CNAL C 2002.04B3－2005蛋白质一细胞色素C的氨基酸组成分析一邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法_第1页
CNAL C 2002.04B3－2005蛋白质一细胞色素C的氨基酸组成分析一邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法_第2页
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编号：CNALCProtein—AminoacidcompositiondeterminationofcytochromeReversed-phasehighperformanceliquidchromatographywitho-phthaldialdelhydepre-columnderivatization中国实验室国家认可委员会公布 检测/校准标准和方法对于检测/校准活动的有效性具有至关重要ISO/IEC17025CNALCNAL经CNAL审查通过且纳入CNAL凡意愿将其非标准方法纳入CNAL检测方法目录的机构，均可向CNAL提出确认申请，经CNALCNALCCNALC2002.04B3-蛋白质—细胞色素CProtein—AminoacidcompositiondeterminationofcytochromeReversed-phasehighperformanceliquidchromatographywitho-phthaldialdelhydepre-columnderivatization本方法适用于蛋白质纯度（质量百分数）95%的样品分析。OPA在还原剂（如-巯基乙醇）的存在下能和一级胺在pH9-10范围内进行反应，形成发MCE质量百分数大于95%的蛋白质/多肽的溶液或冰冻干燥粉末。色谱柱：反相柱C-18LC-4A型HPLC，pHS-50mmol·L-1pH6.04.1g流动相A（50mmol·L-1pH6.0醋酸钠缓冲液:甲醇:=79:20:1）790mL醋酸钠缓冲液、200甲醇、10mL流动相B（50mmol·L-1pH6.0醋酸钠缓冲液:=20:80）200mL醋酸钠缓冲液、800mL甲醇混匀即得。0.4mol·L-1硼酸缓冲液(pH9.5)50mL，置于棕色瓶，4oC2-3天补20L–巯基乙醇，每两周重配一次。4oC0.1mol·L-124h6mol·L-115mL2-3滴，充氮气保护，然后将安瓿熔110oC24h50mLHPLC10μL（50~100pmol）10μLpH9.5的硼酸缓冲液，10μLOPA1min20μL0.1mol·L-1KH2PO4终止20μLRP-HPLC柱进行分析。梯度洗脱条件：5分钟，10%B；10分钟，15%B；20分钟，10%B；25分钟，15%B；35分钟，50%B；50分钟；90%B；55分钟，100%B。1.0mL·min5010μL100pmol20pmol100pmol氨基酸标准品混合物校正氨基酸分析仪。氨基酸标准品分离后，每个峰的面积100pmol。100pol

×100=X如果被分析的蛋白质的分子量未知，只可以确定被分析的样品的mol 被

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