CN119433095A 检测核酸样品的特异性探针、引物、试剂盒和方法 （莱肯生物科技(海南)有限公司）

本发明提供了一种探针和引物组合、标准2CAACTTTAGCTTGAGGCCGGCCCA_3'，所述引物的核苷酸序列为5'_CGTTTCCCGCCTTCAGTTTA_3'和5'_CCCTTCCATGGCTGAAATAGTG_3'。2.根据权利要求1所述的探针和引物组合，其特征x102拷贝/μL和6.0x10拷贝/μL的7.Real_timePCR检测方法，其特征在于：使8.权利要求1_4任一项所述的探针和引物组合、权利要求5_6任一项所述的检测试剂3请号2024119361109它对草地贪夜蛾和玉米螟等鳞翅目害虫具有优异的抗性，对草铵膦以是MN85N_E6转化体衍生品系的基因组DNA，或是含有MN85N_E6转化体的混杂玉米材料的只要含有SEQIDNO.1所示序列核酸分子的样品均可以用本发明提供的方法进CAACTTTAGCTTGAGGCCGGCCCA_3'。4述引物的核苷酸序列为5'_CGTTTCCC上述的探针和引物组合是通过软件设计、试验筛选验证挑选出来的，定位于MN85N_E6转化体外源插入序列下游DNA样品含有SEQIDNO.1所获得了1条探针和2条引物的组合，在此基础上利用合适浓度梯度的标准品建立并优化了56.0×1056.0拷贝/μL。受体细胞的基因。外源基因可以包含插入非天然生物体的天然基因或嵌合基因。“转基因”是通过转化程序已经被引入基因组的基因。植物基因组中重组DNA已被插入的位点可以称[0022]引起外源DNA的随机整合的转化程序会导致含有不同侧翼区的转化体，所述不同常不会改变。转化体也会含有异源插入物DNA和基因组DNA的段之间或两段基因组DNA之间[0023]MN85N_E6转化体是包括转基因玉米MN85N_E6的植物和种子及其植物细胞或其可6DNA是来自转基因玉米MN85N_E6或种子还是来源于转基因玉米MN85N_E6以及其他衍生品系的植物或种子或提取物，还是从MN85N_E6中分离得到的包含MN85N_E6身份信息的核酸分并可用于检测该目标DNA序列的存在的聚酰胺及转化体的特异性检测方法需要在插入位点上游和下游的边界序列处设计探针和②引物的Tm值在58~60℃,探针的T探针PCGTTTCCCGCCTTCAGTTTACCCTTCCATGGCTGAAATAGTGCAACTTTAGCTTGAGGCCGGCCCATCAGTGTTTGACAGGACCCAACTCTCCATCTCAAGTGAAACATGGTTAGGCCGGCCCATCTTCACTATTTCATTGACAGGACCCAACTTTAGCTTCTCCATCTCAAGTGAAACATGGTTAGGCCGGCCCATCTTCACTATTTCACGTTTCCCGCCTTCAGTTTATCCAGGTCGCCCTTCCATCAACTTTAGCTTGAGGCCGGCCCAAGCTTGGATCAGATTGTCGTTTCCCTTCCATGGCTGAAATAGTGCAACTTTAGCTTGAGGCCGGCCCACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTTGGCGCAAGATTTGGTGTATTGGTCATGCCAGCTATTGGTGATTCAGCCA71是2否0_否2否2否1是（2）用SYBRGreen染料法Real_timePCR反应检测组合A1和A6的引物1和引物2。有29.10是无__否有√cgtttcccgccttcagtttaaactatcagtgtttgacaggaCCCAACTTTAGCTTGAGGCCGGCCCAT引物1：5'_CGTTTCCCGCCTTCAGTTTA_3'；引物2：5'_CCCTTCCATGGCTGAAATAGTG_3'。8利用Real_timePCR对样品的初始模板量进行定量分析，需要利用已知拷贝数的列浓度梯度的标准品，然而具体的Real_timePCR反应体系能否有更好的效果还受到探针通过对实施例1筛选的探针和引物组合A1进行稀释，加入去离子水将其浓度稀释集荧光信号共进行40_45个循环。9引物终浓度(μM）0.10.0531.140.20.130.550.40.228.650.60.327.470.80.430.19样品12345654326.022.6624.7427.0930.0133.2236.49以梯度浓度的多个标准品作为模板进行Real_timePCR并记录Ct值，根据初始模试验ddH2O为空白对照，使用实施例1的探针和引物组合A1，采用实施例3优化的反应体[0059]应用该试剂