编制说明-《食品中8种氯苯酚污染物残留量的测定方法 液相色谱-串联质谱法》

2021年1月

1

一、工作简况

（一）任务来源

广东产品质量监督检验研究院承担了广州开发区检验检测联盟标准工作委

员会团体标准《食品中8种氯苯酚污染物残留量的测定方法液相色谱-串联质

谱法》的牵头起草工作，计划完成时间为2021年12月

（二）项目主要工作过程

本标准的编制经历了以下阶段：

1资料收集阶段

前期调研工作，包括文献资料的查阅，国内外相关标准情况的进一步了解，

确定实验方案。根据任务下达的通知，迅速收集相关材料，查阅研读我国现行有

关氯苯酚污染物残留量的检测方法标准以及科技文献资料。目前已有关于苯酚、

五氯苯酚检测标准，例如：GB/T18932.7-2002《蜂蜜中苯酚残留量的测定方法

液相色谱法》、GB23200.92-2016《食品安全国家标准动物源性食品中五氯酚

残留量的测定液相色谱-质谱法》；其余6种尚未有检测标准。文献方法有林茂

发发表的《食品中苯酚类污染物残留监测研究》、高永刚等发表的《液相色谱-

质谱法同时测定纺织品中19种含氯苯酚类化合物》。考虑到这8种氯苯酚的化

学性质和方法的通用性。经研究讨论，标准制定小组确定采用液相色谱-质谱/质

谱法建立食品中8种氯苯酚污染物残留量的测定方法。

2.方法优化：收集样品，根据样品特点以及拟检测的非法添加物的性质特点，

结合定性定量要求，选择采用液相色谱-串联质谱法进行检测，具体方法优化包

括样品前处理方法优化；液相色谱条件优化；质谱技术参数条件的优化。使建立

的检测方法的各项技术参数满足凉茶样品日常监管需要。

3.征求意见和形成专业组预审讨论稿

4.形成标准报批稿

1

二、标准编制原则和确定主要内容的依据及解决的主要问题

（一）编写主要原则

本标准是按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结

构和起草规则》要求编写。

本标准的重复性和再现性按GB/T6379.1-2004《测量方法与结果的准确度（正确

度与精密度）第1部分：总则与定义》和GB/T6379.2-2004《测量方法与结果的

准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法的重复性和再现性的基

本方法》进行确定。

（二）标准主要内容

标准主要内容包括：标准适用范围及规范性引用文件、检测原理、试剂和材

料说明、标准曲线配制、仪器设备参数条件、前处理步骤、液相色谱-串联质谱

定性及定量方法、空白试验要求、结果计算、化合物特征离子色谱图以及方法检

出限、定量限、准确度和精密度。

三、主要试验情况分析

样品分别用酸化甲醇-乙腈混合溶液（1:1，体积比）和酸化甲醇-乙酸乙酯混

合溶液（1:1，体积比）提取，合并提取液，提取液经固相萃取柱净化，收集滤

液和洗脱液，旋转蒸发至干后用甲酸-乙酸水溶液溶解，液相色谱-串联质谱法测

定，外标法定量。

（1）仪器条件的优化

方法采用色谱分析实验室常用的C18，100mm×2.1mm，1.7um色谱柱，流

动相采用甲醇和水溶液，通过改变甲醇和水溶液的比例，优化了化合物的梯度洗

脱程序，使这8种氯苯酚有合适的峰形、峰宽和保留时间（特别是同分异构体能

够得到分开），有利于这8种氯苯酚质谱响应。

采用电喷雾离子源（ESI源）负离子多反应监测（MRM）模式，通过比较

2

优选了化合物的毛细管电压、脱溶剂气温度、脱溶剂气流量等参数。采用MRM

监测模式，通过软件优化获得化合物的离子对、锥孔电压和碰撞能等参数。优化

后的化合物参考仪器条件如下：

色谱条件：色谱柱：C18，100mm×2.1mm，1.7um色谱柱；流动相：甲醇和水；

梯度洗脱，流动相梯度洗脱程序：见表1；流速：0.2 mL/min；柱温：40℃；进

样量：10µL

表1液相色谱梯度洗脱条件

时间（min）流速（mL/min）A/%B/%

0.000.2003070

0.200.2003070

1.000.2006040

3.000.2006535

16.000.2006535

16.100.2009010

19.100.2009010

19.200.2003070

24.000.2003070

质谱条件：离子源：电喷雾离子源（ESI源）;质谱扫描方式：负离子多反应监

测（MRM）模式;毛细管电压：-2800V;脱溶剂气温度：450℃;脱溶剂气流量：

800L/Hr，离子对条件见表2。

表2定性、定量离子和质谱检测参数

化合物母离子（m/z）子离子（m/z）锥孔电压/V碰撞能量/eV

156.9156.9-40-5

对氯间二甲苯酚

154.9154.9-40-5

3

160.9160.9-30-4

2,4-二氯苯酚

162.9162.9-30-4

194.8194.8-40-5

2,4,5-三氯苯酚196.8196.8-40-5

198.8198.8-40-5

194.9194.9-40-6

2,4,6-三氯苯酚196.9196.9-40-6

198.9198.9-40-6

228.7228.7-43-7

230.7230.7-43-7

2,3,4,5-四氯苯酚

232.7232.7-43-7

234.7234.7-43-7

228.8228.8-42-5

230.8230.8-42-5

2,3,4,6-四氯苯酚

232.8232.8-42-5

234.8234.8-42-5

228.9228.9-45-5

230.9230.9-45-5

2,3,5,6-四氯苯酚

232.9232.9-45-5

234.9234.9-45-5

262.7262.7-50-3

264.7264.7-50-3

五氯苯酚

266.7266.7-50-3

268.7268.7-50-3

（2）标准曲线配制及线性范围

4

标准储备液：精密称取8种氯苯酚标准品各10mg（精确至0.1mg）分别置于

10mL容量瓶中，加入甲醇溶解，分别配得浓度为1000µg/mL的标准储备溶液，

-18℃条件下保存。

混合标准中间溶液：分别精密吸取对氯间二甲苯酚、2,4-二氯苯酚、2,4,5-

三氯苯酚、2,4,6-三氯苯酚、2,3,4,5-四氯苯酚、2,3,4,6-四氯苯酚、2,3,5,6-

四氯苯酚的标准储备液（4.4.1）各200µL，五氯苯酚标准储备液20µL置于同一

个10mL容量瓶中，用甲醇（4.1.1）稀释，定容至刻度，配得对氯间二甲苯酚、

2,4-二氯苯酚、2,4,5-三氯苯酚、2,4,6-三氯苯酚、2,3,4,5-四氯苯酚、2,3,4,6-

四氯苯酚、2,3,5,6-四氯苯酚浓度均为20µg/mL，五氯苯酚浓度为2µg/mL的混合

标准中间溶液。

混合标准使用液：吸取混合标准中间液1.0mL置于10mL容量瓶中，用甲醇稀

释定容，配得对氯间二甲苯酚、2,4-二氯苯酚、2,4,5-三氯苯酚、2,4,6-三氯苯酚、

2,3,4,5-四氯苯酚、2,3,4,6-四氯苯酚、2,3,5,6-四氯苯酚浓度均为2µg/mL，五氯苯

酚浓度为0.2µg/mL的混合标准使用液。

混合标准工作液：用空白基质溶液配制对氯间二甲苯酚、2,4-二氯苯酚、2,4,5-

三氯苯酚、2,4,6-三氯苯酚、2,3,4,5-四氯苯酚、2,3,4,6-四氯苯酚、2,3,5,6-四氯苯

酚浓度范围均为20ng/mL~600ng/mL，五氯苯酚浓度范围为2ng/mL~60ng/mL标准

工作曲线，临用现配。

将处理好的标准工作液分别进样测定，以浓度为横坐标，以总峰面积为纵坐

标，线性回归结果见表3。

表38种氯苯酚的线性方程、仪器检出限及定量限

线性回归方程线性范围仪器检出限仪器定量限

化合物相关系数

Totalarea=a*Conc.+bng/mL（ng/mL）（ng/mL）

对氯间二甲苯酚y=3177.65x+11492320-6000.99781020

2,4-二氯苯酚y=204.536x+1107.2120-6000.99921020

2,4,5-三氯苯酚y=1923.12x+57620.320-6000.99171020

5

2,4,6-三氯苯酚y=526.958x+4120.220-6000.99811020

2,3,4,5-四氯苯酚y=7308.85x+81342.420-6000.99251020

2,3,4,6-四氯苯酚y=4894.67x+35812.720-6000.99361020

2,3,5,6-四氯苯酚y=5386.16x+29559.720-6000.99771020

五氯酚y=2475.87x+297.6772-600.998012

（3）食品中8种氯苯酚污染物残留量的前处理优化

考虑到这8种氯苯酚在甲醇中都有较好的溶解性，故取可食部分的代表性样

品，用粉碎机粉碎，准确称取2.00g样品，分别用酸化甲醇-乙腈混合溶液（1:1，

体积比）和酸化甲醇-乙酸乙酯混合溶液（1:1，体积比）提取，合并提取液，提

取液经固相萃取柱净化，收集流出液和洗脱液，旋转蒸发至干，最后用甲醇-乙

酸水溶液溶解，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。

（4）方法回收率、精密度、检出限、定量限

水果、蔬菜、动物源性食品取可食部分的代表性样品，用粉碎机粉碎，阴性

样品，加入标准溶液，获得添加的阳性样品。按试样处理方法处理后进行测定，

结果见表4。从表中可看出，不同浓度平均加标回收率在60.8~78.7%，相对标准

偏差为3.2~8.2%（n=6）。

表4样品加标回收率测定结果

测定值µg/kg

回方法

添加平均方法定

化合收RSD检出

浓度值量限

物123456率(%)限

µg/kgµg/kgµg/kg

(%)µg/kg

对氯6038.138.239.836.237.238.137.963.23.2

间二

甲苯12070.575.268.575.280.772.273.761.45.92060

酚

600380.2400.7360.8400.7370.5421.3389.064.85.8

182.4

2,4-二300170.2180.2180.3163.7198.5201.360.88.2

100300

氯苯600380.4412.8370.7399.5402.1370.2389.364.94.6

6

酚

30001802.32007.22101.41972.51842.32108.71972.465.76.5

2,4,5-6038.242.343.840.743.141.641.669.44.8

三氯

12080.682.584.887.785.390.685.371.04.22060

苯酚

600400.8421.8420.9388.5428.1417.5412.968.83.7

2,4,6-6042.543.540.139.537.638.840.367.25.6

三氯

12078.685.690.588.185.691.586.772.25.42060

苯酚

600400.5412.6394.7410.5422.8430.5411.968.73.2

2,3,4,56042.643.543.844.740.239.942.570.84.7

-四氯

12085.690.287.392.379.980.586.071.65.92060

苯酚

600450.8472.6413.8422.8475.3466.6450.375.15.9

2,3,4,66040.645.737.539.442.140.140.968.26.8

-四氯

12086.687.388.990.380.288.687.072.54.12060

苯酚

600422.8413.8416.5460.8405.8424.3424.070.74.5

2,3,5,66038.744.247.643.84240.342.871.37.4

-四氯

12090.787.589.995.380.388.288.773.95.62060

苯酚

600450.3410.8462.8438.5444.5482.7448.374.75.4

1.51.121.021.210.961.051.081.171.68.0

五氯

酚3.02.452.232.482.282.552.172.478.76.50.51.5

15.012.510.311.811.211.412.111.677.06.7

（5）标样色谱图

按照最优实验条件，得到对氯间二甲苯酚、2,4-二氯苯酚、2,4,5-三氯苯酚、

2,4,6-三氯苯酚、2,3,4,5-四氯苯酚、2,3,4,6-四氯苯酚和2,3,5,6-四氯苯酚标准溶液

（200ng/mL）以及五氯苯酚标准溶液（20ng/mL）色谱图。详见下列图1-图8。

7

F2:MRMof29channels,ES-

7.15154.9>154.9

91.159e+007

%

1.11

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

7.15156.9>156.9

93.707e+006

%

10.57

-5min

2.04.06.08.010.012.014.016.018.020.022.024.0

图1对氯间二甲苯酚MRM色谱图

F2:MRMof29channels,ES-

6.37160.9>160.9

953.045e+005

%

0.297.879.5122.23

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

6.37162.9>162.9

952.085e+005

%

0.37

2.717.859.0610.7317.81

-5min

2.04.06.08.010.012.014.016.018.020.022.024.0

图22,4二氯苯酚

8

F2:MRMof29channels,ES-

9.47194.8>194.8

958.248e+006

%

8.78

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

9.47196.8>196.8

958.118e+006

%

8.78

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

9.47198.8>198.8

952.710e+006

%

8.78

20.21

-5min

2.04.06.08.010.012.014.016.018.020.022.024.0

图32,4,5-三氯苯酚

F2:MRMof29channels,ES-

9.48194.9>194.9

958.477e+006

%

8.78

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

9.47196.9>196.9

958.168e+006

%

8.78

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

9.48198.9>198.9

952.671e+006

%

8.78

20.21

-5min

2.04.06.08.010.012.014.016.018.020.022.024.0

图42,4,6-三氯苯酚

9

F2:MRMof29channels,ES-

11.39

12.11230.7>230.7

9515.131.015e+007

%

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

11.3912.12228.7>228.7

9515.147.907e+006

%

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

11.39

12.12232.7>232.7

9515.134.979e+006

%

1.27

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

11.38

12.12234.7>234.7

15.13

951.035e+006

%

1.26

-5min

2.04.06.08.010.012.014.016.018.020.022.024.0

图52,3,4,5-四氯苯酚

F2:MRMof29channels,ES-

11.3912.12230.8>230.8

15.13

951.068e+007

%

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

11.39

12.12228.8>228.8

9515.148.243e+006

%

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

11.3912.12232.8>232.8

9515.135.200e+006

%

1.28

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

11.3912.12234.8>234.8

15.13

951.089e+006

%

1.25

-5min

2.04.06.08.010.012.014.016.018.020.022.024.0

图62,3,4,6-四氯苯酚

10

F2:MRMof29channels,ES-

11.3912.12230.81>230.81

9515.131.065e+007

%

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

11.3912.11228.81>228.81

9515.138.481e+006

%

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

11.39

12.11232.81>232.81

9515.135.118e+006

%

1.27

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

11.39234.81>234.81

12.1215.12

951.082e+006

%

1.26

-5min

2.04.06.08.010.012.014.016.018.020.022.024.0

图72,3,5,6-四氯苯酚

F2:MRMof29channels,ES-

14.92262.7>262.7

955.828e+005

%

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

14.90264.7>264.7

951.001e+006

%5.78

18.54

-5min

F2:MRMof29channels,ES-

14.92266.7>266.7

95