2025年微生物真菌检验标准操作规程培训试题及答案

2025年微生物真菌检验标准操作规程培训试题及答案一、名词解释（共5题，每题4分，共20分）1.真菌药敏试验最低抑菌浓度（MIC，2025版规程定义）2.丝状真菌标准化小培养3.隐球菌荚膜多糖侧流层析试验（LFA）4.真菌MALDI-TOFMS鉴定前处理拓展法5.双相真菌二、单项选择题（共15题，每题2分，共30分）1.依据2025版《临床微生物真菌检验标准操作规程》，痰标本用于真菌检验的合格判定标准为低倍镜下：A.白细胞≥10个/HP，上皮细胞≤25个/HPB.白细胞≥25个/HP，上皮细胞≤10个/HPC.白细胞≥10个/HP，上皮细胞≤10个/HPD.白细胞≥25个/HP，上皮细胞≤25个/HP2.念珠菌显色培养基的标准孵育条件为2025规程明确要求的：A.25℃培养18-24hB.30℃培养18-24hC.35±1℃培养24-48hD.37℃培养48-72h3.脑脊液标本检测隐球菌时，2025规程要求的离心条件为：A.1500r/min离心5minB.1500r/min离心10minC.3000r/min离心5minD.3000r/min离心10min4.依据CLSIM27:2024版（2025规程引用的最新药敏标准），氟康唑对白色念珠菌的敏感折点为：A.≤2μg/mLB.≤4μg/mLC.≤8μg/mLD.≤16μg/mL5.2025规程规定，丝状真菌初始分离培养的标准温度为：A.22±1℃B.28±1℃C.35±1℃D.37±1℃6.真菌血培养报阳后，2025规程要求的首选快速鉴定方案为：A.转种沙保弱平板，待菌落长出后做生化鉴定B.直接取阳性瓶沉渣进行MALDI-TOFMS鉴定C.转种显色平板，24h后根据菌落颜色鉴定D.直接进行PCR测序鉴定7.马尔尼菲篮状菌双相转换的酵母相培养温度为：A.25℃B.28℃C.35℃D.37℃8.2025规程规定，血清曲霉菌半乳甘露聚糖（GM）试验的阳性cutoff值为：A.≥0.25B.≥0.5C.≥0.75D.≥1.09.二类病原性真菌（如曲霉、隐球菌）的检验操作需在几级生物安全柜内进行：A.BSL-1B.BSL-2C.BSL-3D.普通操作台10.酵母样真菌药敏试验的标准接种量为2025规程明确的：A.0.5×10^3~2.5×10^3CFU/mLB.0.5×10^4~2.5×10^4CFU/mLC.0.5×10^5~2.5×10^5CFU/mLD.0.5×10^6~2.5×10^6CFU/mL11.毛霉目真菌的典型镜下特征为：A.分隔菌丝，45度分支B.无隔/少隔宽大菌丝，直角分支C.可见关节孢子D.可见厚壁孢子12.2025规程规定，有尿路刺激症状患者的念珠菌尿诊断阈值为：A.≥10^3CFU/mLB.≥10^4CFU/mLC.≥10^5CFU/mLD.≥10^6CFU/mL13.2025规程明确，MALDI-TOFMS鉴定真菌时，可准确鉴定到种的分值阈值为：A.≥1.7B.≥1.8C.≥2.0D.≥2.314.皮肤癣菌的特异性鉴别培养基为：A.沙保弱葡萄糖琼脂B.科玛嘉念珠菌显色培养基C.皮肤癣菌试验培养基（DTM）D.马铃薯葡萄糖琼脂15.2025规程规定，除脑脊液外的真菌标本若不能及时处理，4℃冷藏保存的最长时限为：A.6hB.12hC.24hD.48h三、多项选择题（共10题，每题3分，共30分，多选、少选、错选均不得分）1.2025规程中属于合格真菌检验标本的有：A.无菌穿刺获取的胸腔积液、脑脊液B.痰标本低倍镜下白细胞≥25个/HP、上皮细胞≤10个/HPC.无菌操作采集的角膜刮取物D.从尿袋中导出的留置导尿尿液E.自然咳痰留取的24h混合痰标本2.2025规程推荐的酵母样真菌常规鉴定方法包括：A.念珠菌显色培养基鉴定B.商品化生化鉴定卡（如API20CAUX）C.MALDI-TOFMSD.ITS/28SrRNA测序E.丝状真菌小培养3.2025规程中隐球菌感染的特异性实验室检测方法包括：A.墨汁负染色B.荚膜多糖乳胶凝集试验C.荚膜多糖侧流层析试验D.曲霉菌GM试验E.沙保弱培养基培养4.依据CLSIM38:2024版，丝状真菌药敏试验推荐检测的药物包括：A.伏立康唑B.伊曲康唑C.两性霉素BD.泊沙康唑E.青霉素G5.下列属于双相真菌的有：A.马尔尼菲篮状菌B.申克孢子丝菌C.荚膜组织胞浆菌D.烟曲霉E.白色念珠菌6.2025规程明确的G试验（1,3-β-D葡聚糖试验）假阳性影响因素包括：A.静脉输注人血白蛋白、免疫球蛋白B.持续性血液透析C.革兰阴性杆菌血流感染D.手术中使用含葡聚糖的纱布、缝线E.接受β-内酰胺类抗生素治疗7.2025规程推荐的真菌涂片染色方法包括：A.革兰染色B.乳酸酚棉蓝染色C.墨汁负染色D.PAS染色E.抗酸染色8.2025规程中侵袭性肺曲霉病的微生物学诊断依据包括：A.痰涂片镜检见分隔、45度分支菌丝B.连续2次血清GM试验≥0.5C.合格痰标本连续2次培养出烟曲霉D.BALFmNGS检测到烟曲霉特异性序列E.隐球菌荚膜抗原阳性9.2025规程规定的真菌药敏试验质控菌株包括：A.白色念珠菌ATCC90028B.近平滑念珠菌ATCC22019C.克柔念珠菌ATCC6258D.烟曲霉ATCC204305E.大肠埃希菌ATCC2592210.2025规程明确禁止用于真菌检验的不合格标本包括：A.尿袋内留取的留置导尿标本B.室温放置超过12h的痰标本C.24h混合留取的痰液标本D.无菌穿刺获取的关节液标本E.皮损部位刮取的皮屑标本四、判断题（共10题，每题2分，共20分，对打√，错打×）1.2025规程规定，脑脊液隐球菌检测标本需4℃冷藏保存，避免菌体降解。（）2.白色念珠菌在科玛嘉显色培养基35℃培养24h后呈蓝绿色菌落。（）3.CLSIM27:2024版明确克柔念珠菌对氟康唑天然耐药，无需常规检测该药物药敏。（）4.毛霉目真菌感染时GM试验通常呈阳性，可作为辅助诊断指标。（）5.丝状真菌小培养的核心优势是可保留完整的产孢结构，提升鉴定准确率。（）6.2025规程允许真菌血培养阳性标本直接取沉渣进行MALDI-TOFMS鉴定，无需等待纯培养。（）7.皮肤癣菌仅感染浅表皮肤、毛发、指甲，不会引起深部侵袭性感染。（）8.G试验阴性可完全排除所有类型的侵袭性真菌病。（）9.痰标本分离出念珠菌即可诊断为侵袭性肺念珠菌病。（）10.双相真菌在28℃培养时呈菌丝相，37℃培养时呈酵母相。（）五、简答题（共4题，每题10分，共40分）1.简述2025版《临床微生物真菌检验标准操作规程》中合格痰标本的真菌检验全流程。2.简述2025版规程中侵袭性念珠菌病的实验室诊断分级依据。3.简述2025版规程中MALDI-TOFMS鉴定真菌的标准化前处理流程。4.简述2025版规程中真菌药敏试验的适用范围与排除范围。六、案例分析题（共1题，30分）患者男性，56岁，因急性髓系白血病行化疗后出现中性粒细胞缺乏（<0.5×10^9/L）12天，发热39.3℃伴咳嗽、咯血痰，胸部CT提示双肺多发结节伴典型晕轮征。送检合格痰标本2份、外周血培养2套。实验室返回结果：①痰涂片乳酸酚棉蓝染色见大量分隔菌丝，呈45度角分支；②两份痰标本培养均生长烟曲霉；③血清GM试验1.2ng/mL，G试验247pg/mL；④血培养孵育7天均为阴性。请依据2025版规程回答以下问题：1.该患者是否符合侵袭性肺曲霉病的诊断标准？属于哪一级诊断？请列出诊断依据（12分）2.该患者分离的烟曲霉是否需要做药敏试验？请列出推荐的药敏方法与检测药物（10分）3.请写出该病例的实验室规范报告流程（8分）参考答案部分一、名词解释1.指按照2025版规程标准化操作，在体外真菌药敏试验中，能够完全抑制真菌生长的最低抗真菌药物浓度，酵母样真菌孵育24h判读，丝状真菌孵育48-72h判读，是抗真菌药物敏感性评价的核心指标。2.2025规程推荐的丝状真菌专用培养方法，采用载玻片贴琼脂块接种真菌后密闭孵育，可在不破坏菌丝与产孢结构的前提下直接镜检，避免大培养挑取菌丝时破坏形态，提升丝状真菌鉴定准确率。3.2025规程新增的隐球菌感染首选快速检测方法，采用免疫层析原理检测血清、脑脊液等标本中的隐球菌荚膜多糖抗原，15min可出结果，敏感性与特异性均≥95%，无需离心处理脑脊液标本。4.针对细胞壁较厚的真菌（隐球菌、粗糙型念珠菌、丝状真菌）的MALDI-TOF前处理方法，通过乙醇沉淀、甲酸破壁、乙腈抽提蛋白的步骤获取真菌蛋白，提升鉴定成功率，2025规程要求该类真菌必须采用拓展法处理，禁止直接点靶。5.指存在两种生长形态的真菌，在28℃环境下培养呈菌丝相，产丝状菌落，在37℃宿主体内/培养基培养时呈酵母相/类酵母相，是一类高致病性深部真菌，包括马尔尼菲篮状菌、申克孢子丝菌等。二、单项选择题1.B2.C3.D4.A5.B6.B7.D8.B9.B10.A11.B12.B13.C14.C15.C三、多项选择题1.ABC2.ABCD3.ABCE4.ABCD5.ABC6.ABCD7.ABCD8.ABCD9.ABCD10.ABC四、判断题1.×（脑脊液标本需室温保存，4℃冷藏会导致隐球菌死亡，降低检出率）2.√3.√4.×（毛霉不合成半乳甘露聚糖，GM试验呈阴性，无法用于毛霉感染诊断）5.√6.√7.×（免疫缺陷患者中皮肤癣菌可引起深部侵袭性感染，如真菌血症、深部脓肿）8.×（隐球菌、毛霉感染时G试验可呈阴性，需结合其他检测指标判断）9.×（呼吸道念珠菌定植率高达30%以上，需结合涂片见侵袭性菌丝、感染症状、非培养指标综合判断，单纯培养阳性不能诊断）10.√五、简答题1.答：流程如下：（1）标本验收：核对患者信息与标本标识，镜下评估合格性，不合格标本2h内退回临床并告知重留要求；（2）涂片检测：2h内完成革兰染色、乳酸酚棉蓝染色，观察有无酵母细胞、假菌丝、真菌菌丝，初步报告涂片结果；（3）接种：分别转种2块沙保弱葡萄糖琼脂（分别放28℃、35℃孵育）、1块念珠菌显色培养基（35℃孵育），怀疑皮肤癣菌时加种含放线菌酮的沙保弱平板；（4）孵育：每日观察菌落生长情况，酵母样真菌48h判读，丝状真菌连续孵育5-7天，怀疑双相真菌时延长孵育至4周；（5）鉴定：结合菌落形态、镜下特征、生化试验/MALDI-TOFMS鉴定到种，疑难菌株采用测序方法鉴定；（6）涂片结果2h内发出初步报告，培养鉴定结果48h-7天发出，需要药敏的菌株在鉴定完成后24h内发出药敏报告。2.答：诊断分为三级，依据如下：（1）确诊：组织病理学/细胞病理学检查见组织侵袭性念珠菌菌丝/酵母细胞，或无菌部位（血液、脑脊液、胸腔积液等）培养出念珠菌，排除污染；（2）临床诊断：存在侵袭性真菌病高危因素（粒细胞缺乏、长期使用激素/免疫抑制剂、留置中心静脉导管等）+典型临床表现+微生物学证据（合格痰/支气管肺泡灌洗液见念珠菌假菌丝、连续2次G试验阳性、念珠菌甘露聚糖抗原/抗体阳性）；（3）拟诊：存在高危因素+典型临床表现，无明确微生物学证据。3.答：流程如下：（1）普通酵母样真菌（白念珠菌、光滑念珠菌等）：取单个新鲜菌落直接涂布于靶板，加1μL70%甲酸室温干燥，再加1μLα-氰基-4-羟基肉桂酸基质液，干燥后上机检测；（2）厚壁/粗糙型真菌（隐球菌、克柔念珠菌、丝状真菌）：采用拓展法处理：取适量菌落加入300μL无菌纯水混匀，加900μL无水乙醇沉淀，12000r/min离心2min弃上清，沉淀加50μL70%甲酸重悬，再加50μL乙腈混匀，12000r/min离心2min，取1μL上清点靶，干燥后加基质液上机；（3）质量控制：每次实验同时检测白色念珠菌ATCC90028作为质控，鉴定分值≥2.0时本次实验结果有效。4.答：（1）适用范围：①从无菌部位分离的真菌（血液、脑脊液、无菌穿刺液、组织活检标本等）；②有明确感染症状的患者，同一部位连续2次分离到同一种真菌；③侵袭性真菌病患者规范治疗72h效果不佳，需要调整用药方案；④本单位真菌耐药性流行病学监测；（2）排除范围：①浅表部位（口腔、阴道、皮肤）分离的真菌，无深部感染证据；②无感染症状的定植真菌（如痰、粪便分离的念珠菌，无相关临床表现）；③明确天然耐药的真菌-药物组合（如克柔念珠菌对氟康唑，接合菌对棘白菌素类，无需常规检测）。六、案例分析题1.答：该患者符合侵袭性肺曲霉病临床诊断级别标准。诊断依据：（1）宿主因素：化疗后中性粒细胞缺乏<0.5×10^9/L超过10天，属于侵袭性真菌病极高危人群；（2）临床证据：发热伴咳嗽咯血，胸部CT见双肺多发结节伴晕轮征，为侵袭性肺曲霉病的典型影像学表现；（3）微生物学证据：合格痰涂片见典型曲霉分隔、45度分支菌丝，2份合格痰培养均为烟曲霉，血清GM试验1.2ng/mL≥0.5的阳性阈值，G试验247pg/mL≥100pg/mL的阳性阈值，符合临床诊断的微生物学要求。2.答：需要做药敏试验。（1）推荐方法：采用CLSIM38:2024版微量肉汤稀释法，或经国家药监局批准的商品化丝状真菌药敏检测试剂盒；（2）推荐检测药物：三唑