CN118834285B 带有人ColⅢ来源稳定片段的重组类人胶原蛋白多肽、制备方法及其用途 （深圳市中科美源生物科技有限公司）

司带有人ColⅢ来源稳定片段的重组类人胶原ColⅢ来源稳定片段的重组类人胶原蛋白多肽、制备方法及其用途。本公开通过截取人I型胶原10～25次的串联重复作为N端序列，并采用来源于人III型胶原的序列GPPGAPGPCCGGV作为C端序建的重组类人胶原蛋白多肽可在原核表达系统降低了活性人源胶原蛋白的生产成本并提升了23.根据权利要求2所述的生物材料，其特征在于，所述重组质粒的原始质粒为pET32a所述的(ü)重组表达载体获得重组类人胶原蛋白多肽；或者，培养权利要求2所述的(ⅲ)转5.权利要求1所述的重组类人胶原蛋白多肽，或者，的重组类人胶原蛋白多肽在制备胶原蛋白凝述辅助活性功能分子包括葡萄糖酸亚铁和/或3[0001]本公开属于生物医药领域，涉及一种带有人ColⅢ来源稳定片段的重组类人胶原4表达本公开第二方面所述的(i)核酸分子或(ⅱ)重组表达载体获得重组类人胶原蛋白多面所述制备方法制备得到的重组类人胶原蛋白多肽在制备胶原蛋白凝胶剂或胶原蛋白注[0023]本公开通过截取人I型胶原的ColⅠα1Gly485～Pro514序列(GERGGPGSRGFPGA建的重组类人胶原蛋白多肽可在原核表达系统中正确的表达具有三重螺旋结构的活性胶[0024]本公开探索出了表达上述重组类人胶原蛋白多肽在原核[0025]使用本公开所述的重组类人胶原蛋白多肽制备成胶原蛋白凝胶或者注射用胶原5推断，本实施例中选定的C端序列对于重组类人胶原蛋白的三重螺旋结构的稳定性有着重6科技有限公司以质粒pET32a(+)为原始质粒(质粒图谱如图3所示)构建了用以表达重组类止密码的核苷酸序列(TAATGA)和编码XhoI限制性内切酶酶切位点的核苷酸序列[0050]通过化学合成的方法合成步骤2.1中设计的编码重组类人胶原蛋白的核酸分子。I对部分重组质粒进行双酶切；而后对扩增产物、酶切产物和未经酶切的重组质粒进行[0052]GGTACCGACGATGATGATAAAGGTGAAAGGGGAGGGCCGGGCAGCCGCGGATTCCCGGGTGCCGATGGTGTGGCCGGCCCCAAGGGTCCGGCAGGCGAACGCGGGTCCCCGGGCGAGCGCGGTGGTCCGGGCTCCAGGGGCTTCCCTGGCGCAGACGGCGTGGCGGGCCCGAAAGGCCCGGCGGGTGAACGTGGAAGCCCGGGGGAGCGTGGTGGCCCGGGCAGCAGAGGCTTCCCGGGCGCGGATGGTGTGGCCGGCCCGAAAGGTCCGGCGGGTGAGCGTGGTTCGCCGGGCGAACGAGGTGGTCCGGGCTCTCGTGGCTTCCCGGGAGCGGATGGCGTGGCTGGTCCGAAAGGTCCGGCTGGTGAACGTGGAAGCCCGGGAGAACGTGGTGGTCCGGGCAGCCGTGGGTTCCCAGGTGCTGACGGCGTCGCGGGTCCCAAGGGCCCAGCGGGTGAGCGTGGTTCTCCGGGCGAACGTGGCGGTCCGGGTAGTCGTGGCTTTCCGGGTGCTGACGGCGTGGCGGGTCCGAAGGGTCCGGCGGGAGAGCGTGGCAGCCCGGGTGAGCGTGGTGGTCCGGGCAGCCGTGGATTCCCGGGTGCCGACGGCGTTGCAGGCCCAAAGGGTCCTGCCGGTGAGCGCGGCTCCCCGGGTGAACGCGGTGGTCCGGGCAGCCGCGGTTTCCCGGGTGCAGATGGTGTTGCGGGCCCCAAGGGCCCAGCGGGTGAGCGTGGTAGCCCAGGCGAACGTGGTGGTCCGGGGTCTCGTGGGTTCCCGGGCGCGGATGGTGTGGCTGGTCCGAAAGGCCCGGCGGGCGAGCGTGGCTCCCCGGGTGAGCGTGGCGGTCCGGGGTCCCGCGGTTTTCCTGGCGCTGACGGCGTGGCGGGCCCGAAAGGCCCGGCGGGCGAACGTGGTTCTCCGGGTGAGCGCGGTGGCCCAGGGTCCCGTGGTTTTCCGGGTGCAGACGGTGTTGCCGGTCCGAAGGGTCCGGCTGGTGAACGTGGCTCGCCAGGTGAACGCGGCGGTCCGGGCTCGCGTGGTTTCCCGGGAGCGGACGGTGTAGCGGGTCCGAAGGGTCCAGCGGGGGAGCGCGGTAGCCCGGGTGAGAGAGGTGGGCCGGGTTCACGCGGCTTTCCGGGTGCGGATGGTGTTGCGGGTCCGAAAGGACCCGCGGGCGAGCGCGGATCTCCGGGTGAACGTGGTGGTCCAGGCAGCCGTGGCTTTCCGGGTGCGGACGGCGTTGCAGGTCCTAAAGGCCCGGCGGGCGAACGTGGCAGCCCGGGT7GAGCGTGGTGGTCCGGGTAGCCGCGGTTTTCCGGGTGCAGACGGTGTCGCAGGACCGAAAGGTCCAGCTGGCGAACGTGGCTCCCCGGGCGAACGCGGTGGCCCGGGTAGCCGTGGTTTTCCGGGGGCCGATGGCGTTGCAGGCCCCAAGGGCCCGGCTGGAGAGAGAGGAAGCCCGGGCCCTCCG[0054]本实施例使用原核表达系统对实施例2构建的重组表达质粒进行胶原蛋白表达，转化质粒的Rosetta空菌作为空白对照，将含有空载pET32a(+)质粒的Rosetta菌为阴性对0.5MNaCl+40mM咪唑，pH7.4平衡预装柱后将样品上样；用20mMPB+0.5MNaCl+40mM咪唑，增加导致胶原自组装成高密度纤维基质，随后按照常规的冻干工艺制备成胶原蛋白冻干[0061]本实施例采用体外实验对实施例1得到的重组人源胶原蛋白1的体外细胞修复能[0062]本实施例在12孔板中，使用添加10％胎牛血清的DMEM培养基(Dulbecco'8收集相机图片(TiEsseLabPrimoCamHD5.0与传感器微米MT9P001，并使用ImageJ软件对据表示每个实验时间内经处理过的细胞和未经处理过的细胞的伤口边缘距离与初始划痕序列(GERGGPGSRGFPGADGVAGPKGPAGERGSP)作为基序，人源胶原蛋白多肽，本公开构建的重组I型人源胶原蛋白多肽可在原核表达系统中正确的[0071]本公开探索出了表达上述重组I型人源胶原蛋白多肽的表达宿主和发酵条件，获[0072]使用本公开所述的重组I型人源胶原蛋白多肽制备成胶原蛋白凝胶或者注射用重9