CN119405824A 靶向alkbh5并负载顺铂的框架核酸机器及其制备方法与应用 （南方医科大学珠江医院）

靶向ALKBH5并负载顺铂的框架核酸机器及本发明公开一种靶向ALKBH5并负载顺铂的机器的组成包括DNA四面体框架核酸和负载在框架核酸由4条DNA单链杂交合成，至少一条DNA单链连接有靶向ALKBH5的siRNA。本发明提供的框架核酸机器，顺铂与修饰有靶向ALKBH5的高顺铂对GBM的治疗效果，可应用于制备治疗胶2苷酸序列包括经修饰的或未经修饰的如SEQIDNO:5所示的核苷酸序2.根据权利要求1所述的框架核酸机器，其特征3.根据权利要求2所述的框架核酸机器，其特4.根据权利要求3所述的框架核酸机器，其特征在于，所述DNA四面体框架核酸的4条将用于杂交合成DNA四面体框架核酸的DNA单链分别加入TM缓冲液中，混合后95℃加热6.根据权利要求5所述的框架核酸机器的制备方法，其特征在于，所述TM缓冲液pH为7.根据权利要求6所述的框架核酸机器的制备方8.根据权利要求7所述的框架核酸机器的制备方法9.根据权利要求8所述的框架核酸机器的制备方法10.根据权利要求1~4任一项所述的框架核酸机器在制备治疗胶质母细胞瘤药物中的3靶向ALKBH5并负载顺铂的框架核酸机器及其制备方法与应用[0004]ALKB家族是一种依赖于铁和2_氧戊二酸的核酸氧化酶（NAOXm6A去甲基化酶ALKBH5是ALKB家族的9个成员之一，在胶质母细胞瘤中高度表达，维持胶质母细胞瘤的干[0008]本发明的第三个目的在于提供上述框架核酸机器在制备治疗胶质母细胞瘤药物4[0013]在一些实施方式中，靶向ALKBH5的siRNA的反义核苷酸序列包括经修饰的或未经修饰的如SEQIDNO:5所示的核苷酸体AS1411的核苷酸序列如SEQIDNO:6所示。核酸适配体AS1411可以与肿瘤细胞细胞膜表GS24的核苷酸序列如SEQIDNO:7所示。核酸适配体GS24可与血管内皮细胞表面的转铁蛋GS24修饰可以协助框架核酸机器穿过血脑屏障，将顺铂和靶向ALKBH5的siRNA递送至肿瘤[0016]在一些实施方式中，DNA四面体框架核酸的4条DNA单链的核苷酸序列分别如SEQIDNO:1、SEQIDNO:8~10所示，该DNA四面体框架核酸靶向ALKBH5并修饰有核酸适配体[0018]在一些实施方式中，TM缓冲液pH为8.0，其组成包括10mMTris_HCl和50mM5图6~9依次为DLS检测的TDN的粒径和Zeta电位、TDN_A_G_siRNA@CDDP的粒径和图10~12依次为bEnd.3、U87和U251细胞在不同时间点对Cy5标记的TDN_GS24的摄图19为不同药物处理对原位GBM小鼠模型肿瘤组织中ALKBH5的沉默效率的WB分析图32为PBS或TDN_A_G_siRNA@CDDP处理第1天和第7天的正常小鼠主要器官的H&E图33为PBS或TDN_A_G_siRNA@CDDP处理第1天和第7天的正常小鼠血常规各项指标6图34为PBS或TDN_A_G_siRNA@CDDP处理第1天和第7天的正常小鼠血生化各项指标U87MG、U251MG和bEnd.3细胞株购自中国科学院细胞库（中国上海置于含10%7学珠江医院实验动物中心。所有动物实验均按照实验动物伦理委员会批准程序(LAEC_比较采用单因素方差分析或双因素方差分析。采用Kaplan_Meier法绘制生存曲线，log_86个U87_luc细胞的PBS注将400nM的Cy5标记的TDN_AS1411_GS24和TDN分别静脉注射到U87_luc荷瘤小鼠体9FisherScientific,USA）试剂严格按照说明书转染siALKBH5。48h后收集细胞进行WB检测肿瘤组织中ALKBH5蛋白表达体外BBB模型构建成功后，将Transwell细胞培养系统下室的GBM细胞分别与上室CDDP孵育24h。CCK_8法检测对细胞活力的影响，并测定在450nm波长下的IC50。同时使用均按照制造商的说明进行。同时收集下腔室U87细胞，使用AnnexinV_FITC/PI试剂盒 [0063]图22~23的EdU细胞增殖实验结果证实了TDN_A_G_siRNA@CDDP治疗可显著减少GBM细胞的增殖，且与TDN_A_G_siRNA+CDDP、TDN_A_G@CDDP组相比，差异均具有显著性（P<0.05说明顺铂与TDN_A_G_siRNA通过静电吸附及共价键结合等方式结合后，两者之间可[0065]图25所示的WB实验结果表明，TDN_A_G_siRNA@CDDP可使γ_H2Ax、Cleave_[0072]图30所示的高分辨率MRI图像显示TDN_A_G_siRNA@CDDP组的肿瘤体积最小，表明为了评估TDN_A_G_siRNA@CDDP的生物安全性，采用随机数字表法将小鼠分为2组将TDN_A_G_siRNA与CDDP按不同的比例混合，在37℃下共同孵育约4小时，用30