CN119385974A 一种抑制肿瘤转移的纳米制剂、制备方法及应用 （潍坊科技学院）

固醇琥珀酸单酯、胆固醇、咪唑基一胆固醇和DSPEPEG2000CS；内层核结构负载阿司匹林和肿瘤细胞血小板NET聚集体，本申请的纳米球2卵磷脂、二油酰基磷脂酰乙醇胺、胆固醇琥珀酸单酯、胆固醇、咪唑基_胆固醇和DSPE_PEG2000_CS的质量比为（35~4555~6510~2010~205~151~5以所述脂质体的结构式如下：38.如权利要求1~5中任一项所述的抑制肿瘤转移的纳米制剂或如权利要求6~7中任一项所述的抑制肿瘤转移的纳米制剂的制备方法所制备的纳米制剂在制备治疗肿瘤药物和4以所述脂质体球体的总质量计，所述脂质体球体负载所述阿司匹林的质量百分含量为1%~M05。6[0017]在一些实施例中，所述抑制肿瘤转移的纳米制剂的制备方法还包括制备纳米球[0018]本申请实施例进一步提供了上述的抑制肿瘤转移的纳米制剂或上述的抑制肿瘤转移的纳米制剂的制备方法所制备的纳米制剂在制备治疗肿瘤药物和抑制肿瘤转移药物图3为本申请实施例中制备的A&E/CPL和D/GN的理化性质表征，其中，A图为A&E/图6为本申请实施例制备的A&E/CPL在PBS溶液及DMEM培养基中的7天稳定性，其7为E_Cadherin和Vimentin定量图16为本申请实施例制备的A&E/CPL和D/GN在荷瘤小鼠体内的生物分布测试结图18为本申请采用D/GN联合A&E/CPL对H22+PLT+NET皮下移植瘤的抗肿瘤评价结图19为本申请采用D/GN联合A&E/CPL对H22+PLT+NET皮下移植瘤治疗效果的评价图为组织中E_Cadherin和Vimentin的Westernblot分析结果；F图为E_Cadherin和图23为本申请采用D/GN联合A&E/CPL对8用马尔文粒度电位仪分别测量了A&E/CPL和D/GN的粒径分布和zeta电位。将A&E/PBS或DMEM培养基中的粒径变化。将A&E/CPL和D/GN用PBS稀释30倍，用醋酸双氧铀进行负。9用摘除眼球采血法取健康小鼠血液1mL置于离心管中，3500rpm离心10min后去上用生理盐水稀释获得2%的红细胞悬液备用。将纳米制剂与红细胞混悬液混合获得不同浓度和生理盐水分别作阳性和阴性对照，将所有样品放入恒温震荡培养箱孵育2h，然后将样品1和A2分别代表阳性对照组、实验组和阴性对照为考察肿瘤细胞对纳米制剂的摄取情况，将HuH_7细胞接种于细胞培养皿中（5x球体（D/GNDOX浓度为10μg/mL药物处理1h。PBS洗涤三次后，组织细胞固定液固定采用MTT法检测不同制剂对肿瘤细胞的毒性。为了更好地评价药物在肿瘤微环境用组织细胞固定液固定迁入到小室下层的细胞20min，接着用PBS冲洗3次，结晶紫染色鼠体内的生物分布。将混合细胞悬液皮下注射到BALB/c小鼠中，建立H22+PLT+NET荷瘤模[0039]为了评价D/GN的通透性，建立H22+PLT+NET荷瘤小鼠模型。当肿瘤体积约180mm3为了评估A&E/CPL和D/GN的肝癌治疗效果，建立H22+PLT+NET皮下荷瘤小鼠模型，为了评估A&E/CPL和D/GN对肺部中性粒细胞和中性粒细胞胞外陷阱NET形成的影采用眼球取血法收集BALB/c小鼠全血1mL于含50μL肝素钠抗凝剂的离心管中，在卵磷脂加入的过多或过少都会造成包封效率不佳，在1mL全血中所取血小板:250mg卵磷脂[0047]DSPE‑PEG2000‑CS的制备：DSPE‑PEG2000‑NH2经过EDC与NHS活化后，与硫酸软骨素[0056]本申请制备的A&E/CPL理化性质表征如图4所示。图4为本申请实施例制备的A&E/[0057]图6为本申请实施例制备的A&E/CPL在PBS溶液及DMEM培养基中的7天稳定性，其定不同pH条件下A&E/CPL中ASP的释放速率，再次验证其对pH的敏感性。如图9所示，在pH=5.5的条件下，ASP在48h内的累计释放率为75.9%，显著高于pH=6.0（48.8%）和pH=7.4[0062]图11为本申请实施例制备的A&E/CPL的水平凝胶电泳图像。SDS_PAGE凝胶电泳结图12为本申请实施例制备的D/GN的体外细胞摄取结果。图12中A图为D/GN的体外表面的GA_GA受体介导的胞吞作用增加肝癌细胞对纳米胶束的摄取。图12的B图及C图的流式细胞术定量实验也验证了D/GN增加了细胞中DOX的含量，与激光扫描共聚焦显微镜图13为本申请实施例制备的D/GN联合A&E/CPL的细胞毒性评价模型，图14为本申而检测不同药物制剂的体外细胞毒性作用（图13中A图和B图所示）。如图14中A图和B图所证实。养模型的Transwell侵袭定量测试结果；图15中C图为E_Cadherin和Vimentin的Western图16为本申请制备的A&E/CPL和D/GN在荷瘤小鼠体内的生物分布测试结果。图16中A图为A&E/CPL和D/GN在不同时间点的NIR图像；图16中B图为各组器官和肿瘤在48h时的图18为本申请实施例制备的D/GN联合A&E/CPL对H22+PLT+NET皮下移植瘤的抗肿[0069]图19为本申请实施例制备的D/GN联合A&E/CPL对H22+PLT+NET皮下移植瘤治疗效进一步研究联合纳米制剂的抗肝癌机制，通过Westernblot实验检测肿瘤组织中E_组织中E_cadherin和Vimentin的表达水平分别下调和上调，表明PLT和NET的加入可以促进肝癌细胞的EMT。在两种蛋白的相对表达水平如图19中F图所示，A&E/CPL+D/GN组A&E/CPL+D/GN组的肿瘤组织中Vimentin与GAPDH的比值为26.44%，明显低于A&E/CPL组癌EMT过程。图23为本申请制备的D/GN联合A&E/CPL对肺部中性粒细胞和NET形成的影响的结图23所示，与A&E/CPL组和D/GN组相比，A&E/CPL+D/GN组显示出更少的HisH3绿色荧光及