将A群分为100型。生化反应触酶试验（－）A群链球菌：杆菌肽敏感试验（+）B群链球菌：CAMP试验（+）、马尿酸钠水解试验（+）D群链球菌：胆汁七叶苷试验（+）肺炎链球菌生物学特性形态染色：革兰阳性球菌，矛尖状，成双排列，在人和动物体内形成荚膜血平板上菌落特征：菌落细小、周围有草绿色溶血环，48小时后，由于菌落自溶，呈现“脐窝状”生化反应：Optochin敏感试验（+）胆汁溶菌试验（+）菊糖分解试验（+）动物试验：小白鼠毒力试验（+）临床意义－－A群链球菌致病物质:致热外毒素：致热、细胞毒作用、使皮肤产生红疹、抗原性强溶血素：溶解红细胞、破坏血小板和白细胞，分为溶血素O和溶血素S两种侵袭性酶：透明质酸酶、链激酶、链道酶，有利于细菌在体内扩散M蛋白：具有抗吞噬作用；与肾小球基底膜有共同抗原成分，与超敏反应有关链球菌溶素O对氧敏感、抗原性强，刺激机体产生抗O抗体，抗O试验可用于风湿热等链球菌感染所致超敏反应性疾病的辅助诊断临床意义－－A群链球菌所致疾病化脓性感染：扁桃体炎、丹毒、蜂窝织炎、淋巴管炎、败血症等猩红热风湿热、链球菌感染后肾小球肾炎临床意义－－其他链球菌B群链球菌：条件致病菌，是新生儿败血症和脑膜炎主要致病菌肺炎链球菌：引起大叶性肺炎等疾病甲型链球菌：条件致病菌，在一定条件下引起亚急性细菌性心内膜炎。变异链球菌：与龋齿有密切关系链球菌常规检验标本采集根据临床标本不同采集不同标本细菌鉴定的基本程序标本直接涂片革兰染色镜检分离培养取可疑菌落鉴定试验和药敏试验结果报告脓、痰、咽拭脑脊液血液增菌培养分离培养直接涂片染色观察菌落及溶血现象触酶试验（－）Optochin敏感试验肺炎链球菌草绿色链球菌杆菌肽胆汁七叶苷A群链球菌D群链球菌肠球菌6.5％NaCl血清学分类检验方法—直接镜检方法:取标本直接涂片,革兰染色后镜检初步报告:“查见革兰阳性球菌”“查见革兰阳性矛尖状双球菌，有荚膜，疑似肺炎链球菌”荚膜肿胀试验可确诊，“找到肺炎链球菌”检验方法—分离培养脓、痰、脑脊液标本－→接种血平板，进行分离培养菌落特征：

甲型链球菌：针尖样菌落、周围有草绿色溶血环；

乙型链球菌：灰白色小菌落、周围有透明溶血环；

丙型链球菌：灰白色菌落、无溶血环肺炎链球菌：灰白色扁瓶小菌落、周围有草绿色溶血环，培养较久形成脐窝样菌落检验方法—增菌培养增菌培养基：葡萄糖肉汤、硫酸镁肉汤血液与培养基比例：1：10，即5ml标本，50ml增菌液。拮抗剂：硫酸镁（拮抗多种抗生素）、对氨基苯甲酸（拮抗磺胺）等培养时间：常规培养：18～24小时至1周；亚急性细菌性心内膜炎：观察7天至1月链球菌鉴定细菌形态及染色性菌落特征鉴定试验杆菌肽敏感试验CAMP试验胆汁七叶苷试验Optochin敏感试验血清学分群快速胶乳凝集试验肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴别菌名形态菌落胆汁溶菌Optochin菊糖分解小白鼠毒力肺链矛尖状、成双排列、有荚膜脐窝状、草绿色溶血环+++/－+甲链圆形、短链、无荚膜针尖状、草绿色溶血环－－－－乙型溶血性链球菌的鉴定β-溶血环包括A、B、C、D、F、G群C群可采用血清学鉴定其它群采用生化反应或其他鉴定试验非β-溶血性链球菌鉴定包括肺炎链球菌牛链球菌无乳链球菌草绿色链球菌营养变异链球菌草绿色链球菌鉴定α溶血或不溶血，胆汁七叶苷阴性，包括变异链球菌群唾液链球菌群血液链球菌群咽峡炎链球菌群鉴定依据A群链球菌－－杆菌肽敏感试验（+）B群链球菌－－CAMP试验（+）、马尿酸钠水解试验（+）D群链球菌－－胆汁七叶苷（+）、6.5％氯化钠生长（－）肺炎链球菌－－Optochin敏感试验（+）、胆汁溶菌试验（+）、形态和菌落特征典型甲型链