编制说明-《凉茶中止咳平喘类非法添加物的测定 液相色谱-串联质谱法》

一、工作简况

（一）任务来源

广东产品质量监督检验研究院承担了广州开发区检验检测联盟标准工作委

员会下达的2020年第一批团体标准项目《凉茶中止咳平喘类非法添加物的测定

液相色谱-串联质谱法》的牵头起草工作，计划完成时间为2021年12月。。

（二）项目主要工作过程

1.资料收集：前期调研工作，包括文献资料的查阅，国内外相关标准情况的

进一步了解，确定实验方案。根据任务下达的通知，迅速收集相关材料，查阅研

读我国现行有关止咳平喘类非法添加物的检测方法标准以及科技文献资料。目前，

国家对自制出售的散装凉茶尚未有制定相关标准，也没有针对凉茶中非法添加药

物的“潜规则”建立完善的检测方法，以至于监管部门对凉茶中某些非法添加物

的监管缺乏技术支撑。经研究讨论，编制小组选择建立一种简便、灵敏、快捷的

同时检测凉茶中吗啡等22种止咳平喘类非法添加物检测方法。

2.方法优化：收集样品，根据样品特点以及拟检测的非法添加物的性质特点，

结合定性定量要求，选择采用液相色谱-串联质谱法进行检测，具体方法优化包

括样品前处理方法优化；液相色谱条件优化；质谱技术参数条件的优化。使建立

的检测方法的各项技术参数满足凉茶样品日常监管需要。

3.征求意见和形成专业组预审讨论稿

4.形成标准报批稿

二、标准编制原则和确定主要内容的依据及解决的主要问题

（一）编写主要原则

本标准是按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的

结构和起草规则》要求编写。

本标准的重复性和再现性按GB/T6379.1-2004《测量方法与结果的准确度

（正确度与精密度）第1部分：总则与定义》和GB/T6379.2-2004《测量方法与

结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法的重复性和再现

性的基本方法》进行确定。

（二）标准主要内容

1

标准主要内容包括：标准适用范围及规范性引用文件、检测原理、试剂和材

料说明、标准曲线配制、仪器设备参数条件、前处理步骤、液相色谱-串联质谱

定性及定量方法、空白试验要求、结果计算、化合物特征离子色谱图以及方法检

出限、定量限、准确度和精密度。

三、主要试验情况分析

收集样品，采用液相色谱-质谱/质谱法进行检测，主要进行仪器条件优化等

工作。具体包括：

1.仪器条件的优化

方法采用色谱分析实验室常用的ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱

（100mm×2.1mm，1.7μm），流动相采用含有0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水溶液

作为流动相，有利于提高吗啡等22种止咳平喘类非法添加物的质谱响应。通过

改变水相和有机相的比例，优化了化合物的梯度洗脱程序，使化合物有合适的峰

形、峰宽和保留时间，且避免杂质干扰。较低的流速有利于化合物的质谱响应。

采用ESI正离子离子化模式，通过比较优选了化合物的鞘气、辅助气、吹扫

气气体流量，气化温度和传输管温度，毛细管电压参数。采用MRM监测模式，

通过优化获得化合物的离子对、聚焦电压和碰撞能参数。

优化后的化合物参考仪器条件如下：

色谱条件：色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱（100mm×2.1mm，

1.7μm）；流动相：A：0.1%甲酸乙腈（4.2.2）；B：0.1%甲酸水溶液（4.2.3），梯

度洗脱，流动相梯度洗脱程序：见表1；流速：0.3 mL/min；柱温：室温；进样

量：10μL。

表1梯度洗脱条件

时间（min）流速（mL/min）流动相A/%流动相B/%

0.000.3002080

5.000.3004060

9.000.3008020

10.000.3008020

11.000.3002080

12.000.3002080

2

质谱参考条件

a）离子源：电喷雾离子源（ESI）；

b)扫描模式：正离子模式；

c)检测方式：多反应监测（MRM）；

d)毛细管电压：3.50kV；

e)离子源温度：150℃；

f)脱溶剂气温度：500℃；

g)脱溶剂气流量：800L/hr；

h)碰撞气体：氦气；

质谱参考条件见表2。

表2质谱参考条件

化合物母离子（m/z）子离子（m/z）锥孔电压（V）碰撞能量（eV）

吗啡286.2165.0*/181.04436/38

可待因300.2165.0*/215.04638/26

蒂巴因312.257.9*/251.02212/26

罂粟碱340.3202.1*/324.34226/27

那可丁414.1220.0*/353.13622/22

羟乙茶碱225.1180.9*/123.92518/25

特布他林226.0152.0*/125.03016/24

沙丁胺醇240.0147.9*/222.22618/11

克伦特罗277.0202.9*/259.11916/10

盐酸二氧丙嗪317.185.9*/271.93020/20

盐酸班布特罗368.2294.0*/71.92518/30

溴己新377.0114.0*/263.72318/27

阿奇霉素749.6116.0*/591.14045/28

罗红霉素837.8158.1*/679.63032/20

对乙酰氨基酚152.193.0*/64.93621/31

乙酰半胱氨酸164.0121.8*/75.8139/20

阿司匹林181.1123.8*/95.83018/22

3

氯丙那林214.1153.8*/195.91817/12

二羟丙茶碱255.1180.9*/123.92520/30

右美沙芬272.2215.0*/146.93523/27

苯并哌林310.3126.0*/83.93523/30

沙美特罗416.3232.1*/380.22522/25

带“*”为定量离子。

2．标准曲线配制及线性范围

标准储备溶液1配制（200mg/L）：精密称取适量的羟乙茶碱、特布他林、

沙丁胺醇、克伦特罗、盐酸二氧丙嗪、盐酸班布特罗、溴己新、阿奇霉素、罗红

霉素、对乙酰氨基酚、乙酰半胱氨酸、阿司匹林、氯丙那林、二羟丙茶碱、右美

沙芬、苯并哌林、沙美特罗标准物质分别置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解，摇

匀，配成浓度均为200mg/L的标准储备溶液，避光在2℃~4℃条件下贮存。

标准储备溶液2：吗啡，浓度50mg/L，纯度≥99%；可待因，浓度50mg/L，

纯度≥99%；蒂巴因，浓度10mg/L，纯度≥99%；罂粟碱，浓度10mg/L，纯度≥99%；

那可丁，浓度10mg/L，纯度≥99%。

22种止咳平喘类非法添加物混合标准工作溶液：吸取适量的标准储备溶液1

及标准储备溶液2，根据实际需要用10%甲醇水配制成不同浓度（ng/mL）的混

合标准工作溶液，在2℃~4℃条件下贮存。

将处理好的的标准工作液分别进样测定，以浓度为横坐标，以总峰面积为纵

坐标，线性回归结果见表3

表322种止咳平喘类非法添加物的线性方程、仪器检出限及定量限

仪器定量

线性回归方程线性范围相关系数仪器检出限\

化合物限

Totalarea=a*Conc.+bng/mLr2ng/mL

ng/mL

吗啡Y=110.454X+1198.5615~6000.9903515

可待因Y=420.558X+2727.1515~6000.993113

蒂巴因Y=1252.43X+334.7163~1200.990526

罂粟碱Y=4903.76X+1859.413~1200.995413

那可丁Y=5513.44X+4358.643~1200.991413

4

羟乙茶碱Y=831.379X+222.1211.5~600.994913

特布他林Y=1488.26X+1480815~6000.99511030

沙丁胺醇Y=1945.08X+1953.8515~6000.99211030

克伦特罗Y=4529.29X+614.2921.5~600.994913

盐酸二氧丙嗪Y=9849.07X+572.9611.5~600.998313

盐酸班布特罗Y=6539.52X-208.2160.3~120.99800.20.6

溴己新Y=6453.57X-473.2430.3~120.99960.20.6

阿奇霉素Y=358.389-107.3891.5~600.993913

罗红霉素Y=1386.84-385.1071.5~600.998013

对乙酰氨基酚Y=64.6379X+174.51830~12000.99292060

乙酰半胱氨酸Y=175.169X-402.8915~6000.99611030

阿司匹林Y=113.236X-300.733~1200.991026

氯丙那林Y=4880.74+325.0481.5~600.996713

二羟丙茶碱Y=484.943X+445.2936~2400.9969412

右美沙芬Y=4022.9X-200.0610.3~120.99630.20.6

苯并哌林Y=8554.15X+91.00651.5~600.999613

沙美特罗Y=999.358X-822.2211.5~600.994513

3.前处理优化

对于液体凉茶，称取1.0g液体凉茶试样（精确至0.01g）于50mL容量瓶

中，用10%甲醇水（含0.1%甲酸）定容至刻度线，摇匀后超声提取或振摇涡旋

5分钟，8000转/分钟离心3分钟，过有机滤膜后，待测。

对于所述样品，简单稀释（或提取）后，不需要其他前处理就能取得良好的

测试结果，有效简化实验操作。

4.方法回收率、精密度、检出限、定量限

阴性凉茶样品中加入标准溶液，根据不同化合物的定量限，添加低、中、高

三个水平浓度，按试样处理方法处理后进行测定，结果见表4。从表中可看出，

不同浓度平均加标回收率60~120%，相对标准偏差为1.67~13.94%（n=6）。

表4样品加标回收率测定结果

添加测定值(mg/kg)回收检出定量

平均值RSD

化合物浓度率限限

123456(mg/kg)(%)

(mg/kg)(%)mg/kgmg/kg

5

1.51.371.351.121.511.241.331.3288.09.94

吗啡32.832.973.273.1932.923.03101.05.520.250.75

1512.9913.4514.3314.1713.321413.7191.43.88

1.51.101.171.261.071.101.141.1476.06.00

可待因32.472.662.732.332.552.502.5484.75.600.050.15

1511.9913.0612.7913.0713.1213.1312.8685.73.45

0.30.210.190.170.190.170.210.1963.39.42

蒂巴因0.60.420.390.440.510.420.470.4473.39.690.10.3

33.303.092.993.413.223.113.19106.34.81

13.9

0.3

0.220.280.240.200.220.280.2480.04

罂粟碱0.050.15

0.60.500.570.530.550.510.640.5591.79.27

33.203.002.873.443.173.283.16105.36.40

0.30.250.250.290.290.310.290.2893.38.75

那可丁0.60.550.520.630.580.620.640.5998.38.160.050.15

33.163.203.033.443.573.103.25108.36.45

0.150.120.150.130.130.140.120.1386.78.99

羟乙茶碱0.30.230.230.270.260.280.290.2686.79.730.050.15

1.51.601.711.811.551.781.571.67111.36.70

1.50.940.930.930.900.940.940.9362.01.67

特布他林32.593.152.882.942.682.502.7993.08.730.51.5

1512.5512.7213.6813.1112.0712.1912.7284.84.72

1.51.601.551.791.701.581.501.62108.06.57

沙丁胺醇33.113.713.403.433.433.503.43114.35.630.51.5

1513.0014.0013.5813.7713.0513.0013.4089.33.29

0.150.110.100.120.120.120.10.1173.38.94

克伦特罗0.300.200.240.250.250.270.230.2480.09.860.050.15

1.501.201.201.151.361.191.101.2080.07.28

0.150.170.180.180.190.150.150.17113.39.84

盐酸二氧

0.300.320.370.370.370.330.340.35116.76.520.050.15

丙嗪

1.501.411.621.551.551.711.701.59106.07.06

盐酸班布0.0300.0260.0310.0300.0310.0290.0290.02996.76.42

0.0600.0670.0670.0700.0620.0620.0680.066110.04.980.010.03

特罗

0.30.300.290.330.320.310.370.32106.78.84

0.0300.0300.0330.0310.0320.0360.0360.033110.07.67

溴己新0.0600.0600.0610.0610.0670.0630.0660.063105.04.600.010.03

0.300.320.320.310.310.300.300.31103.32.89

0.150.170.150.150.190.160.170.17113.38.92

阿奇霉素0.300.330.320.390.360.350.350.35116.77.000.050.15

1.51.661.601.771.811.581.601.67111.35.84

0.150.170.170.140.160.160.160.16106.76.85

罗红霉素0.300.370.320.330.370.380.330.35116.77.450.050.15

1.51.661.611.881.811.751.551.71114.07.33

6

对乙酰氨33.373.133.443.523.233.653.39113.05.61

65.886.336.136.445.975.976.12102.03.6513

基酚

3029.0327.6629.0331.0227.6623.9728.0693.538.39

1.51.281.501.471.401.351.401.4093.35.70

乙酰半胱

3.02.662.672.532.802.622.802.6889.33.930.51.5

氨酸

1513.6613.5914.1514.014.713.013.8592.34.16

0.30.230.240.240.210.210.250.2376.77.28

阿司匹林0.60.450.430.520.550.490.500.4981.79.040.10.3

32.122.112.092.072.152.182.1270.71.89

0.150.140.130.150.150.140.130.1493.35.96

氯丙那林0.30.310.330.300.280.330.330.31103.36.890.050.15

1.51.481.481.401.521.471.531.4898.73.11

0.60.470.570.500.500.540.540.5286.76.38

二羟丙茶

1.21.301.391.271.191.511.201.31109.28.510.20.6

碱

65.175.095.445.505.125.305.2787.82.98

0.030.0280.0250.0330.0280.0270.0270.02893.39.58

右美沙芬0.060.0590.0590.0700.0630.0630.0640.063105.06.430.010.03

0.300.310.340.350.330.360.330.34113.35.15

0.150.170.170.150.160.180.190.17113.38.32

苯并哌林0.30.300.370.360.350.360.360.35116.77.230.050.15

1.51.661.511.721.671.701.701.66110.74.62

0.150.150.120.150.130.150.150.1493.39.49

沙美特罗0.30.260.270.300.300.250.300.2893.38.140.050.15

1.51.661.691.701.881.711.801.74116.04.78

5.标准样品色谱图

按照最优实验条件，得到各标准溶液色谱图。

20210108-081:MRMof12ChannelsES+

0.92286.22>165.023(mafei)

982.87e6

0.77

%

-2

0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.50

20210108-081:MRMof12ChannelsES+

0.92286.22>181.035(mafei)

981.20e6

0.76

%

-2Time

0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.50

1.吗啡

（Morphine）

7

20210108-081:MRMof12ChannelsES+

0.98300.22>165.034(kedaiyin)

984.71e6

%

-2

0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.50

20210108-081:MRMof12ChannelsES+

0.99300.22>215.043(kedaiyin)

984.22e6

%

-2Time

0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.50

2.可待因

（Codein）

20210108-081:MRMof12ChannelsES+

1.93312.22>57.978(dibayin)

983.51e6

%

-2

0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.50

20210108-081:MRMof12ChannelsES+

1.93312.22>251.019(dibayin)

988.19e5

%

-2Time

0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.50

3.蒂巴因

（Thebaine）

20210108-081:MRMof12ChannelsES+

2.39340.31>202.11(yingsujian)

981.19e7

%

-2

0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.50

20210108-081:MRMof12ChannelsES+

2.39340.31>324.31(yingsujian)

989.11e6

%

-2Time

0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.50

4.罂粟碱

（Papaverine）

8

20210108-081:MRMof12ChannelsES+

2.56414.12>220.039(nakeding)

981.38e7

%

-2

0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.50

20210108-081:MRMof12ChannelsES+

2.57414.12>353.102(nakeding)

982.47e6

%

-2Time

0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.50

5.那可丁

（Narcotine）

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-2

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-2Time

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6.羟乙茶碱

（Theophylline）

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-2

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-2Time

0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.50

7.特布他林

（Terbutaline）

9

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8.沙丁胺醇

(Albuterol)

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9.克伦特罗

（Clenbuterol）

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10.盐酸二氧丙嗪

（DioxopromethazineHydrochloride）

10

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98