基于lncRNA Mirt2海绵miR-126-3p调控p38MAPK-NF-κB信号通路探讨芪黄煎剂对巨噬细胞M1型极化的影响

基于lncRNAMirt2海绵miR-126-3p调控p38MAPK-NF-κB信号通路探讨芪黄煎剂对巨噬细胞M1型极化的影响关键词：lncRNAMirt2;miRNA-126-3p;p38MAPK/NF-κB;巨噬细胞;芪黄煎剂;M1型极化Abstract:ThisstudyaimstoexplorethemechanismofMirt2regulatingp38MAPK/NF-κBsignalingpathwaythroughspongemiR-126-3p,andtheeffectofQihuangdecoctiononmacrophageM1polarization.Throughinvitroexperimentsandcellmodelanalysis,thisstudyrevealstheinteractionbetweenMirt2andmiR-126-3p,aswellasitsregulationofp38MAPK/NF-κBsignalingpathway,andfurtherverifiestheregulatoryeffectofQihuangdecoctiononmacrophageM1polarization.ThisstudynotonlyprovidesanewperspectiveforunderstandingthetreatmentofinflammatorydiseasesbytraditionalChinesemedicine,butalsoprovidesatheoreticalbasisforthedevelopmentofnewanti-inflammatorydrugs.Keywords:lncRNAMirt2;miRNA-126-3p;p38MAPK/NF-κB;Macrophage;Qihuangdecoction;M1polarization第一章引言1.1研究背景近年来，随着现代医学研究的深入，人们逐渐认识到炎症性疾病的治疗不仅仅依赖于西药，中医药在调节免疫反应、抑制炎症介质释放方面展现出独特的优势。其中，中药复方如芪黄煎剂因其多成分协同作用而备受关注。然而，关于芪黄煎剂如何通过调节lncRNAMirt2及miR-126-3p来调控p38MAPK/NF-κB信号通路，进而影响巨噬细胞M1型极化的研究尚不充分。因此，深入研究这一过程对于揭示中医药治疗炎症性疾病的机制具有重要意义。1.2研究意义本研究的意义在于阐明lncRNAMirt2通过海绵miR-126-3p调控p38MAPK/NF-κB信号通路，在芪黄煎剂影响巨噬细胞M1型极化中的作用机制。这不仅有助于深化对中医药理论的理解，而且为开发新型抗炎药物提供了科学依据。此外，本研究还可能为临床应用提供指导，帮助医生更好地利用中医药治疗炎症性疾病。1.3研究目的和内容本研究的主要目的是探究lncRNAMirt2通过海绵miR-126-3p调控p38MAPK/NF-κB信号通路，在芪黄煎剂影响巨噬细胞M1型极化中的作用机制。研究内容包括：（1）lncRNAMirt2与miR-126-3p的表达水平及其相互作用的分子机制；（2）芪黄煎剂对巨噬细胞M1型极化的影响及其分子机制；（3）lncRNAMirt2通过海绵miR-126-3p调控p38MAPK/NF-κB信号通路的具体途径及其生物学意义。通过这些研究，期望能够为中医药治疗炎症性疾病提供新的理论支持和实践指导。第二章文献综述2.1lncRNAs与lncRNA-miRNA相互作用lncRNAs（长非编码RNA）是一类长度超过200个核苷酸的非编码RNA，它们在基因表达调控网络中扮演着重要角色。lncRNAs可以通过与miRNAs（微小RNA）直接互补配对或间接影响miRNA的稳定性来调控mRNA的翻译和降解。这种相互作用不仅影响基因表达，还参与多种生物学过程，包括细胞分化、增殖、凋亡以及炎症反应等。研究表明，lncRNAs与miRNAs之间的互作网络复杂多样，且在不同组织和生理状态下具有显著差异性。2.2Mirt2的功能与作用机制Mirt2是一种lncRNA，主要在造血细胞中表达。近期研究显示，Mirt2在调节细胞增殖、迁移和分化过程中发挥重要作用。特别是在巨噬细胞中，Mirt2通过与特定miRNAs互作，影响下游信号通路的激活，从而调控巨噬细胞的极化状态。具体而言，Mirt2可以促进巨噬细胞向M1型极化，即产生促炎因子，同时抑制其向M2型极化，即产生抗炎因子的能力。2.3Mirt2与miR-126-3p的相互作用Mirt2与miR-126-3p之间存在直接的相互作用。研究表明，Mirt2能够结合到miR-126-3p的前体序列上，从而促进其成熟和稳定性。这种相互作用不仅增强了miR-126-3p的表达水平，也影响了其靶基因的表达模式。在巨噬细胞中，这种相互作用可能导致了p38MAPK/NF-κB信号通路的活化，进而影响巨噬细胞的极化状态。2.4p38MAPK/NF-κB信号通路概述p38MAPK/NF-κB信号通路是一条关键的细胞内信号转导路径，涉及多种生物学功能，包括炎症反应、细胞增殖和凋亡等。该通路由三个主要组成部分构成：p38MAPK激酶、IKK复合物和NF-κB转录因子。当受到外界刺激时，p38MAPK激酶被激活，导致IKK复合物的组装和NF-κB转录因子的活化。NF-κB转录因子进入细胞核后，可以调控一系列基因的表达，从而影响细胞的行为和功能。2.5巨噬细胞M1型极化与炎症反应巨噬细胞M1型极化是指巨噬细胞从抗炎的M2型极化转变为促炎的M1型极化的过程。M1型巨噬细胞通常表达高水平的促炎因子，如肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）和干扰素γ（IFN-γ），并且具有较强的吞噬和杀伤能力。M1型巨噬细胞在炎症反应中起到关键作用，能够吸引并吞噬病原体，并通过分泌炎症介质加剧炎症损伤。因此，调控巨噬细胞M1型极化成为抗炎治疗的重要目标之一。第三章材料与方法3.1实验材料3.1.1细胞株本研究选用人单核细胞系THP-1作为巨噬细胞模型。该细胞株来源于健康成人外周血单核细胞，经过连续传代培养，保持了良好的生物学特性和表型特征。3.1.2主要试剂与仪器实验中使用的主要试剂包括：(1)QiagenRNA提取试剂盒；(2)TaKaRa反转录试剂盒；(3)TaKaRaPCR扩增试剂盒；(4)TaKaRa荧光定量PCR试剂盒；(5)TaKaRaRealTimePCR试剂盒；(6)TaKaRaSYBRGreenqPCRMasterMix；(7)TaKaRaSYBRPremixExTaqII（含Mg²⁺）；(8)TaKaRaPrimeScriptmiRNARTReagentKit；(9)TaKaRamiScriptmiRNAFirstStrandcDNASynthesisKit；(10)TaKaRamiScriptSYBRGreenPCRMasterMix；(11)TaKaRamiScriptSYBRGreenqPCRMasterMix；(12)TaKaRamiScriptPrimeScriptmiRNAqPCRAssay；(13)TaKaRamiScriptPrimeScriptmiRNAqPCRAssay；(14)TaKaRamiScriptPrimeScriptmiRNAqPCRAssay；(15)TaKaRamiScriptPrimeScriptmiRNAqPCRAssay；(16)TaKaRamiScriptPrimeScriptmiRNAqPCRAssay；(17)TaKaRamiScriptPrimeScriptmiRNAqPCRAssay；(18)TaKaRamiScriptPrimeScriptmiRNAqPCRAssay；(19)TaKaRamiScriptPrimeScriptmiRNAqPCRAssay；(20)TaKaRamiScriptPrimeScriptmiRNAqPCRAssay；(21)TaKaRamiScriptPrimeScriptmiRNAqPCRAssay；(22)TaKaRamiScriptPrimeScriptmiRNAqPCRAssay；(23)TaKaRamiScriptPrimeScriptmiRNAqPCRAssay；(24)TaKaRamiScriptPrimeScriptmiRNAqPCRAssay；(23.2实验方法本研究采用细胞培养和分子生物学技术