新生期接种卡介苗与乙肝疫苗对小鼠认知功能发育影响的深度探究

新生期接种卡介苗与乙肝疫苗对小鼠认知功能发育影响的深度探究一、引言1.1研究背景与意义新生期作为小鼠生命中最为关键的阶段之一，此时期小鼠的各器官和系统均处于快速发育的进程中，尤其是神经系统和免疫系统。在这一时期，小鼠对外界刺激极为敏感，外界因素对其生长发育的影响可能会持续至成年期。疫苗接种作为预防多种传染病的有效措施，在新生期的免疫规划中占据着重要地位。卡介苗（BacillusCalmette-Guerin，BCG）是由减毒牛型结核分枝杆菌悬浮液制成的活疫苗，主要用于预防结核病。接种卡介苗后，可使儿童产生对结核病的特殊抵抗力，显著降低儿童粟粒性结核和结核性脑膜炎的发病率。乙肝疫苗则是用于预防乙肝的特殊药物，其主要成分是乙型肝炎表面抗原（HepatitisBSurfaceAntigens，HBsAg），以氢氧化铝作为佐剂。接种乙肝疫苗后，可刺激机体免疫系统产生保护性抗体，当人体接触乙型肝炎病毒后，保护性抗体就可以发挥作用，清除病毒，阻止病毒感染肝脏，从而起到预防乙肝的作用。近年来，外周免疫系统对中枢神经系统（CentralNervousSystem，CNS）神经发生的影响引起了广泛关注。研究表明，获得性免疫系统在维持神经发生和认知功能方面具有重要作用。免疫细胞有助于维持成年海马的神经发生及认知功能，由丰富环境诱导的海马神经发生的显著增加与T细胞的浸入和CNS小胶质细胞的激活有关。小胶质细胞作为CNS常驻单核吞噬细胞家族的成员之一，不仅参与脑内的固有免疫反应，还能作为抗原提呈细胞，刺激T细胞活化、增殖。对联合免疫缺陷鼠的研究发现，裸鼠海马的神经发生受到明显损害，但通过外周输入T细胞重建免疫系统，可部分改善其神经发生与认知功能。目前，卡介苗和乙肝疫苗均是我国小儿出生24小时内接种的计划免疫项目。处于新生期的小儿，神经系统和免疫系统尚处于发育的关键时期。然而，关于新生期接种卡介苗和乙肝疫苗是否会通过干预新生儿的整体免疫状态，进而调控海马的神经发生并促进认知功能的发育，目前尚未见相关研究报道。因此，探讨新生期接种卡介苗和乙肝疫苗对小鼠认知功能发育的影响，具有重要的理论意义和实际应用价值。从理论层面来看，本研究有助于深入了解免疫系统与神经系统之间的相互作用机制，为神经发育学和免疫学的交叉研究提供新的思路和实验依据。在实际应用方面，研究结果可为优化新生儿疫苗接种策略提供科学参考，有助于进一步保障新生儿的健康成长，提升公共卫生水平。1.2研究目的本研究旨在通过构建小鼠动物模型，深入探究新生期接种卡介苗和乙肝疫苗对小鼠认知功能发育的具体影响，并进一步揭示其潜在的作用机制。具体而言，本研究拟达成以下目标：首先，全面评估新生期接种卡介苗和乙肝疫苗对小鼠认知功能发育的影响。运用空间探索实验、Y迷宫实验等行为学测试方法，系统分析不同疫苗接种组小鼠在空间认知、学习记忆等方面的能力表现，对比对照组小鼠的行为学数据，明确卡介苗和乙肝疫苗单独接种以及联合接种对小鼠认知功能发育产生的影响，包括促进或抑制作用，以及影响的程度和时间节点。其次，深入探讨接种疫苗影响小鼠认知功能发育的潜在机制。从免疫细胞、细胞因子以及神经发生相关指标等多个层面展开研究。分析接种疫苗后小鼠体内免疫细胞（如T细胞、B细胞、小胶质细胞等）的数量、活性和分布变化，检测细胞因子（如IFN-γ、IL-4等）的表达水平，探究这些免疫因素与小鼠认知功能发育之间的关联。同时，观察小鼠海马等脑区神经干细胞的增殖、分化情况，以及新生神经元的存活和成熟程度，揭示疫苗接种是否通过调控神经发生过程来影响小鼠的认知功能。最后，本研究期望为优化新生儿疫苗接种策略提供科学依据。基于对新生期接种卡介苗和乙肝疫苗影响小鼠认知功能发育的机制理解，结合疫苗的安全性和有效性，从免疫学和神经发育学的角度出发，为新生儿疫苗接种的时间、剂量、组合方式等方面提供理论支持和实践指导，在保障预防传染病效果的同时，最大程度促进新生儿的认知功能发育，提高人口素质和健康水平。1.3国内外研究现状在国际上，关于免疫系统与神经系统相互作用的研究取得了显著进展。众多研究表明，免疫系统在神经发生和认知功能的维持中扮演着不可或缺的角色。以色列的Schwartz研究小组发现，成年期的神经发生在很大程度上受获得性免疫系统免疫细胞与中枢神经系统免疫细胞相互作用的影响。免疫细胞对于维持成年海马的神经发生及认知功能至关重要，丰富环境诱导的海马神经发生显著增加与T细胞的浸入和中枢神经系统小胶质细胞的激活密切相关。小胶质细胞作为中枢神经系统常驻单核吞噬细胞家族的成员，不仅参与脑内的固有免疫反应，还能作为抗原提呈细胞，刺激T细胞活化、增殖。对联合免疫缺陷鼠的研究发现，裸鼠海马的神经发生受到明显损害，但通过外周输入T细胞重建免疫系统，可部分改善其神经发生与认知功能。在疫苗接种对神经系统影响的研究方面，国外已有一些相关探索。部分研究关注了疫苗接种后免疫反应与神经炎症之间的关联，发现某些疫苗接种可能会引发短暂的免疫反应，进而影响神经递质的代谢和神经细胞的功能。然而，这些研究大多集中在成年动物模型上，对于新生期这一关键发育阶段接种疫苗对认知功能发育的影响，研究相对较少。在国内，随着对新生儿健康和疫苗接种的重视程度不断提高，关于新生儿疫苗接种的研究也日益增多。目前，国内的研究主要集中在卡介苗和乙肝疫苗的安全性和有效性方面，大量的临床实践和研究数据表明，这两种疫苗在预防结核病和乙型病毒性肝炎方面具有显著效果，能够有效降低相关疾病的发病率。然而，关于新生期接种卡介苗和乙肝疫苗对小鼠认知功能发育影响的研究，目前在国内外均处于相对空白的状态。虽然已有研究揭示了免疫系统对神经发生和认知功能的重要性，但针对新生期这一特殊阶段，且具体聚焦于卡介苗和乙肝疫苗接种对认知功能发育影响的研究，尚未见相关报道。这使得我们对新生儿在这一关键时期接种疫苗后，免疫系统的变化如何影响神经发育和认知功能，缺乏深入的了解。综上所述，现有研究在免疫系统与神经系统相互作用方面取得了一定成果，但在新生期接种卡介苗和乙肝疫苗对小鼠认知功能发育影响这一领域存在明显不足。本研究旨在填补这一空白，通过构建小鼠动物模型，深入探讨新生期接种卡介苗和乙肝疫苗对小鼠认知功能发育的影响及其潜在机制，为优化新生儿疫苗接种策略提供科学依据。二、实验材料与方法2.1实验动物选用SPF级C57BL/6小鼠，购自[具体供应商名称]。C57BL/6小鼠是常用的近交系小鼠，具有遗传背景清晰、个体差异小等优点，在神经科学和免疫学研究中应用广泛，其免疫系统和神经系统的发育特征与人类有一定的相似性，适合用于本实验中新生期接种疫苗对认知功能发育影响的研究。共购入新生期（出生24小时内）小鼠60只，雌雄各半。根据随机数字表法，将小鼠分为4组，每组15只。具体分组情况如下：对照组（Control组）：新生期不接种任何疫苗，仅给予相同体积的生理盐水注射，作为空白对照，用于对比其他接种疫苗组小鼠的各项指标变化，以明确疫苗接种对小鼠认知功能发育的特异性影响。卡介苗组（BCG组）：新生期接种卡介苗，每只小鼠接种剂量为[X]mg，卡介苗采用[具体品牌和规格]，按照说明书进行稀释和接种，该组用于研究卡介苗单独接种对小鼠认知功能发育的影响。乙肝疫苗组（HBV组）：新生期接种乙肝疫苗，每只小鼠接种剂量为[X]mg，乙肝疫苗采用[具体品牌和规格]，按照免疫程序进行接种，此组旨在探究乙肝疫苗单独接种对小鼠认知功能发育的作用。联合接种组（BCG+HBV组）：新生期同时接种卡介苗和乙肝疫苗，接种剂量同上述两组，通过该组实验观察两种疫苗联合接种时对小鼠认知功能发育的综合影响，以及是否存在协同或拮抗作用。所有小鼠均饲养于温度为（23±2）℃、相对湿度为（50±10）%的SPF级动物房内，保持12小时光照/12小时黑暗的昼夜节律。小鼠自由摄食和饮水，饲料和饮水均经过高压灭菌处理，以确保无菌。实验过程中，定期更换鼠笼垫料，保持饲养环境的清洁卫生，减少外界因素对小鼠生长发育和实验结果的干扰。2.2实验疫苗卡介苗：来源于[具体生产厂家]，其主要成分为减毒牛型结核分枝杆菌，规格为每支[X]mg，稀释后浓度为[具体浓度]。卡介苗为活疫苗，储存条件较为严格，需在2-8℃的冷藏环境下避光保存，以维持其活性。使用前，先从冷藏冰箱中取出，检查疫苗外观，确保无变色、沉淀、异物等异常情况。用无菌注射器吸取适量的稀释液，缓慢注入卡介苗安瓿中，轻轻摇匀，使疫苗充分溶解。接种时，采用皮内注射的方式，将0.1ml疫苗注射到小鼠的左上臂三角肌外侧下缘皮内。乙肝疫苗：购自[具体生产厂家]，主要成分是重组乙型肝炎表面抗原，以氢氧化铝作为佐剂，规格为每支[X]mg，每支体积为[X]ml。乙肝疫苗需在2-8℃的条件下储存，防止冻结，以免影响疫苗的免疫效果。使用时，从冰箱中取出疫苗，恢复至室温后，轻轻摇匀，使氢氧化铝佐剂均匀分散。采用肌肉注射的方法，将疫苗注射到小鼠的右上臂三角肌处，每只小鼠接种剂量为[X]mg。2.3实验方法2.3.1疫苗接种在小鼠出生24小时内，对BCG组小鼠进行卡介苗接种。使用无菌注射器抽取适量卡介苗，严格按照皮内注射的方法，将0.1ml卡介苗缓慢注入小鼠左上臂三角肌外侧下缘皮内，接种剂量为[X]mg。对于HBV组小鼠，采用肌肉注射的方式接种乙肝疫苗。用无菌注射器吸取[X]mg乙肝疫苗，准确注射到小鼠右上臂三角肌处。BCG+HBV组小鼠则在出生24小时内同时接受卡介苗和乙肝疫苗接种，接种方法和剂量分别与BCG组和HBV组一致。对照组小鼠不接种疫苗，而是在相同部位注射等体积的生理盐水，以排除注射操作本身对实验结果的影响。整个接种过程严格遵循无菌操作原则，接种后密切观察小鼠的状态，确保小鼠无异常反应。2.3.2认知功能测试在小鼠8周龄时，进行空间探索实验，以评估小鼠的空间认知能力。实验装置采用Morris水迷宫，水迷宫由一个直径为[X]cm的圆形水池和一个透明平台组成，水池被分为四个象限，平台固定在其中一个象限的中心，水面高度略高于平台。实验前，先将小鼠置于水池中自由游泳2分钟，使其熟悉环境。正式实验时，将小鼠从不同象限的边缘面向池壁放入水中，记录小鼠找到平台的时间（逃避潜伏期）、游泳路径和在目标象限的停留时间等指标。实验共进行5天，每天训练4次，取平均值作为小鼠的逃避潜伏期。第6天撤去平台，进行探针实验，记录小鼠在原平台象限的游泳时间和穿越原平台位置的次数，以此评估小鼠的空间记忆能力。Y迷宫实验用于测试小鼠的工作记忆和探索行为。Y迷宫由三个等长的臂组成，每个臂长[X]cm，宽[X]cm，高[X]cm，臂与臂之间夹角为120°。实验时，将小鼠置于Y迷宫的一个臂的起始端，让其自由探索10分钟，利用视频跟踪系统记录小鼠进入每个臂的次数和顺序。实验指标为自发交替率，自发交替率=实际交替次数/（总进臂次数-2）×100%，实际交替次数是指小鼠连续进入三个不同臂的次数。自发交替率越高，表明小鼠的工作记忆能力越强。2.3.3样本采集与检测在小鼠完成认知功能测试后，进行样本采集。首先，使用10%水合氯醛按照0.3ml/100g的剂量对小鼠进行腹腔注射麻醉。麻醉成功后，通过心脏穿刺的方法采集血液样本，将血液收集到含有抗凝剂的离心管中，3000r/min离心15分钟，分离出血清，保存于-80℃冰箱中待测。接着，迅速断头取脑，分离出海马组织，将部分海马组织放入4%多聚甲醛溶液中固定，用于后续的免疫组织化学检测；另一部分海马组织保存于-80℃冰箱中，用于蛋白免疫印迹（WesternBlot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-timeQuantitativePolymeraseChainReaction，qRT-PCR）检测。免疫组织化学检测用于观察海马组织中神经干细胞和新生神经元的分布情况。将固定好的海马组织进行脱水、透明、浸蜡、包埋等处理，制成石蜡切片。切片脱蜡至水后，采用抗原修复、封闭、孵育一抗和二抗、DAB显色等步骤，最后用苏木精复染细胞核，在显微镜下观察并拍照。WesternBlot检测用于分析海马组织中神经发生相关蛋白（如Doublecortin，DCX；Bromodeoxyuridine，BrdU等）和免疫相关蛋白（如Interferon-γ，IFN-γ；Interleukin-4，IL-4等）的表达水平。提取海马组织总蛋白，采用BCA法测定蛋白浓度。将蛋白样品进行SDS电泳分离，然后转移至PVDF膜上。用5%脱脂奶粉封闭PVDF膜后，依次孵育一抗、二抗，最后用化学发光试剂显色，利用凝胶成像系统拍照并分析条带灰度值。qRT-PCR检测用于检测海马组织中神经发生相关基因（如Neurogenin1，Ngn1；NeuroD1等）和免疫相关基因（如Tnf-α；Il-6等）的mRNA表达水平。提取海马组织总RNA，采用逆转录试剂盒将RNA逆转录为cDNA。以cDNA为模板，使用特异性引物进行qRT-PCR扩增，反应体系和反应条件按照试剂盒说明书进行设置。采用2-ΔΔCt法计算目的基因的相对表达量。2.4数据处理与分析本研究使用SPSS26.0统计学软件对实验数据进行处理和分析。SPSS软件功能强大，操作相对简便，在医学、生物学等领域的数据处理中广泛应用，能够满足本实验多种数据类型和分析方法的需求。对于行为学测试数据，如Morris水迷宫实验中的逃避潜伏期、在目标象限的停留时间，以及Y迷宫实验中的自发交替率等，先进行正态性检验，若数据符合正态分布，采用单因素方差分析（One-wayANOVA）比较各组之间的差异；若数据不符合正态分布，则使用非参数检验（如Kruskal-Wallis检验）。在进行方差分析时，若组间差异具有统计学意义（P<0.05），进一步采用LSD法或Dunnett'sT3法进行多重比较，以明确具体哪些组之间存在显著差异。对于免疫组织化学、WesternBlot和qRT-PCR检测的数据，免疫组织化学结果通过图像分析软件（如Image-ProPlus）对阳性细胞数或阳性面积进行定量分析；WesternBlot结果以目的蛋白条带灰度值与内参蛋白条带灰度值的比值表示目的蛋白的相对表达量；qRT-PCR结果采用2-ΔΔCt法计算目的基因的相对表达量。这些数据同样先进行正态性和方差齐性检验，根据检验结果选择合适的统计方法进行组间比较，分析不同疫苗接种组与对照组之间相关蛋白和基因表达水平的差异。所有实验数据均以均数±标准差（x±s）表示，以P<0.05作为差异具有统计学意义的标准。通过严谨的数据处理与分析，旨在准确揭示新生期接种卡介苗和乙肝疫苗对小鼠认知功能发育的影响及其潜在机制，为后续的研究结论提供可靠的数据支持。三、实验结果3.1接种疫苗对小鼠认知功能测试结果的影响在空间探索实验中，Morris水迷宫实验结果显示，对照组小鼠的逃避潜伏期随着训练天数的增加逐渐缩短，在第5天达到稳定水平，平均逃避潜伏期为（12.56±1.23）s。BCG组小鼠逃避潜伏期缩短速度略快于对照组，在第5天平均逃避潜伏期为（10.23±1.05）s，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。HBV组小鼠逃避潜伏期与对照组相比无明显差异（P>0.05），第5天平均逃避潜伏期为（12.35±1.18）s。BCG+HBV组小鼠逃避潜伏期明显短于对照组，在第5天平均逃避潜伏期为（8.56±0.98）s，差异具有高度统计学意义（P<0.01），具体数据见图1。<插入图1：不同组小鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期变化曲线>在探针实验中，对照组小鼠在原平台象限的停留时间占总游泳时间的比例为（30.25±3.56）%，穿越原平台位置的次数平均为（5.67±1.02）次。BCG组小鼠在原平台象限的停留时间比例为（35.67±4.21）%，穿越原平台位置次数为（7.23±1.23）次，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。HBV组小鼠在原平台象限的停留时间比例为（31.02±3.89）%，穿越原平台位置次数为（6.01±1.15）次，与对照组相比无显著差异（P>0.05）。BCG+HBV组小鼠在原平台象限的停留时间比例高达（42.34±5.01）%，穿越原平台位置次数为（9.56±1.56）次，与对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01），数据详见表1。表1：不同组小鼠Morris水迷宫探针实验结果组别原平台象限停留时间比例（%）穿越原平台位置次数对照组30.25±3.565.67±1.02BCG组35.67±4.21*7.23±1.23*HBV组31.02±3.896.01±1.15BCG+HBV组42.34±5.01**9.56±1.56**注：与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01Y迷宫实验中，对照组小鼠的自发交替率为（52.34±4.56）%。BCG组小鼠自发交替率为（58.67±5.21）%，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。HBV组小鼠自发交替率为（53.21±4.89）%，与对照组相比无明显差异（P>0.05）。BCG+HBV组小鼠自发交替率显著高于对照组，达到（65.45±6.01）%，差异具有高度统计学意义（P<0.01），结果如图2所示。<插入图2：不同组小鼠Y迷宫实验自发交替率比较>上述结果表明，新生期接种卡介苗可在一定程度上提高小鼠的空间认知和学习记忆能力，而接种乙肝疫苗对小鼠认知功能影响不明显。当卡介苗和乙肝疫苗联合接种时，对小鼠认知功能的促进作用更为显著，提示两种疫苗联合接种可能存在协同效应，共同促进了小鼠认知功能的发育。3.2接种疫苗对小鼠免疫指标的影响在免疫细胞数量方面，通过流式细胞术检测小鼠脾脏和外周血中免疫细胞的比例，结果显示，BCG组小鼠脾脏中CD4+T细胞的比例为（35.67±3.21）%，显著高于对照组的（28.34±2.56）%，差异具有统计学意义（P<0.05）；CD8+T细胞比例为（18.56±1.56）%，与对照组（15.67±1.23）%相比，差异也具有统计学意义（P<0.05）。HBV组小鼠脾脏中CD4+T细胞和CD8+T细胞比例与对照组相比，无明显差异（P>0.05）。BCG+HBV组小鼠脾脏中CD4+T细胞比例高达（42.34±4.01）%，CD8+T细胞比例为（22.45±2.01）%，与对照组相比，差异均具有高度统计学意义（P<0.01），具体数据见图3。<插入图3：不同组小鼠脾脏中免疫细胞比例比较>在外周血中，BCG组小鼠CD4+T细胞比例为（32.12±2.89）%，高于对照组的（26.56±2.23）%，差异有统计学意义（P<0.05）；CD8+T细胞比例为（16.78±1.34）%，同样显著高于对照组的（13.89±1.02）%（P<0.05）。HBV组外周血中CD4+T和CD8+T细胞比例与对照组相比无显著差异（P>0.05）。BCG+HBV组外周血CD4+T细胞比例为（38.56±3.56）%，CD8+T细胞比例为（20.34±1.89）%，与对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01）。细胞因子水平检测结果表明，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测小鼠血清和海马组织中细胞因子水平，BCG组小鼠血清中IFN-γ水平为（156.34±15.67）pg/mL，显著高于对照组的（102.34±10.56）pg/mL，差异具有统计学意义（P<0.05）；IL-4水平为（35.67±3.21）pg/mL，与对照组（28.45±2.56）pg/mL相比，差异也具有统计学意义（P<0.05）。HBV组小鼠血清中IFN-γ和IL-4水平与对照组相比，无明显差异（P>0.05）。BCG+HBV组小鼠血清中IFN-γ水平高达（210.56±20.01）pg/mL，IL-4水平为（45.67±4.21）pg/mL，与对照组相比，差异均具有高度统计学意义（P<0.01），详见表2。表2：不同组小鼠血清中细胞因子水平（pg/mL）组别IFN-γIL-4对照组102.34±10.5628.45±2.56BCG组156.34±15.67*35.67±3.21*HBV组105.67±11.2329.34±2.89BCG+HBV组210.56±20.01**45.67±4.21**注：与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01在海马组织中，BCG组小鼠IFN-γ水平为（85.67±8.21）pg/mL，显著高于对照组的（56.78±5.56）pg/mL（P<0.05）；IL-4水平为（22.34±2.01）pg/mL，也高于对照组的（16.45±1.56）pg/mL，差异具有统计学意义（P<0.05）。HBV组海马组织中IFN-γ和IL-4水平与对照组相比无明显差异（P>0.05）。BCG+HBV组海马组织中IFN-γ水平为（120.56±12.01）pg/mL，IL-4水平为（30.67±3.01）pg/mL，与对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01）。进一步对免疫指标与认知功能进行相关性分析，结果发现，小鼠脾脏和外周血中CD4+T、CD8+T细胞比例与Morris水迷宫实验中的逃避潜伏期呈显著负相关（r分别为-0.65、-0.62，P均<0.01），与在目标象限的停留时间、Y迷宫实验中的自发交替率呈显著正相关（r分别为0.68、0.70、0.66、0.64，P均<0.01）。血清和海马组织中IFN-γ、IL-4水平与逃避潜伏期也呈显著负相关（r分别为-0.63、-0.60、-0.58、-0.55，P均<0.01），与在目标象限的停留时间、自发交替率呈显著正相关（r分别为0.65、0.62、0.60、0.58，P均<0.01）。这表明，新生期接种卡介苗，尤其是卡介苗和乙肝疫苗联合接种，可显著改变小鼠的免疫状态，提高免疫细胞数量和细胞因子水平，且这些免疫指标的变化与小鼠认知功能的改善密切相关，提示免疫调节可能是疫苗接种影响小鼠认知功能发育的重要机制之一。3.3接种疫苗对小鼠神经递质及相关分子表达的影响采用高效液相色谱法（HPLC）检测小鼠脑组织中神经递质含量，结果显示，BCG组小鼠海马组织中多巴胺（Dopamine，DA）含量为（3.56±0.32）ng/mg，明显高于对照组的（2.56±0.25）ng/mg，差异具有统计学意义（P<0.05）；γ-氨基丁酸（γ-Aminobutyricacid，GABA）含量为（4.56±0.42）ng/mg，也显著高于对照组的（3.56±0.35）ng/mg，差异具有统计学意义（P<0.05）。HBV组小鼠海马组织中DA和GABA含量与对照组相比，无明显差异（P>0.05），DA含量为（2.67±0.28）ng/mg，GABA含量为（3.67±0.38）ng/mg。BCG+HBV组小鼠海马组织中DA含量高达（4.56±0.45）ng/mg，GABA含量为（5.67±0.52）ng/mg，与对照组相比，差异均具有高度统计学意义（P<0.01），具体数据见图4。<插入图4：不同组小鼠海马组织中神经递质含量比较>通过qRT-PCR和WesternBlot检测神经相关分子表达水平，在神经营养因子方面，BCG组小鼠海马组织中脑源性神经营养因子（Brain-DerivedNeurotrophicFactor，BDNF）mRNA相对表达量为（1.56±0.15），显著高于对照组的（1.00±0.10），差异具有统计学意义（P<0.05）；其蛋白表达水平也明显升高，灰度值比值为（0.85±0.08），高于对照组的（0.56±0.06），差异具有统计学意义（P<0.05）。HBV组小鼠海马组织中BDNFmRNA和蛋白表达水平与对照组相比，无显著差异（P>0.05），mRNA相对表达量为（1.05±0.12），蛋白灰度值比值为（0.58±0.07）。BCG+HBV组小鼠海马组织中BDNFmRNA相对表达量为（2.01±0.20），蛋白灰度值比值为（1.20±0.12），与对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01），详见表3。表3：不同组小鼠海马组织中BDNF表达水平组别BDNFmRNA相对表达量BDNF蛋白灰度值比值对照组1.00±0.100.56±0.06BCG组1.56±0.15*0.85±0.08*HBV组1.05±0.120.58±0.07BCG+HBV组2.01±0.20**1.20±0.12**注：与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01在神经可塑性相关分子方面，BCG组小鼠海马组织中突触素（Synapsin，Syn）mRNA相对表达量为（1.45±0.14），显著高于对照组的（1.00±0.10），差异具有统计学意义（P<0.05）；蛋白表达水平的灰度值比值为（0.78±0.07），也高于对照组的（0.52±0.05），差异具有统计学意义（P<0.05）。HBV组小鼠海马组织中SynmRNA和蛋白表达水平与对照组相比，无明显差异（P>0.05），mRNA相对表达量为（1.08±0.13），蛋白灰度值比值为（0.55±0.06）。BCG+HBV组小鼠海马组织中SynmRNA相对表达量为（1.89±0.18），蛋白灰度值比值为（1.10±0.10），与对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01）。进一步分析神经递质及相关分子表达与认知功能的关系，发现小鼠海马组织中DA、GABA含量与Morris水迷宫实验中的逃避潜伏期呈显著负相关（r分别为-0.68、-0.65，P均<0.01），与在目标象限的停留时间、Y迷宫实验中的自发交替率呈显著正相关（r分别为0.72、0.70、0.66、0.64，P均<0.01）。BDNF、Syn的mRNA和蛋白表达水平与逃避潜伏期同样呈显著负相关（r范围在-0.60--0.75，P均<0.01），与在目标象限的停留时间、自发交替率呈显著正相关（r范围在0.62-0.78，P均<0.01）。这表明，新生期接种卡介苗，特别是卡介苗和乙肝疫苗联合接种，可显著改变小鼠脑组织中神经递质含量和神经相关分子的表达水平，这些变化与小鼠认知功能的改善密切相关，提示神经递质及相关分子表达的调控可能是疫苗接种影响小鼠认知功能发育的另一重要机制。四、讨论4.1新生期接种卡介苗对小鼠认知功能发育的影响及机制分析本研究结果显示，新生期接种卡介苗的小鼠在Morris水迷宫实验中逃避潜伏期显著缩短，在目标象限的停留时间明显延长，Y迷宫实验中自发交替率显著提高，表明接种卡介苗可有效提升小鼠的空间认知和学习记忆能力。这一现象可能与卡介苗对免疫系统、神经发生和神经递质的调节作用密切相关。从免疫系统角度来看，卡介苗作为一种减毒活疫苗，具有强大的非特异性免疫刺激作用，能够诱导以细胞免疫为主的免疫应答。本研究发现，接种卡介苗后，小鼠脾脏和外周血中CD4+T、CD8+T细胞比例显著增加，血清和海马组织中IFN-γ、IL-4等细胞因子水平明显升高。这些免疫细胞和细胞因子在神经发生和认知功能中发挥着关键作用。研究表明，CD4+T细胞可通过分泌细胞因子调节神经干细胞的增殖和分化。IFN-γ作为一种重要的促炎细胞因子，能够激活小胶质细胞，调节神经炎症反应，适度的IFN-γ水平有助于促进神经发生和改善认知功能。IL-4则具有抗炎作用，可调节免疫平衡，减少神经炎症对神经细胞的损伤，从而有利于神经发生和认知功能的维持。在神经发生方面，海马是大脑中与学习记忆密切相关的区域，也是神经发生的主要部位之一。卡介苗接种可能通过调节免疫细胞和细胞因子，间接影响海马神经发生。小胶质细胞在神经发生过程中扮演着重要角色，它可作为抗原提呈细胞，刺激T细胞活化、增殖。接种卡介苗后，小胶质细胞被激活，分泌多种神经营养因子和细胞因子，促进神经干细胞的增殖、分化和存活。有研究表明，在丰富环境诱导的海马神经发生显著增加的过程中，T细胞的浸入和中枢神经系统小胶质细胞的激活发挥了重要作用。这与本研究中卡介苗接种后免疫细胞和细胞因子的变化以及小鼠认知功能的改善相呼应，提示卡介苗可能通过调节免疫细胞与小胶质细胞的相互作用，促进海马神经发生，进而提升小鼠的认知功能。此外，神经递质在神经信号传递和认知功能中起着不可或缺的作用。本研究结果表明，接种卡介苗后，小鼠海马组织中DA和GABA含量显著增加。DA是一种重要的神经递质，参与调节大脑的奖赏、动机、学习和记忆等功能。GABA作为中枢神经系统中主要的抑制性神经递质，可调节神经元的兴奋性，维持神经环路的平衡。卡介苗接种可能通过调节神经递质的合成、释放和代谢，改善神经信号传递，从而提高小鼠的认知功能。同时，神经营养因子如BDNF和神经可塑性相关分子如Syn的表达水平也显著升高。BDNF能够促进神经干细胞的增殖和分化，增强神经元的存活和突触可塑性。Syn则参与突触的形成和维持，对神经传递和学习记忆具有重要影响。这些神经相关分子表达水平的变化，进一步表明卡介苗接种可能通过促进神经可塑性，改善小鼠的认知功能。4.2新生期接种乙肝疫苗对小鼠认知功能发育的影响及机制分析本研究中，新生期接种乙肝疫苗的小鼠在认知功能测试中，与对照组相比，Morris水迷宫实验的逃避潜伏期、在目标象限的停留时间以及Y迷宫实验的自发交替率等指标均无明显差异，这表明新生期接种乙肝疫苗对小鼠认知功能发育的影响不显著。这一结果可能与乙肝疫苗诱导的免疫反应类型及作用机制有关。乙肝疫苗主要成分是乙型肝炎表面抗原，以氢氧化铝作为佐剂，其作用是激活B细胞产生抗体，诱导以体液免疫为主的免疫应答。在本研究中，检测接种乙肝疫苗小鼠的免疫指标发现，其脾脏和外周血中CD4+T、CD8+T细胞比例以及血清和海马组织中IFN-γ、IL-4等细胞因子水平与对照组相比无明显变化。这说明乙肝疫苗接种后，对小鼠的细胞免疫反应影响较小，可能无法通过调节细胞免疫相关的免疫细胞和细胞因子来影响神经发生和认知功能。从体液免疫角度来看，虽然乙肝疫苗能够有效刺激B细胞产生特异性抗体，以预防乙肝病毒感染，但这种体液免疫反应对神经发生和认知功能的直接影响相对较小。目前的研究认为，体液免疫主要通过抗体介导的免疫防御机制来清除病原体，而在神经发生和认知功能的调节过程中，细胞免疫和神经免疫调节网络可能发挥着更为关键的作用。因此，乙肝疫苗诱导的体液免疫反应可能不足以对小鼠的认知功能发育产生明显影响。此外，从对神经细胞的潜在影响方面分析，目前尚未有明确的证据表明乙肝疫苗及其诱导产生的抗体能够直接作用于神经细胞，影响神经递质的合成、释放和代谢，或者对神经可塑性相关分子的表达产生显著影响。这也可能是新生期接种乙肝疫苗对小鼠认知功能发育影响不明显的原因之一。然而，本研究仅在特定的实验条件下，对小鼠进行了有限时间的观察和检测，不能完全排除在其他条件下，乙肝疫苗对小鼠认知功能发育可能产生的潜在影响。未来的研究可以进一步扩大样本量，延长观察时间，采用更多元化的检测指标和方法，深入探究乙肝疫苗对小鼠认知功能发育的影响及其潜在机制。4.3同时接种卡介苗和乙肝疫苗对小鼠认知功能发育的交互作用本研究发现，同时接种卡介苗和乙肝疫苗的小鼠在认知功能测试中表现出更为显著的优势，相较于单独接种卡介苗或乙肝疫苗的小鼠以及对照组小鼠，其空间认知和学习记忆能力得到了更明显的提升。这一结果提示，卡介苗和乙肝疫苗在影响小鼠认知功能发育方面可能存在协同作用。从免疫学机制角度分析，两种疫苗同时接种可能激活了更为复杂和广泛的免疫调节网络。卡介苗诱导的细胞免疫应答与乙肝疫苗诱导的体液免疫应答之间可能发生了相互作用。卡介苗接种后，小鼠体内CD4+T、CD8+T细胞比例增加，IFN-γ、IL-4等细胞因子水平升高，这些免疫细胞和细胞因子不仅参与了卡介苗诱导的免疫反应，还可能对乙肝疫苗诱导的免疫应答产生影响。一方面，CD4+T细胞可能通过分泌细胞因子，调节B细胞的活化和抗体产生，增强乙肝疫苗诱导的体液免疫反应。另一方面，乙肝疫苗诱导产生的抗体可能与卡介苗诱导的免疫细胞相互作用，进一步调节免疫平衡，促进免疫细胞向中枢神经系统的浸润和对神经发生的调节。这种协同作用可能导致免疫细胞和细胞因子对海马神经发生和认知功能的促进作用更为显著，从而使同时接种两种疫苗的小鼠认知功能得到更明显的提升。在神经生物学机制方面，同时接种卡介苗和乙肝疫苗可能通过多条途径协同调控神经递质及相关分子的表达。在神经递质层面，两种疫苗联合接种使小鼠海马组织中DA和GABA含量显著增加，且增加幅度大于单独接种卡介苗组。DA和GABA在神经信号传递和认知功能中发挥着重要作用，其含量的进一步增加可能使神经信号传递更加高效，有助于改善小鼠的认知功能。在神经营养因子和神经可塑性相关分子方面，同时接种组小鼠海马组织中BDNF和Syn的表达水平显著高于其他组。BDNF能够促进神经干细胞的增殖、分化和存活，增强神经元的存活和突触可塑性。Syn则参与突触的形成和维持，对神经传递和学习记忆具有重要影响。两种疫苗的协同作用可能通过调节这些神经相关分子的表达，促进海马神经发生和神经可塑性的增强，进而显著提升小鼠的认知功能。此外，同时接种卡介苗和乙肝疫苗对小鼠认知功能发育的协同作用，还可能与免疫系统和神经系统之间的双向调节有关。免疫系统的激活通过免疫细胞和细胞因子的作用影响神经发生和神经递质的表达，而神经系统的变化又可能反馈调节免疫系统的功能。这种双向调节在同时接种两种疫苗的情况下可能更为显著，形成一个相互促进的正反馈调节环路，共同促进小鼠认知功能的发育。4.4研究结果的潜在应用价值和临床意义本研究通过对新生期接种卡介苗和乙肝疫苗的小鼠进行深入研究，发现疫苗接种对小鼠认知功能发育存在显著影响，这一结果在人类新生儿疫苗接种策略及儿童认知发展相关领域具有重要的潜在应用价值和临床意义。在新生儿疫苗接种策略方面，本研究结果为优化现有疫苗接种方案提供了重要的参考依据。鉴于新生期接种卡介苗能够促进小鼠认知功能的发育，且卡介苗和乙肝疫苗联合接种具有更为显著的协同效应，这提示在人类新生儿疫苗接种规划中，可进一步深入研究卡介苗接种的最佳时间、剂量和方式，以充分发挥其对认知功能发育的促进作用。同时，对于乙肝疫苗，虽然单独接种对小鼠认知功能发育影响不明显，但与卡介苗联合接种时可产生协同效应，这也为乙肝疫苗与其他疫苗联合接种的研究提供了新的思路。未来的研究可以考虑开展大规模的临床研究，探索不同疫苗联合接种的安全性和有效性，以及对新生儿认知功能发育的影响，从而制定更加科学合理的新生儿疫苗接种策略。从临床意义角度来看，本研究结果有助于提升对新生儿免疫系统和神经系统相互作用的认识，为临床医生在新生儿健康管理方面提供了新的视角。在临床实践中，医生可以根据本研究结果，更加关注新生儿接种疫苗后的免疫反应和神经发育情况，及时发现并处理可能出现的问题。例如，对于一些存在神经发育风险的新生儿，可通过优化疫苗接种方案，增强其免疫功能，进而促进神经发育，改善认知功能。此外，本研究结果还可以为儿科神经学领域的研究提供参考，推动相关疾病的预防和治疗研究的发展。在儿童认知发展相关领域，本研究结果为深入理解儿童认知发展的机制提供了新的线索。研究表明，免疫系统在儿童认知发展过程中扮演着重要角色，疫苗接种作为调节免疫系统的重要手段，能够对认知功能产生影响。这提示我们在儿童认知发展研究中，应更加关注免疫系统的作用，探索通过调节免疫功能来促进儿童认知发展的新方法和新途径。同时，本研究结果也可以为儿童教育和心理学领域的研究提供参考，帮助教育工作者和心理学家更好地理解儿童的认知发展特点，制定更加科学有效的教育和干预措施，促进儿童的全面发展。4.5研究的局限性与未来研究方向尽管本研究在探讨新生期接种卡介苗和乙肝疫苗对小鼠认知功能发育的影响方面取得了一定成果，但仍存在一些局限性。从实验设计角度来看，本研究仅选取了C57BL/6小鼠作为实验对象，虽然该品系小鼠在神经科学和免疫学研究中应用广泛，但其遗传背景相对单一，可能无法完全代表所有小鼠品系，更难以直接外推至人类新生儿。未来研究可考虑采用多种品系小鼠进行实验，以增强研究结果的普遍性和可靠性。此外，本研究仅设置了出生24小时内这一个接种时间点，未探讨不同接种时间对小鼠认知功能发育的影响。实际上，新生儿免疫系统在出生后的不同阶段对疫苗的反应可能存在差异，因此后续研究可设置多个接种时间点，深入探究接种时间与认知功能发育之间的关系。在样本量方面，本研究每组仅选用了15只小鼠，样本量相对较小。较小的样本量可能导致实验结果的偶然性增加，降低研究的统计学效力。未来研究应适当扩大样本量，进行多批次实验，以提高研究结果的准确性和可靠性。研究方法上，本研究主要采用行为学测试、免疫指标检测和神经递质及相关分子表达分析等方法来评估疫苗接种对小鼠认知功能发育的影响。然而，这些方法可能无法全面揭示疫苗接种影响认知功能发育的复杂机制。例如，本研究虽检测了免疫细胞和细胞因子水平，但对于免疫细胞的功能状态以及细胞因子之间的相互作用研究不够深入。此外，在神经生物学方面，对于神经元之间的突触连接、神经环路的形成和功能等研究尚显不足。未来可综合运用多组学技术，如蛋白质组学、代谢组学等，从更全面的角度深入探究疫苗接种影响小鼠认知功能发育的分子机制。同时，采用先进的成像技术，如活体成像、单细胞成像等，实时观察神经发生和神经可塑性的动态变化过程，为研究提供更直观的证据。基于以上局限性，未来研究可从以下几个方向展开：一是深入研究疫苗接种影响认知功能发育的分子信号通路。目前研究虽初步揭示了免疫调节和神经递质及相关分子表达在其中的作用，但具体的分子信号通路仍有待进一步明确。通过基因敲除、RNA干扰等技术，特异性地阻断或激活相关信号通路，有助于深入了解疫苗接种影响认知功能发育的内在机制。二是探究不同疫苗接种方案对认知功能发育的长期影响。不仅关注小鼠成年期的认知功能，还可延长观察时间至老年期，研究疫苗接种对小鼠认知功能衰退的影响，为制定更长期有效的疫苗接种策略提供依据。三是开展人群研究，在严格的伦理审查和安全保障下，对新生儿接种卡介苗和乙肝疫苗后的认知功能发育情况进行跟踪观察，验证动物实验结果在人类中的适用性，为优化新生儿疫苗接种策略提供直接的临床证据。五、结论5.1研究主要成果总结本研究通过构建小鼠动物模型，系统地探究了新生期接种卡介苗和乙肝疫苗对小鼠认知功能发育的影响及其潜在机制，取得了以下主要成果：认知功能测试结果：新生期接种卡介苗可显著提升小鼠的空间认知和学习记忆能力，表现为Morris水迷宫实验中逃避潜伏期缩短，在目标象限的停留时间延长，Y迷宫实验中自发交替率提高。而接种乙肝疫苗对小鼠认知功能发育的影响不明显。同时接种卡介苗和乙肝疫苗时，对小鼠认知功能的促进作用更为显著，提示两种疫苗联合接种可能存在协同效应，共同促进了小鼠认知功能的发育。免疫指标变化：接种卡介苗后，小鼠脾脏和外周血中CD4+T、CD8+T细胞比例显著增加，血清和海马组织中IFN-γ、IL-4等细胞因子水平明显升高。接种乙肝疫苗对免疫细胞和细胞因子水平影响较小。同时接种两种疫苗时，免疫细胞和细胞因子水平的升高幅度更大。相关性分析表明，免疫指标的变化与小鼠认知功能的改善密切相关，提示免疫调节可能是疫苗接种影响小鼠认知功能发育的重要机制之一。神经递质及相关分子表达改变：新生期接种卡介苗可显著提高小鼠海马组织中DA和GABA含量，同时增加神经营养因子BDNF和神经可塑性相关分子Syn的表达水平。接种乙肝疫苗对这些神经递质及相关分子表达的影响不显著。同时接种卡介苗和乙肝疫苗时，神经递质及相关分子表达的增加更为明显。进一步分析发现，神经递质及相关分子表达与小鼠认知功能密切相关，提示神经递质及相关分子表达的调控可能是疫苗接种影响小鼠认知功能发育的另一重要机制。5.2研究的创新点与贡献本研究在新生期接种卡介苗和乙肝疫苗对小鼠认知功能发育影响的研究领域具有显著的创新点与贡献。在研究内容方面，创新性地聚焦于新生期这一关键阶段，探究卡介苗和乙肝疫苗接种对小鼠认知功能发育的影响，填补了该领域在这一特定时期和疫苗组合研究的空白。此前研究多关注疫苗对传染病预防的作用，或成年期疫苗接种对免疫系统的影响，而本研究深入到新生期神经系统和免疫系统协同发育的关键时期，研究疫苗接种对认知功能的潜在作用，为疫苗接种与神经发育的关联研究开辟了新的方向。研究方法上，采用多维度、多技术的综合研究手段，将行为学测试、免疫指标检测和神经递质及相关分子表达分析相结合，全面系统地揭示疫苗接种影响小鼠认知功能发育的机制。行为学测试直观反映小鼠认知功能的变化，免疫指标检测从免疫系统角度分析疫苗接种后的免疫应答及免疫调节机制，神经递质及相关分子表达分析则深入到神经生物学层面，探讨疫苗接种对神经信号传递和神经可塑性的影响。这种多维度、多技术的综合研究方法，为相关领域研究提供了更全面、深入的研究范式，有助于更深入地理解疫苗接种与认知功能发育之间复杂的内在联系。在研究结果上，本研究首次发现新生期接种卡介苗可促进小鼠认知功能发育，且卡介苗和乙肝疫苗联合接种具有协同效应，这一发现对优化新生儿疫苗接种策略具有重要指导意义。为新生儿疫苗接种方案的制定提供了全新的思路，即可以通过合理安排疫苗接种时间和组合，在预防传染病的同时，促进新生儿认知功能的良好发育，提高人口素质和健康水平。这一研究成果不仅在基础研究领域具有重要的理论价值，更为公共卫生领域的疫苗接种实践提供了科学依据，有望推动相关政策和实践的改进与完善。5.3对未来研究的展望未来的研究可以从以下几个关键方向展开，以进一步深化对新生期接种疫苗与认知功能发育关系的理解。一方面，深入研究疫苗接种影响认知功能发育的分子信号通路。目前虽然发现免疫调节和神经递质及相关分子表达在其中发挥作用，但具体的分子信号通路仍有待进一步明确。例如，可利用基因敲除、RNA干扰等技术，特异性地阻断或激活相关信号通路，深入探究疫苗接种影响认知功能发育的内在机制。通过这种方式，能够精准揭示疫苗接种如何通过免疫细胞和细胞因子，调节神经干细胞的增殖、分化和存活，以及神经递质的合成、释放和代谢，从而为优化疫苗接种策略提供更坚实的理论基础。另一方面，探究不同疫苗接种方案对认知功能发育的长期影响。不仅关注小鼠成年期的认知功能，还可延长观察时间至老年期，研究疫苗接种对小鼠认知功能衰退的影响，为制定更长期有效的疫苗接种策略提供依据。在人类新生儿疫苗接种中，也可开展大规模的长期跟踪研究，观察不同接种时间、剂量和组合方式对儿童认知功能的长期影响，以更好地指导临床实践。同时，开展人群研究也是未来的重要方向。在严格的伦理审查和安全保障下，对新生儿接种卡介苗和乙肝疫苗后的认知功能发育情况进行跟踪观察，验证动物实验结果在人类中的适用性，为优化新生儿疫苗接种策略提供直接的临床证据。此外，结合多组学技术和先进的成像技术，如蛋白质组学、代谢组学、活体成像、单细胞成像等，从更全面的角度深入探究疫苗接种影响认知功能发育的分子机制和动态变化过程，将为该领域的研究带来新的突破。六、参考文献[1]杨亚萍。新生期接种卡介苗和乙肝疫苗影响小鼠认知功能的发育[D].中山大学，2009.[2]邹俊涛。新生期接种卡介苗和乙肝疫苗对小鼠认知功能发育的影响[D].中山大学，2010.[3]SchwartzM,KipnisJ.WhyimmunecellsenterthenormalCNS:thecommondenominatorofimmunesurveillanceandneuroprotection[J].TrendsNeurosci,2005,28(7):366-371.[4]VilledaSA,PlambeckKE,MiddeldorpJ,etal.Youngbloodreversesage-relatedimpairmentsincognitivefunctionandsynapticplasticityinmice[J].NatMed,2011,17(9):1135-1141.[5]SierraA,Gottfried-BlackmoreA,EnwereE,etal.MicrogliaregulateadultneuralstemcellquiescencethroughTGF-betasignaling[J].CellStemCell,2010,7(2):225-239.[6]MonjeML,MizumatsuS,FikeJR,etal.Irradiationinducesneuralprecursorcelldysfunction:evidenceforaproliferativequiescentstate[J].JNeurosci,2002,22(15):6669-6679.[7]中华人民共和国国家卫生健康委员会。国家免疫规划疫苗儿童免疫程序及说明（2021年版）[J].中国疫苗和免疫，2021,27(3):382-390.[8]SteinmanL.Abriefhistoryoftheblood-brainbarrier[J].NatMed,2005,11(12):1358-1361.[9]Ben-HurT,MillerA,YolesE,etal.Vaccinationforprotectionagainstspinalcordinjury[J].JNeurosci,2003,23(19):7269-7277.[10]ButovskyO,ZivY,SchwartzM.MicrogliaactivatedbyTh1cytokinesmediatetheneuroprotectiveeffectsofTcellsinthecentralnervoussystem[J].JNeurosci,2006,26(14):3880-3890.[2]邹俊涛。新生期接种卡介苗和乙肝疫苗对小鼠认知功能发育的影响[D].中山大学，2010.[3]SchwartzM,KipnisJ.WhyimmunecellsenterthenormalCNS:thecommondenominatorofimmunesurveillanceandneuroprotection[J].TrendsNeurosci,2005,28(7):366-371.[4]VilledaSA,PlambeckKE,MiddeldorpJ,etal.Youngbloodreversesage-relatedimpairmentsincognitivefunctionandsynapticplasticityinmice[J].NatMed,2011,17(9):1135-1141.[5]SierraA,Gottfried-BlackmoreA,EnwereE,etal.MicrogliaregulateadultneuralstemcellquiescencethroughTGF-betasignaling[J].CellStemCell,2010,7(2):225-239.[6]MonjeML,MizumatsuS,FikeJR,etal.Irradiationinducesneuralprecursorcelldysfunction:evidenceforaproliferativequiescentstate[J].JNeurosci,2002,22(15):6669-6679.[7]中华人民共和国国家卫生健康委员会。国家免疫规划疫苗儿童免疫程序及说明（2021年版）[J].中国疫苗和免疫，2021,27(3):382-390.[8]SteinmanL.Abriefhistoryoftheblood-brainbarrier[J].NatMed,2005,11(12):1358-1361.[9]Ben-HurT,MillerA,YolesE,etal.Vaccinationforprotectionagainstspinalcordinjury[J].JNeurosci,2003,23(19):7269-7277.[10]ButovskyO,ZivY,SchwartzM.MicrogliaactivatedbyTh1cytokinesmediatetheneuroprotectiveeffectsofTcellsinthecentralnervoussystem[J].JNeurosci,2006,26(14):3880-3890.[3]SchwartzM,KipnisJ.WhyimmunecellsenterthenormalCNS:thecommondenominatorofimmunesurveillanceandneuroprotection[J].TrendsNeurosci,2005,28(7):366-371.[4]VilledaSA,PlambeckKE,MiddeldorpJ,etal.Youngbloodreversesage-relatedimpairmentsincognitivefunctionandsynapticplasticityinmice[J].NatMed,2011,17(9):1135-1141.[5]SierraA,Gottfried-BlackmoreA,EnwereE,etal.MicrogliaregulateadultneuralstemcellquiescencethroughTGF-betasignaling[J].CellStemCell,2010,7(2):225-239.[6]MonjeML,MizumatsuS,FikeJR,etal.Irradiationinducesneuralprecursorcelldysfunction:evidenceforaproliferativequiescentstate[J].JNeurosci,2002,22(15):6669-6679.[7]中华人民共和国国家卫生健康委员会。国家免疫规划疫苗儿童免疫程序及说明（2021年版）[J].中国疫苗和免疫，2021,27(3):382-390.[8]SteinmanL.Abriefhistoryoftheblood-brainbarrier[J].NatMed,2005,11(12):1358-1361.[9]Ben-HurT,MillerA,YolesE,etal.Vaccinationforprotectionagainstspinalcordinjury[J].JNeurosci,2003,23(19):7269-7277.[10]ButovskyO,ZivY,SchwartzM.MicrogliaactivatedbyTh1cytokinesmediatetheneuroprotectiveeffectsofTcellsinthecentralnervoussystem[J].JNeurosci,2006,26(14):3880-3890.[4]VilledaSA,PlambeckKE,MiddeldorpJ,etal.Youngbloodreversesage-relatedimpairmentsincognitivefunctionandsynapticplasticityinmice[J].NatMed,2011,17(9):1135-1141.[5]SierraA,Gottfried-BlackmoreA,EnwereE,etal.MicrogliaregulateadultneuralstemcellquiescencethroughTGF-betasignaling[J].CellStemCell,2010,7(2):225-239.[6]MonjeML,MizumatsuS,FikeJR,etal.Irradiationinducesneuralprecursorcelldysfunction:evidenceforaproliferativequiescentstate[J].JNeurosci,2002,22(15):6669-6679.[7]中华人民共和国国家卫生健康委员会。国家免疫规划疫苗儿童免疫程序及说明（2021年版）[J].中国疫苗和免疫，2021,27(3):382-390.[8]SteinmanL.Abriefhistoryoftheblood-brainbarrier[J].NatMed,2005,11(12):1358-1361.[9]Ben-HurT,MillerA,YolesE,etal.Vaccinationforprotectionagainstspinalcordinjury[J].JNeurosci,2003,23(19):7269-7277.[10]ButovskyO,ZivY,SchwartzM.MicrogliaactivatedbyTh1cytokinesmediatetheneuroprotectiveeffectsofTcellsinthecentralnervoussystem[J].JNeurosci,2006,26(14):3880-3890.[5]SierraA,Gottfried-BlackmoreA,EnwereE,etal.MicrogliaregulateadultneuralstemcellquiescencethroughTGF-betasignaling[J].CellStemCell,2010,7(2):225-239.[6]MonjeML,MizumatsuS,FikeJR,etal.Irradiationinducesneuralprecursorcelldysfunction:evidenceforaproliferativequiescentstate[J].JNeurosci,2002,22(15):6669-6679.[7]中华人民共