CNAL C 2002.05B1-2005蛋白质一重组人肿瘤坏死因子的N末端序列分析一自动Edman降解法_第1页
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编号：CNALC2002.05B1-EdmanProtein—N-terminalaminoacidsequencedeterminationofrecombinanthumantumornecrosisfactor—AutomaticEdmandegration中国实验室国家认可委员会公布 检测/校准标准和方法对于检测/校准活动的有效性具有至关重要ISO/IEC17025CNALCNAL经CNAL审查通过且纳入CNAL凡意愿将其非标准方法纳入CNAL检测方法目录的机构，均可向CNAL提出确认申请，经CNALCNALCCNALC2002.05B1-N末端序列分析—自动EdmanProtein—N-terminalaminoacidsequencedeterminationofrecombinanthumantumornecrosisfactor—AutomaticEdmandegration本方法应用自动EdmanN-末端序列分析。97%的重组人肿瘤坏死因子N碱性条件下Edman试剂PITC与蛋白质50~6097%的蛋白质/多肽的冷冻干燥粉末、溶液，或PVDF试剂：R1：5％PITCR2：三甲基胺(TMA)水溶液；也可选N—甲基哌啶水／甲醇溶液，R5：PTH50L25pmol，S1：n—正庚烷，标准蛋白：β美国AB491N0.5mg1.0ml在filter30ulBiobrenePlus5µL待测样本，加载在filter此后衍生化的蛋白质即PTC输送几微升无水TFA(R3)PTH氨基酸溶解于一种合适的溶剂混合物(S4)(如20％乙腈水溶液含或不含乙酸钠添加剂pH)HPLCHPLC上柱。运行PTH-将每个循环切割下来的氨基酸于PTH-氨基酸进行比较，并与前后循环的氨基酸进行比较，确定N-末端氨基酸序列。氨基 允许天冬氨 不允谷氨 不允丝氨 允许间组氨 不允甘氨 不允苏氨 不允丙氨 不允精氨 不允酪氨 不允缬氨 不允蛋氨 不允苯丙氨 不允异亮氨 不允亮氨

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