（正式版）DB43∕T 687-2012 《饲料中福莫特罗、苯乙醇胺A、克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布它林、西马特罗的测定 液相色谱-串联质谱法》

2012-07-24发布2012-12-10实施I Ⅱ 12规范性引用文件 13方法提要 14试剂与材料 15仪器与设备 26试样制备 27分析测定 28方法的线性范围、灵敏度、准确度和精密度 4附录A(资料性附录)七种化合物的液相色谱-串联质谱图(MRM色谱图) 6Ⅱ本标准按GB/T1.1-2009的规则编制。本标准由长沙市畜禽水产品质量检测中心提出。本标准由湖南省畜牧水产局归口。本标准起草单位：长沙市畜禽水产品质量检测中心。本标准起草人：卢艳芬、王辉、徐丽君、颜克旭、唐巍、漆亮、杨辉、尹雯婕、薛爽。1饲料中福莫特罗、苯乙醇胺A、克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布它林、西马特罗的测定液相色谱-串联质谱法本标准规定了饲料中福莫特罗(Formoterol)、苯乙醇胺A(PhenylethanolamineA)、克仑特罗(Clenbuterol)、莱克多巴胺(Ractopamine)、沙丁胺醇(Salbutamol)、西马特罗(Cimaterol)液相色谱-串联质谱的测定方法。沙丁胺醇、特布它林、西马特罗的测定。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备本法所用试剂除另有说明外，均为分析纯；实验用水应符合GB/T6682规定的一级水。4.6提取液：0.1mol/L盐酸+甲醇=8+2(V+V)。4.70.1mol/L盐酸：取盐酸9mL,用水稀释至1000mL。4.80.1%甲酸溶液：取甲酸1mL,加水稀释至1000mL。4.910mol/L氢氧化钠：称取40g氢氧化钠，用适量水溶解冷却后，用水稀释至100mL。4.105%氨化甲醇溶液：取5mL氨水用甲醇稀释到100mL。4.11溶解液：0.1%甲酸溶液(4.8)+甲醇=5+95(V+V)。4.12标准物质：福莫特罗、苯乙醇胺A、克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布它林、西马特罗，2纯度均应大于98.0%。沙丁胺醇、特布它林、西马特罗标准物质，用甲醇分别配制成浓度为100μg/mL箱中避光保存。保存期不超过6个月。4.14混合标准中间溶液(1μg/mL):分别准确吸取1.0mL标准储备液，用甲醇稀释定容至100mL,置4℃冰箱中避光保存。保存期不超过6个月。5仪器与设备5.1分析天平：感量0.01mg、0.01g。5.3水浴超声器。5.4高速离心机：5000r/min。5.5氮吹仪。5.6涡旋振荡器。5.9混合型阳离子固相萃取小柱：60mg/3mL,使用前活化。6试样制备按GB/T14699.1采样。选取有代表性饲料样品至少500g,按GB/T20195制备试样。7.1样品制备管称取试样2g(精确到0.01g)于50mL离心管中，准确加入10mL提取液(4.6);充分振荡后超声10min,5000r/min高速离心5min。上清液全部转移到另一离心管中。残渣用上述方法重复提取一次。合并上清液，用10mol/L氢氧化钠溶液调节pH至4,待用。”,依次用3mL甲醇，3mL水活化固相萃取小柱，准确移取5mL上清液上柱。再依次用3mL0.1mol/L盐酸溶液、3mL甲醇淋洗，抽干，用3mL5%氦化甲醇洗脱，收集洗脱液于5mL离心管中，45℃下用氮气吹干。用1.0mL溶解液溶解；涡旋混匀后过有机微孔滤膜，上机测定。若试样溶液中含有的被测物质浓度超出仪器线性范围，可用一定体积溶解液稀释后进样。3DB43/T687—20127.2.1液相色谱参考条件色谱柱：C18(50×2.1mm,粒径1.流动相：A相：0.1%甲酸水溶液；B相：甲醇。流动相梯度洗脱条件参见表1流动相梯度洗脱条件。时间(min)0555流速：0.3mL/min。柱温：35℃。7.2.2质谱参考条件离子源：电喷雾离子源。扫描方式：正离子扫描。检测方式：多反应监测。电离电压：3.0KV。离子源温度：120℃。雾化温度：350℃。锥孔气流速：50L/h。雾化气流速：580L/h。各化合物保留时间、定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量参见表2七种化合物的保留时间、定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量。保留时间定性离子对定量离子对西马特罗克伦特罗福莫特罗(Form)47.2.3液相色谱-串联质谱测定检测的线性范围内。7.2.3.1定性测定件下，试样中被测化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间一致，变化范围应在±2.5%.度相比，其允许偏差不超过表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差规定的范围。允许的相对偏差7.2.3.2定量测定的液相色谱-串联质谱图(MRM色谱图)参见附录A。7.2.4空白试验除不加样品外，采用完全相同的分析测定步7.3结果计算试样中各被测化合物的含量以质量分数(mg/kg)表示，其结果可由计算机外标法自动计算获得，Cs——标准工作溶液中各化合物的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);m—试样的质量，单位为克(g);平行测定用算术平均值表示，计算结果应扣除空白值，结果保留3位有效数字。8方法的线性范围、灵敏度、准确度和精密度5本方法中各化合物的定量限均为0.05mg/kg。8.3准确度本方法中，各化合物在添加浓度为0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg时，回收率范围为65%~8.4精密度批内变异系数≤15%,批间变异系数≤15%。6DB43/T687—2012(资料性附录)七种化合物的液相色谱一串联质谱图(MRM色谱图)003345.5>327.2Phen003D03003MRMor14Ch