2026届新高考生物考前热点复习：一境到底聚焦+PCR+核心的基因工程

复习目标：根据PCR的原理和技术应用于基因工程的不同

阶段和目的。2026届新高考生物考前热点复习一境到底聚焦PCR核心的基因工程基因工程的基本操作程序资料：白桦是我国重要的绿化树种，BpMYB5基因是调控白桦耐盐性的关键基因，为验证该基因的耐盐功能，研究人员利用无缝克隆技术，将与绿色荧光蛋白（eGFP）基因融合，构建了融合基因表达载体，用于开展相关实验研究。一、PCR获取目的基因(融合蛋白基因)1.PCR是聚合酶链式反应的简称，是一种在体外快速扩增DNA片段的方法。反应体系包括：模板DNA、_______、耐高温的DNA聚合酶、4种___________及适合的缓冲体系组成的反应体系，经过重复地_______、_______和延伸三步，可以在短时间内将微量的DNA片段扩增到足够数量的目的DNA，最后通过_________________检测是否扩增成功。琼脂糖凝胶电泳引物脱氧核苷酸变性复性2.科研人员将BpMYB5基因和绿色荧光蛋白（eGFP）基因通过PCR扩增融合基因的过程如图1：（1）在PCR1和PCR2两个反应体系中加入的不同物质是_____________________。（2）引物P2和P3具有_____________________________的特点，从而有利于BpMYB5基因和eGFP基因融合。（3）PCR1和PCR2是否能在同一个反应体系中进行？为什么？______________________________________________________________________________________（4）要将获得的BpMYB5和eGFP融合基因用于构建基因表达载体，在PCR3应选用引物_________进行PCR扩增。一、PCR获取目的基因(融合蛋白基因)模板、引物部分碱基序列互补配对不能，引物P2和P3部分序列互补，若在一个反应体系中，可能会导致PCR无法进行P1和P4二、利用PCR给目的基因两侧加上限制酶切位点1.图2是BpMYB5和绿色荧光蛋白（eGFP）融合基因放大图,左侧和右侧引物序列应分别是5’-________________________-3’和5’-_______________________-3’。2.根据图3载体的结构，为了使扩增后的融合基因能和载体进行正确连接形成重组DNA分子，并能按正确方向转录，利用PCR技术扩增融合基因时还需要在融合基因左侧引物______端(填3’或5’）添加限制酶____________的识别序列，右侧引物添加限制酶____________的识别序列。TCTGTTGAATXmaICTTGGATGAT5’MunI三、PCR检测目的基因的方向是否准确科研人员构建了可表达BpMYB5基因和eGFP融合蛋白的重组质粒并进行了检测，该质粒的部分结构如图4所示。1.构建重组质粒后，为了确定BpMYB5基因连接到质粒中且插入方向正确，需进行PCR检测，若仅用一对引物，应选择图4中的引物___________。2.已知BpMYB5基因转录的模板链位于b链，由此可知引物F1与图甲中J基因的_________(填“a链”或“b链”)相应部分的序列相同。a链F2和R1(或F1与R2)四、PCR检测目的基因导入受体细胞1.确认融合基因表达载体方向正确后，利用___________________法将其导入白桦植株的细胞中。农杆菌转化2.为检测获得的转基因白桦树苗中是否含有导入的BpMYB5基因，同时避免内源BpMYB5基因的干扰，在进行PCR扩增时，可选择图5中的引物组合____________。①+②或①+④或③+④四、PCR检测目的基因导入受体细胞3.通过上述PCR后得到以下电泳图谱，其中1号为DNA标准样（Marker），2~10号为PCR产物；其中2号的模板为野生型植株DNA，3~9号模板为转基因白桦植株的DNA，10号使用蒸馏水代替模板DNA。据此做出分析不合理的是__________。A．PCR产物的分子大小在250至500bp之间B．3号样品植株导入的目的基因不一定能成功表达C．9号样品对应植株是所需的转基因植株D．10号的电泳结果能确定反应体系等对实验结果没有干扰C四、PCR检测目的基因导入受体细胞4.推测将BpMYB5基因和绿色荧光蛋白