CN119386131A 草果黄酮的制备方法及其在制备治疗结肠炎药物中的应用 （云南农业大学）

草果黄酮的制备方法及其在制备治疗结肠本发明公开了一种草果黄酮的制备方法及和纯化工艺制备获得了高纯度草果黄酮洗脱组调控肠道菌群_LPS/TLR4/NF_ĸB/NLRP3炎症信号通路来缓解DSS诱导的小鼠UC症状，能够应用2步骤二：采用HPD300大孔树脂层析柱对黄酮粗提液分离纯化4.根据权利要求1_3任一所述的制备方法得到ĸB/NLRP3炎症信号通路的激活。3草果黄酮的制备方法及其在制备治疗结肠炎药物中的应用[0003]草果(AmomumtsaokoCrevostetLemarie)为姜科豆蔻属的一种多年生常绿丛肠病改善作用的相关报道。[0008]作为优选，步骤一中乙醇溶液浓度为55_65草果粉和乙醇溶液的料液比为1:[0009]作为优选，步骤二采用HPD300大孔树脂层析柱分离纯化时：吸附柱料比为1:15_4和IL_1β含量的异常增加，显著下调促炎因子TNF_α和IL_1β的mRNA表达水平，并有效改善果黄酮得率影响的基础上，进一步使用响应面Box_Behnken试验设计获得最佳提取工艺条谢组学技术检测了20％和30％洗脱组分的混合物(1:1混合)，发现其黄酮类化合物的相对组分的综合抗氧化能力较强，而粗提物的抗氧化能力最弱，即抗氧化能力顺序为30%>20401050粗提物。型(C57BL/6J)中系统的探究了草果黄酮(20％和30％乙醇洗脱所得草果黄酮1:1混合物)的5显著下调UC小鼠结肠促炎因子TNF_α和IL_1β的mRNA表达水平(P＜0.05)，并有[0022](5)基于16SrRNA基因高通量检测技术探究了草果黄酮对UC小鼠肠道微生物多样预使UC小鼠的肠道菌群在结构组成上向正常对照组聚集，表现为能够抑制DSS诱导的UC小鼠肠道菌群中Firmicutes/Bacteroidota(F/B)的增加、逆转Proteobacteria、Desulfobacterota、Verrucomicrobiota和Actinobacteriota门下科和属水平微生物相对丰度的异常。差异物种分析结果表明，草果黄酮能够显著降低Escherichia_Shigella、Colidextribacter、Oscillospiraceae_UCG_005、Oscillibacter等菌属的相对丰度(P<0.05)，增加UBA1819、Citrobacter、BifidobacteUCG_011、Ruminiclostridium、Oscillibacter、Clostridium_innocuum_group和谢以及人类疾病等通路相关。这些结果表明草果黄酮能够有效改善肠道菌群及其功能特可能通过调控肠道菌群_LPS/TLR4/NF_ĸB/NLRP3炎症信号通路来缓解DSS诱导的小鼠UC症6050％乙醇洗脱所得草果黄酮洗脱组分的黄酮含量(％)。所有数据采用平均值±标准[0042]图17为草果黄酮显著抑制TLRs/NF_ĸB/NLRP3信号通路相关基因m78[0055]采用Design_Expert8.0软件进行[0059]本实施例考察多种大孔树脂对草果黄酮的分离纯化，树脂的物理性质参数如表39[0064]为更好突出HPD300树脂更适宜草果黄酮的分离纯化，对吸附性能较强的4种树脂[0070]颗粒内扩散动力学模型可以确定内扩散是否是吸附速度的限制步骤。如图3D所HP_20大孔树脂对草果黄酮建立的颗粒内扩散动力学曲线并不经过原点(图3D)，说明限速和HP_20大孔树脂的颗粒内扩散模型的速率常数k3分别为1.2571、1.1944、1.4131和附条件下，相同浓度的草果黄酮在HPD300大孔树脂上的吸附能力依次减弱。温度越高，吸附剂与吸附质之间的相互作用。Langmuir模型通常适用于描述单分子层上的吸附过程，Freundlich模型则基于树脂的吸附位点和能量分布不均，可进行多分子层吸附。如图5所的线性拟合更由于Langmuir模型，其线性相关系数R2(0.9786、0.9979、0.9946)也较大孔树脂对草果黄酮吸附行为的描述。常数kL和常数kF分别是Langmuir模型和Freundlich温不利于HPD300大孔树脂的吸附(表5)。指数n是一个表示吸附剂对吸附质亲和力的指标。粗提液，经HCl溶液(1mol/L)或NaOH溶液(1mol/L)调节pH后，与5g经预处理的大孔树脂混子结合到树脂的各个吸附位点，导致吸附量不断增加。当黄酮浓度达到2.79mg/mL时，[0089]大孔树脂数量与上样液体积之比对吸附能力的影响如图8所示。在大孔树脂的量干粉混合，采用NaNO3_Al(NO3)3_[0094]研究大孔树脂分离纯化得到的各黄酮组分对DPPH、ABTS和OH－[0096]DSS诱导造模法广泛应用于溃疡性结肠炎的动物实验中，与其他化学造模法相比小鼠自由饮水。第15天起，CON组和DSS组用超纯水灌胃小鼠，ATF剂量组分别用25、50、的平均值计算疾病活动指数评分(DAI)。其中[0112]数据采用SPSS26.0软件中单因素ANOVA检验分析不同提取条件所得得率统计意司云平台进行多变量分析；使用OmicStudio(/tool)构建热[0114]为了评估草果黄酮对结肠炎的保护作用，在DSS干预期间每天监测和记录小鼠的[0121]草果黄酮对DSS诱导的结肠炎小鼠结肠组织中细胞特定标记物的影响如图15所[0125]为进一步研究草果黄酮摄入对DSS诱导的结肠炎小鼠肠道组织炎症的影响，检测了小鼠结肠组织TLRs/NF_ĸB/NLRP3信号通路相关因子mRNA表达的情况，结果如图17所示。对总体菌群的代表性为38.35而基于unweightedUniFrac距离算法和hellinger距离算次是Bray_curtis距离算法(R＝0.6678)，最后是unweightedUniFrac距离算法(R=DSS摄入以及草果黄酮干预对小鼠肠道菌群均有酮还能显著增加由DSS干预降低的Citrobacter、unclassified_fEnterobacteriaceae、group、Flavonifractor、UBA1819、unclassified_fErysipelatoclostridiaceae、Ruminococcus_gauvreauii_group、Klebsiellaunclassified_fAtopobiaceae和在DSS组中Escherichia_Shigella的相对丰度最高，而草果黄酮显著减少Escherichia_黄酮干预UC的重要信号之一。在草果黄酮干预后，相对丰度较大的菌株有Akkermansia、属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变