CN119451569A 脑梗死的非人灵长类动物模型的制作方法和脑梗死治疗用药物组合物 （安斯泰来制药株式会社）

2024.12.23PCT/JP2023/0241272023.06.29WO2024/005124JA2024.01.04脑梗死的非人灵长类动物模型的制作方法本发明涉及包括向非人灵长类的大脑基底核丘脑区域给药内皮素、由此诱导大脑基底核非人灵长类动物模型的制作方法、以及含有NeuroD1蛋白或编码NeuroD1或在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死的药物组21.一种脑梗死的非人灵长类动物模型的制作方法，其包括向非人灵长类的大脑基底6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中9.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中319.一种具有大脑基底核障碍、丘脑障碍和内囊障碍的、脑梗死的非人灵长类动物模29.一种亚急性期～慢性期的脑梗死食蟹猴模型，其是通过权利要求20～28中任一项431.一种用于治疗穿支梗死或亚急性期～慢性期的脑梗死的药物组合物，其含有NeuroD1蛋白或编码NeuroD1蛋白的多32.一种用于治疗在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死36.根据权利要求31～35中任一项所述的药物组合多核苷酸，所述多核苷酸为含有编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序37.根据权利要求31～36中任一项所述的药物组合物，其苷酸含有相对于序列号7或10所示的碱基序列具有70％以上的序列一38.根据权利要求31～37中任一项所述的药物组合物，其39.根据权利要求31～38中任一项所述的药物组合物，其40.根据权利要求39所述的药物组合物，其中，编码NeuroD142.根据权利要求39～41中任一项所述的药物组合物，其中，编码Neu为含有由序列号11或13的第1位～第1231位的碱基序43.根据权利要求39～42中任一项所述的药物组合物，其中，编码Neu含有多聚A序列。45.根据权利要求39～44中任一项所述的药物组合物，其中，编码Neu46.根据权利要求39～45中任一项所述的药物组合物，其中，编码Neu48.根据权利要求47所述的药物组合物，其中，编码NeuroD1549.根据权利要求39～48中任一项所述的药物组合物，其中，编码Neu50.根据权利要求39～49中任一项所述的药物组合物，其中51.根据权利要求31～38中任一项所述的药物组合52.根据权利要求31～38和51中任一项所述的药物组合物，其中，包含含有编码55.一种穿支梗死或亚急性期～慢性期的脑梗死的治疗方法，其包括将权利要求31~56.一种在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死的治疗方法，其包括将权利要求31～54中59.根据权利要求55所述的方法，其中，亚急性期～慢性期的脑梗死为慢性期的脑梗60.根据权利要求55～59中任一项所述的方法，其中，包括将苷酸给药于对象的步骤，所述多核苷酸为含有编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋61.根据权利要求55～60中任一项所述的方法，其中，编有相对于序列号7或10所示的碱基序列具有70％以上的序62.根据权利要求55～61中任一项所述的方法，其中，编码63.根据权利要求55～62中任一项所述的方法，其中，包括将64.根据权利要求63所述的方法，其中，编码NeuroD1蛋66.根据权利要求63～65中任一项所述的方法，其中，编码N67.根据权利要求63～66中任一项所述的方法，其中，编码Ne669.根据权利要求63～68中任一项所述的方法，其中，编码NeuroD1蛋白的mRNA具有5’70.根据权利要求63～69中任一项所述的方法，其中，72.根据权利要求71所述的方法，其中，编码NeuroD73.根据权利要求63～72中任一项所述的方法，其74.根据权利要求63～73中任一项所述的方法，其中，75.根据权利要求55～62中任一项所述的方法，其中，包76.根据权利要求55～62和75中任一项所述的方法，79.一种NeuroD1蛋白或编码NeuroD1蛋白的多核苷酸，其用于治疗穿支梗死或亚急性80.一种NeuroD1蛋白或编码NeuroD1蛋白的多核苷酸，其用于治疗在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死的应用。84.根据权利要求79～83中任一项所述的用于所述应用的多核苷酸，其中，编码NeuroD1蛋白的多核苷酸为含有编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序85.根据权利要求79～84中任一项所述的用于所述应用的多核苷酸，其中，编码NeuroD1蛋白的多核苷酸含有相对于序列号7或10所示的碱基序列具有70％以上的序列一86.根据权利要求79～85中任一项所述的用于所述应用的多核苷酸，其中，编码NeuroD1蛋白的多核苷酸为含有序列号7或10所示的碱基序列的多788.根据权利要求87所述的用于所述应用的多核苷酸，其中，编含有序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的、编码NeuroD1蛋白的碱基序列。89.根据权利要求87或88所述的用于所述应用的多核苷90.根据权利要求87～89中任一项所述的用于所述应用的多核苷酸，其中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有由序列号11或13的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷91.根据权利要求87～90中任一项所述的用于所述应用的多核苷酸，其中，编码NeuroD1蛋白的mRNA含有多聚A序列。92.根据权利要求91所述的用于所述应用的多核苷酸，其中，多聚93.根据权利要求87～92中任一项所述的用于所述应用的多核苷酸，其中，编码94.根据权利要求87～93中任一项所述的用于所述应用的多核苷酸，其中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有修饰核苷的多96.根据权利要求95所述的用于所述应用的多核苷酸，其中，编码97.根据权利要求87～96中任一项所述的用于所述应用的多核苷酸，其中，编码98.根据权利要求87～97中任一项所述的用于所述应用的多核苷酸，其中，编码NeuroD1蛋白的mRNA被封入脂质纳米粒子103.NeuroD1蛋白或编码NeuroD1蛋白的多核苷酸在制造用于治疗穿支梗死或亚急性104.NeuroD1蛋白或编码NeuroD1蛋白的多核苷酸在制造用于治疗在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死的药物组合物中的应用。8为含有编码由序列号8所示的氨基酸序列构成含有相对于序列号7或10所示的碱基序列具有70％以上的序列一致112.根据权利要求111所述的应用，有由序列号11或13的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核9穿支梗死或在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死治疗用药物组合皮质的层覆盖，大脑皮质与大脑基底核和丘脑同样为神经细胞的细胞体聚集而成的灰白[0003]脑梗死是指脑的血管堵塞、发生了血液无法运送的部分的神经细胞死亡的状烈血管收缩作用的内皮素来诱发缺血的模型(非专利疗剂的研究中，使用了以非专利文献1中记载的啮齿类脑梗死模型为代表的多种啮齿类脑作为使用啮齿类脑梗死模型的非临床试验中的有效性与临床试验中的有效性的背离的原大脑中动脉发生闭塞的模型、即大脑中动脉闭塞(middlecerebralarteryocclusion，价量表NationalInstitutesofHealthStrokeScale(NIHSS)适合于非人灵长类模型的改变评价量表Non_HumanPrimateStrokeScale(NHPSS)的评价中，MCAO模型在梗死诱导[0006]已知通过使用内皮素等血管障碍诱导剂局限于脑的内囊区引起血管障碍来制作对该脑卒中模型进行NHPSS等运动功能障碍评分，但是其实施例公开了该脑卒中模型并未[0007]报道了为了使用非人灵长类制作白质梗死模型而使用光敏性色素孟加拉玫瑰红并照射绿色光、从而使脑的内囊后脚处产生果障碍部位稍微偏离内囊后脚的靶部位则不死模型以及使用该模型评价脑梗死发病72小时后以后的亚急性期～慢性期的脑梗死治疗导剂而在受穿支支配的区域特异性地诱导障碍的脑梗尚无成功例子。作为与这2种神经再生策略截然不同的策略，有利用体内直接重编程~9)。形胶质细胞强制表达NeuroD1、利用DR补充神经细胞，由此使摄食行动等精细运动功能损伤1周后强制表达NeuroD1，结果小胶质细胞/巨噬细胞转化为了神经细胞且精细运动功报告事例，仅止步于在啮齿类脑梗死模型中通过在急性期～亚急性期表达NeuroD1而使精细运动功能得到恢复，未报道过(1)利用NeuroD1而步行、前后肢的动作等综合运动功能(grossmotorskills)恢复的事例、(2)在慢性期给药NeuroD1时功能恢复的事例和(3)利用NeuroD1使非人灵长类的功能恢复的[0026]非专利文献11：LivingstonJetal.,bioRxiv,2020,doi:/大脑基底核_丘脑区域给药内皮素，除了能够诱导大脑基底核障碍和丘脑障碍以外还能够脑梗死、穿支梗死或在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死的非人灵长类动物模型特别有用[0035][1]一种脑梗死的非人灵长类动物模型的制作方法，其包括向非人灵长类的大脑标的方式确定给药部位并向该给药部位给药内皮素NeuroD1蛋白或编码NeuroD1蛋白的多[0079][32]一种用于治疗在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死的药物组合物，其含有NeuroD1蛋白或编码NeuroD1蛋白的多白的多核苷酸，上述多核苷酸为含有编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱多核苷酸含有相对于序列号7或10所示的碱基序列具有70％以上的序列一致性的多核苷mRNA为含有由序列号11或13的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸的mRNmRNA含有多聚A序列。mRNA被包封于药物递送系统(DDS)[0103][56]一种在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死的治疗方法，其包括将上述[31]~多核苷酸给药于对象的步骤，上述多核苷酸为含有编码由序列号8所示的氨基酸序列构成酸含有相对于序列号7或10所示的碱基序列具有70％以上的序列一致性的酸为含有序列号7或10所示的碱基序列的含有由序列号11或13的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸的NeuroD1蛋白的多核苷酸的表达载体给药于对象的NeuroD1蛋白的多核苷酸为含有编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序NeuroD1蛋白的多核苷酸含有相对于序列号7或10所示的碱基序列具有70％以上的序列一NeuroD1蛋白的多核苷酸为含有序列号7或10所示的碱基序列的多[0135][88]根据上述[87]所述mRNA含有序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的、编码NeuroD1蛋白的碱基序列。NeuroD1蛋白的mRNA为含有由序列号11或13的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷NeuroD1蛋白的mRNA含有多聚A序列。~200个核苷酸。NeuroD1蛋白的mRNA为含有修饰核苷的多[0143][96]根据上述[95]所述NeuroD1蛋白的mRNA被封入脂质纳米粒子[0150][103]NeuroD1蛋白或编码NeuroD1蛋白的多核苷酸在制造用于治疗穿支梗死或亚[0151][104]NeuroD1蛋白或编码NeuroD1蛋白的多核苷酸在制造用于治疗在穿支支配区核苷酸为含有编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序核苷酸含有相对于序列号7或10所示的碱基序列具有70％以上的序列一致核苷酸为含有序列号7或10所示的碱基序[0161][114]根据上述[111]～[113]中任一项所述的应用，其中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有由序列号11或13的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸的mRN[0162][115]根据上述[111]～[114]中任一项所述的应用，其中，编码NeuroD1蛋白的mRNA含有多聚A序列。[0164][117]根据上述[111]～[116]中任一项所述的应用，其中，编码NeuroD1蛋白的[0165][118]根据上述[111]～[117]中任一项所述的应用，其中，编码NeuroD1蛋白的[0168][121]根据上述[111]～[120]中任一项所述的应用，其中，编码NeuroD1蛋白的mRNA被包封于药物递送系统(DDS)[0169][122]根据上述[111]～[121]中任一项所述的应用，其中，编码NeuroD1蛋白的N二甲基甘氨酰基)哌啶4基]氧基}羰基)氮杂二基]二(庚酸)双(2壬基十一烷基)或其[0176][129]根据上述[127]或[128]所述的药物组合物，其中，脂质纳米粒子还含有[0191]图3示出实施例1的研究实验6中经内皮素一1处置的食蟹猴个体的经时的mRS评价[0192]图4示出实施例1的研究实验6中经内皮素一1处置的食蟹猴个体的经时的NHPSS的照)的内皮素1处置后的运动功能障碍的经时变化而得的结果。横轴表示注入内皮素1后[0201]图10示出利用mRS评价实施例12(a)的NeuroD1mRNA_LNP组(ND1mRNA)和对照组蟹猴个体的脑的DTI图像为基础进行张量分析而获得的弥散张量纤维束成像(Diffusion素_1后第114天的结果，B示出NeuroD1mRNA_LNP组(ND1mRNA)的注入内皮素_1后第114~的图的纵轴表示障碍侧的FA值除以非障碍侧的FA值而得的值(相对值)。白色圆表示NeuroD1mRNA_LNP组的相对值的各值，用棒示出它们的平均值。误差棒表示标准误差[0203]图12示出实施例12(c)的侧脑室的容积的分析结果。A和B示出用mRNA_LNP处置后示出NeuroD1mRNA_LNP组(ND1mRNA)的注入内皮素_1后第114～115天进行分析而得的3个[0204]图13示出实施例12(d)的多巴胺转运体的表达分析的结果。A和B为示出用mRNA_LNP处置后的食蟹猴个体的脑的冠状断切片的多巴胺转运体的免疫染色结果的照片。图中纹状体。A示出对照组(对照mRNA)的内皮素_1处置(脑缺NeuroD1mRNA_LNP组(ND1mRNA)的注入内皮素_1后第119～122天进行多巴胺转运体的免[0205]图14示出利用mRS评价实施例14的NeuroD1mRNA_LNP(ND1_2_L7)组(ND1mRNA)和明中使用的非人灵长类(猴)优选为能够通过使用改良Rankin量表(modifiedRankinScale，mRS，参照后述的表1)、非人灵长类动物卒中量表(Non一HumanPrimateStroke模型制作方法中使用的非人灵长类为3岁以上的食蟹猴。本发明的动物模型制作方法中使明的动物模型制作方法中使用的非人灵长类为雄性[0211]“食蟹猴”(Macacafascicularis)是被分类为哺乳纲灵长目猴科猕猴属的灵长皮素是由203个氨基酸残基构成的前体接受加工而生成的。内皮素存在由不同基因编码的皮素1的氨基酸序列在物种间高度保守。3种内皮素具有短暂性的血管扩张作用和紧随随丘脑腹后核组成的组中的至少4个或全部5个神经核为靶标的方式确定至少3处或4处给药计算机断层扫描(CT)或核磁共振成像法(MRI)得到的脑内图像、或者本说明书中记载的以位于颅骨表面的前方的矢状缝与冠状缝的交叉点即前囟的假想水平面上的前后轴方向的距离B和左右轴方向的距离L(左)或R(右)、以及其头盖上右轴方向的距离指定的头盖上的给药位置(颅骨上的孔的位置)起朝向垂直向下的方向将染色液注入给药部位并在刚注入后调查脑中被染色的区域来确定。作为使用的染色液，动物模型制作方法可以为亚急性期～慢性期支支配区具有脑障碍的脑梗死)的非人灵长位(即，具有相对于上述的左脑内的内皮素的同、但是左右轴方向是将同一距离用R(右)方向代替L(左)而确定的坐标的给药部位)给药内皮素的给药量等并向左脑和右脑这两者给药内皮素的方法也可[0260]构成大脑基底核的壳核与尾状核一起形成背侧纹状体，另外形成豆状核的最外给药内皮素包括向丘脑(例如丘脑腹外侧核和药内皮素诱导丘脑下核等给药部位以外的周围区域的障碍也是由于所给药的内皮素的效[0268]本发明的非人灵长类动物模型具有在本发明的动物模型制作方法中诱导(制作)中，本发明的非人灵长类动物模型可以在较长时期(例如2周～3个月或更久)内维持障碍，灵长类的治疗等的亚急性期～慢性期可以是脑梗死发病72小时后以后、例如脑梗死发病2~6个月后或1个月后～6个月后或脑梗死发病3周后～3个月后或1个月后～3个月后的期[0270]本发明的非人灵长类动物模型作为穿支梗死的动物模型也有用。一个实施方式物模型还可以作为i)在大脑基底核一丘脑区域具有脑障碍的穿支梗死、ii)在大脑基底核以作为i)在大脑基底核一丘脑区域具有脑障碍、ii)在大脑基底核和/或丘脑具有脑障碍、塞而引发的疾病为脑梗死。脑梗死(cerebralinfarction)有时也被称为缺血性脑卒中[0274]腔隙性脑梗死的主要症状与常规脑梗死同样为半身脱力(运动麻痹)、半身麻木[0275]BAD为不能归于上述分类的类型的梗死之一。动脉粥样硬化血栓性脑梗死是粗血管因动脉硬化而堵塞的脑梗死。BAD是恰好介于腔隙性脑梗死与动脉粥样硬化血栓性脑梗本发明的非人灵长类动物模型可以作为亚急性期～慢性期的腔隙性脑梗死和/或BAD的动腔隙性脑梗死或BAD、或者iv)在大脑基底核、丘脑和内囊具有脑障碍的腔隙性脑梗死或BAD。在特定区域具有脑障碍的穿支梗死可以为在特定区域具有脑障碍的腔隙性脑梗死和[0278]本发明的非人灵长类动物模型也可以作为在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死的死而发生的细胞坏死所致的脑功能障碍(functionaldamage)。脑障碍通常包括具有该脑[0281]一个实施方式中，本发明的非人灵长类动物模型可以作为亚急性期～慢性期的、丘脑区域和内囊的脑障碍或iv)大脑基底核、丘脑和内囊的脑障碍在内的脑障碍的脑梗死脑区域和内囊的脑障碍、或者iv)大脑基底核、丘脑和内囊的脑障碍在内的脑障碍的脑梗常观察到内囊中也发生了障碍。大脑基底核和丘脑是神经细胞的细胞体聚集而成的灰白[0286]本发明的非人灵长类动物模型也可以作为具有局部性脑障碍的脑梗死的动物模经中星形胶质细胞在损伤部的周围进行反应而形成称为胶质瘢痕的结痂样组织而妨碍神[0289]关于本发明的非人灵长类动物模型为脑梗死的非人灵长类动物模型和/或为穿支扫描(CT)或MRI对该非人灵长类动物模型的梗死灶(障碍灶)进行判断。为在穿支支配区具的脑梗死的非人灵长类动物模型这一点除了上述方法以外还可以基于障碍的持续性进行障碍的持续性等)时使用的指标，只要能够评价该动物的运动功能障碍的状态则没有特别长类动物模型中所诱导的运动功能障碍可以为综合性运动功能(grossmotorskills)的而成的表1中记载的mRS(猴用)可以用于评价本发明的非人灵长类动物模型的运动功能障[0294]本发明的非人灵长类动物模型的运动功能障碍的严重程度例如是在NHPSS的运动作方法中，给药内皮素而诱导的运动功能障碍的严重程度是在NHPSS的运动系统评分中障的运动功能障碍的严重程度是在NHPSS的运动系统评分中障碍侧的评分为12以上。一个实是mRS为3～5且在NHPSS的运动系统评分中障碍侧的评分为[0296]一个实施方式中，本发明的非人灵长类动物模型的运动功能障碍的严重程度是非人灵长类动物模型的运动功能障碍的严重程度是在NHPSS的运动系统评分中障碍侧的评是mRS为3～5且在NHPSS的运动系统评分中障碍侧的评分为12分来判断运动功能障碍的持续性时，例如可以基于脑梗死发病2周后以后经过任意规定时间的NHPSS的运动系统评分来判断运动功能选方法包括向本发明的非人灵长类动物模型给药受试物质的步骤和判定该受试物质对该梗死和/或BAD)或在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死(例如在穿支支配区具有脑障碍且该方法是筛选针对亚急性期～慢性期(特别是慢性期)的穿支梗者、腔隙性脑梗死和/或BAD)或亚急性期～慢性期(特别是慢性期)的在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死(例如在穿支支配区具有脑障碍且该脑障(特别是慢性期)的除穿支梗死和在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死以外的脑梗死的脑梗[0315]本发明的脑梗死治疗剂的筛选方法对于评价、筛选针对人的亚急性期～慢性期性期～慢性期(特别是慢性期)的在穿支支配区具以外的脑梗死(即，心原性脑栓塞症和动脉粥样硬化血栓性脑梗死)的脑梗死治疗剂也有[0317]本发明的脑梗死治疗剂的筛选方法也可以用于筛选针对严重程度高的脑梗死的治疗剂的筛选方法是筛选针对在NHPSS的运动系统评分中障碍侧的评分为4以上的脑梗死在NHPSS的运动系统评分中障碍侧的评分为12以上的脑梗死的脑梗死治疗剂的方法。一个统评分中障碍侧的评分为12以上的脑梗死的脑梗死治疗[0318]本发明的脑梗死治疗剂的筛选方法也可以用于筛选针对具有局部性脑障碍的脑剂的筛选方法为筛选针对亚急性期～慢性期的具有局部性脑障碍的脑梗死的脑梗死治疗梗死治疗剂为目的时，优选向亚急性期～慢性期(例如脑梗死发病的3周后)的本发明的非[0320]本发明的脑梗死治疗剂的筛选方法包括判定给药于本发明的非人灵长类动物模受试物质之前相比有改善的受试物质可鉴定为亚急性期～慢性期的穿支梗死(例如腔隙性脑梗死和/或BAD)的脑梗死治疗剂。给药于在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死的本发明的为针对在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死的脑梗死治疗剂。过本发明的脑梗死治疗剂的筛选方法鉴定出的脑梗死治疗剂或者针对穿支梗死、在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死或亚急性期～慢性期的脑梗死的脑梗死治疗剂。本发明还提供含有NeuroD1蛋白或编码NeuroD1蛋白的多核苷酸的穿支梗死治疗用(例如亚急性期～慢性期的穿支梗死治疗用或慢性期的穿支梗死治疗用)的药物组合物、亚急性期～慢性期的脑梗治疗用(例如亚急性期～慢性期的脑梗死治疗用或慢性期的脑梗死治疗用)的药物组合物、具有局部性脑障碍的脑梗死治疗用(例如亚急性期～慢性期的脑梗死治疗用或慢性期的脑梗死治疗用)的药物组合物、mRS为2以上的脑梗死治疗用(例如亚急性期～慢性期的脑梗死治疗用或慢性期的脑梗死治疗用)的药物组合物、NIHSS为5以上的脑梗死治疗用(例如亚急性期～慢性期的脑梗死治疗用或慢性期的脑梗死治疗用)的药物组合物。虽然在后文中详碍的脑梗死治疗用、具有局部性脑障碍的脑梗死治疗用、mRS为2以上的脑梗死治疗用或药物组合物、mRS为2以上的脑梗死治疗用的药物组合物和/或NIHSS为5以上的脑梗死治疗[0325](i)由序列号6或8所示的氨基酸序列或相对于序列号6或8所示的氨基酸序列具有90％以上、优选95％以上、更优选98％以上、进一步优选99％以上、例如99.4％以上或[0327]本发明的药物组合物中使用的NeuroD1蛋白优选具有转录因子活性。需要说明的是，序列号6或8分别为小鼠NeuroD1蛋白或人NeuroD1蛋白的氨基酸序列，分别为由小鼠NeuroD1基因的CDS或人NeuroD1基因的CDS编码的多肽序列。[0329](i)由序列号8所示的氨基酸序列或相对于序列号8所示的氨基酸序列具有98％以[0332](i)由序列号6所示的氨基酸序列或相对于序列号6所示的氨基酸序列具有98％以子起作用而表达亢进的控制下基因的表达量增加时，可判断为NeuroD1蛋白具有转录因子[0335]本发明的药物组合物中所含的NeuroD1蛋白可以被包封于可向目标细胞递送蛋白且该蛋白质被封入药物递送载体中。一个实施方式中，本发明的药物组合物可以含有[0337](i)含有编码由序列号6或8所示的氨基酸序列或相对于序列号6或8所示的氨基酸上或99.5％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的蛋白质的碱[0338](ii)含有编码由在序列号6或8所示的氨基酸序列中具有1～50个(例如1～2个、1碱基序列具有90％以上、优选95％以上、更优选98％以上、进一步优选99％以上、例如号5所示的碱基序列为小鼠NeuroD1基因的CDS，序列号7或10所示的碱基序列为人NeuroD1[0343](i)含有编码由序列号8所示的氨基酸序列或相对于序列号8所示的氨基酸序列具[0345](iii)含有序列号7或10所示的碱基序列或者含有相对于序列号7或10所示的碱基[0348](i)含有编码由序列号6所示的氨基酸序列或相对于序列号6所示的氨基酸序列具[0350](iii)含有序列号5所示的碱基序列或者含有相对于序列号5所示的碱基序列具有[0354](i)含有相对于序列号10所示的碱基序列具有60％以上、优选70％以上、更优选80％以上、进一步优选90％以上或95％以上的序列一致性且编码由序列号8所示的氨基酸[0355](ii)含有相对于序列号7所示的碱基序列具有60％以上、优选70％以上、更优选80％以上、进一步优选90％以上或95％以上的序列一致性且编码由序列号8所示的氨基酸以上、进一步优选90％以上或95％以上的序列一致性且编码由序列号6所示的氨基酸序列列等)和目标生物学序列进行比对时在序列之间一致的残基的比例(％)(通常为一致的残[0359]GapExtend[0363](i)含有编码由相对于序列号6或8所示的氨基酸序列具有98％以上、优选99％以[0364](ii)含有编码由在序列号6或8所示的氨基酸序列中具有1～10个(例如1～2个、1[0365](iii)含有编码由序列号6或8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列的多核[0368](vi)含有相对于序列号7或10所示的碱基序列具有70％以上的序列一致性的碱基[0369](vii)含有相对于序列号7或10所示的碱基序列具有70％以上的序列一致性且编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基[0370](viii)含有相对于序列号7所示的碱基序列具有70％以上的序列一致性且编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的[0371](ix)含有相对于序列号10所示的碱基序列具有70％以上的序列一致性且编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的[0375](xiii)含有相对于序列号11或13的第44位～第1114位的碱基序列、第44位～第或95％以上)的序列一致性的碱基序列或者由该碱基序列构成、并且优选编码由相对于序列号8所示的氨基酸序列具有90％以上(例如95％以上)的序列一致性的氨基酸序列构成的[0377]一个实施方式中，以可表达的状态编码NeuroD1蛋白的多核苷酸可以包含在表达载体中。本发明中的含有编码NeuroD1蛋白的多核苷酸的表达载体在能够进行或促进向mRNA的转录或mRNA的翻译的序列的控制下以可发挥作用的状态包含含有编码NeuroD1蛋白GFAP启动子可以含有序列号14所示的碱基序列。为了向星形胶质细胞递送编码NeuroD1蛋表达载体以被包装于病毒粒子中的核酸载体的形式含有在能够进行或促进mRNA的转录或制作在市售的载体质粒(例如pAAV_CMVVector(宝生物公司)(例如人GFAP启动子序列)和任意的核酸分子序列(例如编码NeuroD1蛋白的碱基序列)的AAV载体质粒。另外，准备补充AAV辅助功能的含有AAV的Rep基因和Cap基因的质粒和促进[0381]一个实施方式中，本发明的药物组合物包含含有编码NeuroD1蛋白的多核苷酸的合物包含含有编码NeuroD1蛋白的多核苷酸的序列的RNA。mRNA例如可在体外或体内进行翻译并产生所编码的多肽。一个实施方式中，mRNA可在体内进行翻译并产生所编码的多肽。[0383]一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的多核苷酸可以为编码NeuroD1蛋白的mRN包含含有编码NeuroD1蛋白的碱基序列的多核苷酸的RNA。本发明中的编码NeuroD1蛋白的mRNA典型地在能够进行或促进mRNA的翻译的序列的控制下以可发挥作用的状态包含含有序列号规定的碱基序列表示DNA序列时，对于含有用该特定序列号规定的碱基序列的RNA 或可以具有其它修饰(甲基化等)。终止密码子TAA使用TGATAG)。编码NeuroD1蛋白的mRNA所含的UTR只要能够表达NeuroD1蛋鸟嘌呤碱基的7位被甲基化的结构，也被称为7_甲基鸟苷酸帽。Cap_1是在Cap_0的基础上列可以是多个聚A夹着由A以外的核苷酸构成的间隔序列连接而成(国际公开WO2016/[0387](i)含有编码由序列号6或8所示的氨基酸序列或相对于序列号6或8所示的氨基酸[0388](ii)含有编码由在序列号6或8所示的氨基酸序列中具有1～50个(例如1～2个、1序列构成的蛋白质的碱基序列的mRNA。该多核苷酸所编码的蛋白质(NeuroD1蛋白)优选具相对于由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质具有90％以上(例如95％以上、98％以序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性且编码由序列号8mRNA为含有相对于序列号7或10所示的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上、95％以上)的序列一致性且编码相对于由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质具有由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列的mRNA。一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有相对于序列号10所示的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性且编码相对于由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋7所示的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性且编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列的mRNA。一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有相对于序列号7所示的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性且编码相对于由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋[0391]一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有相对于序列号11或13的第44位~第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性且编码相对于由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质具有蛋白的mRNA为含有相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位所示的白的mRNA为含有序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列的13的第44位～第1120位的碱基序列含有人NeuroD1基因的CDS和多个终止密码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列、还含有来自人α珠蛋白基因的5’或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性且编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的NeuroD1蛋白的mRNA为含有序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列、还含有来自人α珠蛋白基因的5’UTR和/或3’UTR的mRNA。一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有由序列号11或13的第4位～第43位的碱基序列构成的5’UTR和/编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列的mRN[0394]一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA的多聚A序列的长度为30～500个核苷NeuroD1蛋白的mRNA为含有相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位列的mRNA。一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有序列号11或13的第44位～第~第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或NeuroD1蛋白的mRNA为含有序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有由序列号11或13的第4位～第43位的碱基序列构成的5’UTR和/或由序列号11或13的第1121位～第1231位的碱基序列构成的3’UTR以及多聚A序列的mRNA。一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有由序列号11或13的第4位～第白的mRNA为含有相对于序列号11或13的第4位～第1231位的碱基序列具有70％以上(例如[0397]一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有序列号7或10所示的碱基序列、13的第1121位～第1231位的碱基序列构成的3’UTR以及多聚A序列的mRNA。一个实施方式以上)的序列一致性且编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列和多聚A合酶链式反应(PCR)而生成DNA模板。生成的DNA模板可以使用体外转录(invitrotranscription；IVT)系统进行转录。该系统典型地含有转录缓冲液、核苷三磷酸(NTP)、帽方法的5’末端序列。例如利用使用CleanCap(注册商标)ReagentAG(TriLink中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为从5’侧起含有序列号11或13的第1位～第3位的碱基序列列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列、由序列号11或13的第1121位～第1231位的碱基序列构成的3’UTR和多聚A序列的mRNA。一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有由序列号11或13的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性且编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列和多聚A序列的m[0401]一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有序列号11或13所示的碱基序列列(具体而言，编码NeuroD1蛋白的mRNA)中所含的此种式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位~第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的且编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列、并且含有修饰核苷、优选1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性且编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有序列号11的第44位～第1114位或第44位～第1120位的序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80%假尿苷的mRNA。一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有序列号11的第44位～第mRNA为含有相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性且编码由序列号8所示的白的mRNA为含有序列号11的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列且还含有于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列且还含有来自人α珠蛋白基因的5’UTR的mRNA为含有相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性且编码由序列号8所示NeuroD1蛋白的mRNA为含有序列号11的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列mRNA为含有相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性且编码由序列号8所示的及多聚A序列、并且含有修饰核苷、优选N1一甲基假尿苷的mRNA。一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有序列号11的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列码NeuroD1蛋白的mRNA为含有相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120为N1_甲基假尿苷的mRNA。全部尿苷被置换为N1_甲基假尿苷的编码NeuroD1蛋白的mRNA例~第1231位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以且编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列和多聚A序列、并且含有N1_4位～第1231位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一以上或95％以上)的序列一致性且编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基列构成的蛋白质的碱基序列(例如序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第的碱基序列或相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列(例如序列号11或13的第44位～第1114位~第1120位的碱基序列或相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性的碱基序列)且还含有5’UTR和/或3’UTR、并且具有5’帽子结构的mRNA。一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列(例如序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列或相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列(例如序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列或相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第列构成的蛋白质的碱基序列(例如序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第的碱基序列或相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性的碱基序列)且还含有列构成的蛋白质的碱基序列(例如序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第的碱基序列或相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性的碱基序列)且含有修蛋白的mRNA为含有编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列(例如序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列或相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以为含有编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列(例如序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列或相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以mRNA为含有编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列(例如序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列或相对于序列号11或13的第44位~第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或NeuroD1蛋白的mRNA为含有编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列(例如序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列或相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、[0418]一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有由序列号11或13的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸和多聚A序列、并且具有作为5’帽子结构的Cap一1的Cap1的mRNA。[0419]一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有由序列号11或13的第1位～第由序列号11或13的第4位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸和多聚A序列且含有修饰码NeuroD1蛋白的mRNA为含有相对于序列号11或13的第4位～第1231位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性且编码由序列号8所示的氨[0420]一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有由序列号11或13的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸和多聚A序列且一部分或全部、优选全部尿苷被置换为蛋白的mRNA为含有由序列号11或13的第4位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸和多聚第4位～第1231位的碱基序列具有70％以上(例如80％以上、90％以上或95％以上)的序列一致性且编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的蛋白质的碱基序列和多聚A序列且一部[0422](i)在由序列号11的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸的5’末端借助[0426](i)在由序列号13的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸的5’末端借助[0428]一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有序列号11所示的碱基序列且一实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有序列号11所示的碱基序列且全部尿苷被置换为N1甲基假尿苷、并且具有作为5’帽子结构的Cap1的mRNA。一个实施方式中，编码[0429]一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有序列号11所示的碱基序列的[0433]一个实施方式中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为含有序列号13所示的碱基序列的中，编码NeuroD1蛋白的mRNA为由序列号11所示的碱基序列构成、并且全部尿苷被置换为N1_甲基假尿苷的mRNA。全部尿苷被置换为N1_甲基假尿苷的编码NeuroD1蛋白的mRNA例如可以为由序列号13所示的碱基序列构成的多可以包封于DDS中。一个实施方式中，本发明的药物组合物可以包含编码NeuroD1蛋白的的药物组合物含有编码NeuroD1蛋白的mRNA且该mRNA被封入药物递送载体中。一个实施方离子化(ionizable)脂质)(例如封入siRNA的脂质纳米粒子中使用的DLin_MC3_DMA)构成。[0440]作为脂质纳米粒子中可使用的阳离子性脂质的其它例子，可列举例如式(I)所示[0444]一个实施方式中，本发明的药物组合物含有编码NeuroD1蛋白的mRNA且该mRNA被[0446](i)含有编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的NeuroD1蛋白的碱基序列的以上或95％以上)的序列一致性且编码由序列号8所示的氨基酸序列构成的NeuroD1蛋白的[0448](iii)含有相对于序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位所示的号8所示的氨基酸序列构成的NeuroD1蛋白的碱基序列的mR[0450](v)含有序列号11或13的第44位～第1114位或第44位～第1120位所示的碱基序列[0452](vii)含有序列号11所示的碱基序列或由该碱基序列构成、并且一部分或全部尿43位的碱基序列构成的5’UTR和/或由序列号11或13的第1121位～第1231位的碱基序列构[0460](xv)含有相对于序列号11或13的第4位～第1231位的碱基序列具有70％以上(例[0461](xvi)含有由序列号11或13的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸和多星形胶质细胞)的脂质纳米粒子即可。该脂质纳米粒子能否将mRNA递送到胶质细胞这一点此可进行判断。在例如导入被封入脂质纳米粒子中的mRNA时eGFP的表达强度增大的情况至星形胶质细胞的脂质纳米粒子所含的阳离子性脂质，可列举例如化合物1(Ex1、实施例胶质细胞的脂质纳米粒子含有化合物1(Ex1)或其盐和/或化合物2(Ex2)或其盐作为阳离子[0469]一个实施方式中，含有编码NeuroD1蛋白的mRNA且该mRNA被封入脂质纳米粒子中NeuroD1蛋白的mRNA且该mRNA被封入脂质纳米粒子中的本发明的药物组合物中，该脂质纳码NeuroD1蛋白的mRNA且该mRNA被封入脂质纳米粒子中的本发明的药物组合物中，该脂质纳米粒子中的阳离子性脂质可以为化合物1(Ex1)或其盐。一个实施方式中，含有编码NeuroD1蛋白的mRNA且该mRNA被封入脂质纳米粒子中的本发明的药物组合物中，该脂质纳米粒子中的阳离子性脂质可以为化合物2(Ex2)或其[0470]一个实施方式中，含有编码NeuroD1蛋白的mRNA且该mRNA被封入脂质纳米粒子中哌啶4基]氧基}羰基)氮杂二基]二(庚酸)双(2壬基十一烷基)或其盐作为阳离子性脂[0471]一个实施方式中，含有编码NeuroD1蛋白的mRNA且该mRNA被封入脂质纳米粒子中[0472]一个实施方式中，含有编码NeuroD1蛋白的mRNA且该mRNA被封入脂质纳米粒子中哌啶4基]氧基}羰基)氮杂二基]二(庚酸)双(2壬基十一烷基)或其盐作为阳离子性脂[0473]本发明还包括药物组合物，其含有编码NeuroD1蛋白的mRNA且该mRNA被封入脂质有化合物1(Ex1)或其盐和/或化合物2(Ex2)或其盐的脂质纳米粒子中。本发明还包括药物组合物，其含有编码NeuroD1蛋白的mRNA且该mRNA被封入含有化合物1(Ex1)或其盐的脂质mRNA被封入含有化合物1(Ex1)或其盐的脂质纳米粒子中，脂质纳米粒子还含有DMG_mRNA被封入含有化合物2(Ex2)或其盐的脂质纳米粒子中，脂质纳米粒子还含有DMG_分尿苷被置换为N1_甲基假尿苷的mRNA、全部尿苷被置换为N1_甲基假尿苷的mRNA、具有5’[0481](iv)由序列号11所示的碱基序列构成、并且全部尿苷被置换为N1_甲基假尿苷的[0482]一个实施方式中，含有编码NeuroD1蛋白的mRNA的本发明的药物组合物为含有以[0483](i)含有由序列号11的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸和多聚A序[0484](ii)含有由序列号11的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸和多聚A序[0485](iii)由序列号11的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸和多聚A序列所[0486](iv)由序列号11的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸和多聚A序列所[0487]一个实施方式中，含有编码NeuroD1蛋白的mRNA的本发明的药物组合物为含有以下的(i)～(iv)中的2种以上编码NeuroD1蛋白、并且多聚[0488](i)含有由序列号11的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸和多聚A序[0489](ii)含有由序列号11的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸和多聚A序[0490](iii)由序列号11的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸和多聚A序列所[0491](iv)由序列号11的第1位～第1231位的碱基序列构成的多核苷酸和多聚A序列所[0492]本发明的药物组合物还可包括含有多聚A序列的长度不同的两种以上编码[0493]本发明的药物组合物还可包括未将mRNA包封于DDS中(例如封入药物递送载体中)[0496]一个实施方式中，本发明的药物组合物可以用于治疗亚急性期～慢性期的脑梗个实施方式中，本发明的药物组合物可以用于治疗亚急性期～慢性期的腔隙性脑梗死和/慢性期的在穿支支配区具有脑障碍且该脑障碍为包括i)大脑基底核一丘脑区域的脑障碍、组合物可以用于治疗亚急性期～慢性期的具有局发明的药物组合物可以用于治疗慢性期的具有局部性具有脑障碍的脑梗死(例如亚急性期～慢性期～慢性期的脑梗死(例如慢性期的脑梗死)发病对象/ct2/show/NCT04590118)或5～14(https:///ct2/show/NCT03202147)的患者作为临床试验对象。[0501]一个实施方式中，本发明的药物组合物可以是NIHSS为5以上(例如8以上)的脑梗式中，本发明的药物组合物可以是慢性期的NIHSS为8以上的脑梗死的治疗用药物组合物。明的药物组合物可以是mRS为3或4且NIHSS为8以上的脑梗死(例如亚急性期～慢性期的脑[0502]一个实施方式中，本发明的药物组合物是慢性期的mRS为2～5(例如3～5或3或4)实施方式中，本发明的药物组合物是慢性期的NIHSS为5以上(例如8以上)的穿支梗死(例[0503]一个实施方式中，本发明的药物组合物可以是慢性期的mRS为2～5(例如3～5或3或4)的在穿支支配区具有脑障碍的脑梗死(例如，在穿支支配区具有脑障碍且该脑障碍为为5以上(例如8以上)的在穿支支配区具[0504]一个实施方式中，本发明的药物组合物是慢性期的mRS为2～5(例如3～5或3或4)的脑梗死或慢性期的脑梗死)相伴随的穿支支配区的脑障碍的治疗用药物组合物。作为穿上)的脑梗死相伴随的穿支支配区的脑障碍的治个实施方式中，本发明的治疗方法可以为包括将治疗有效量的本发明的药物组合物、法可以为包括将治疗有效量编码NeuroD1蛋白的多核苷酸给药于对象的步骤的脑梗死的治治疗方法包括将治疗有效量的编码NeuroD1蛋白的mRNA给药于对象的步骤。一个实施方式~慢性期的脑梗死的治疗方法。一个实施方式中，本发明的治疗方法可以为慢的治疗方法可以为慢性期的在穿支支配区具有脑障[0511]一个实施方式中，本发明的治疗方法可以是mRS为2以上的脑梗死(例如亚急性期以是mRS为3～5的脑梗死(例如亚急性期～慢性期的脑梗死或慢性期的脑梗死)的治疗方NIHSS为8以上的脑梗死(例如亚急性期～慢性期的脑梗死或慢性期的脑梗死)的治疗方法。性期～慢性期的脑梗死或慢性期的脑梗死)的治梗死发病后的任一时期被评价为NIHSS为5以上的脑梗死。成为本发明的治疗对象的NIHSS从脑梗死发病起至NIHSS评分达到稳定为止的期间NIHSS被评价为8以上、然后症状恢复而明的治疗方法和药物组合物等的对象优选为需要应用该治疗方法和药物组合物等的对象，支梗死)或亚急性期～慢性期的脑梗死(例如慢性期的脑梗死)的对象、或者疑似具有脑梗另外可以为具有或疑似具有在穿支支配区具有脑障苷酸通过利用外科手段的局部给药而给药。一个实施方式中，本发明的药物组合物、方法包括向对象的梗死灶或障碍灶中的至少1处给药部位给药本发明的药物组合物、灶或障碍灶中的每一处梗死灶或障碍灶的给药部位给药本发明的药物组合物、NeuroD1蛋酸时使用的器具只要能够给药于目标部位则没有特别限定，可以使用例如活组织检查/注发明的治疗方法能够有效地治疗亚急性期～慢性期(特别是慢性期)的在穿支支配区具有(例如亚急性期～慢性期的脑梗死、特别是慢性期的脑梗死)发病对象和/或亚急性期～慢[0522]本发明的治疗方法和药物组合物优选能够带来大脑基底核_丘脑区域的障碍和内以以多巴胺转运体的表达水平为指标来示出。内囊的障碍及其恢复例如如后述实施例所[0523]本发明还提供本发明的药物组合物、NeuroD1蛋白或编码NeuroD1蛋白的多核苷梗死)、具有局部性脑障碍的脑梗死(例如亚急性期～慢性期的脑梗死或慢性期的脑梗死)或NIHSS为5以上(例如8以上)的脑梗死(例如亚急性期～慢性期的脑梗死或慢性期的脑梗梗死(例如亚急性期～慢性期的脑梗死或慢性期的脑梗死)或亚急性期～慢性期的脑梗死(例如慢性期的脑梗死)的治疗用药物组合物中的应用。本发明另外还提供NeuroD1蛋白或编码NeuroD1蛋白的多核苷酸在制造mRS为2以上(例如3～5)和/或NIHSS为5以上(例如8以上)的脑梗死(例如亚急性期～慢性期的脑梗[0528]在没有特别声明时，以下的实施例中记载的各步骤的操作可使用公知技术来实[0532]本发明人们认为，啮齿类脑梗死模型不能通过NHPSS等运动功能障碍评分进行综够再现性高地进行利用NHPSS等的综合性运动技能的评价的事例，本发明人们认为现有的Tyr‑Phe‑Cys‑His‑Leu‑Asp‑Ile‑Ile‑Trp(在Cys1与Cys15之间和Cys3与Cys11之间具有二硫pp.265‑300，1984)来研究内皮素‑1的脑内注入部位。关于食蟹猴的脑图，前后轴使用了内注入部位的坐标，前后轴使用AP坐标，左右轴使用ML坐标。首先将连接两外耳道的线体的上述各位置所对应的合计3处或6处注入用0.1％乙酸(将乙酸(Wako、017‑00256)用周为止明确观察到右前后肢的运动功能障碍的症状，但是在4周后自然恢复到可观察到轻[0546]关于经上述处置的食蟹猴所显示出的运动功能障碍的症状，1个个体中作为障碍但是确认到自主运动减少和障碍侧即右前后肢完全麻痹，而且该个体在处置起1周时持续[0557]以研究实验3的条件为基础进行了以下研究。为了更可靠地诱导脑障碍，将内皮使用微量注射器，向每个个体的上述各位置所对应的合计3处注入内皮素‑1。内皮素‑1以或者另一个个体在处置后第92天时mRS也为3或4，NHPSS的运动系统评分(表2)为12(障碍テスク、35317‑32)的2％溶液(溶解于生理盐水而制备)的染色法(TTC染色)确认首次注入[0569]在受穿支支配的神经核和内囊中确认到障碍灶，并且确认运动功能障碍持续4周以上，因此认为按照研究实验6的条件制作的模型是能够评价亚急性期～慢性期的脑梗死够评价亚急性期～慢性期的脑梗死(特别是穿支梗死或在穿支支配区具有脑障碍的脑梗[0573]按照实施例1的研究实验6中记载的方法，对6个雄性食蟹猴个体注入内皮素_1溶[0575]使用AAV9载体制作共表达小鼠NeuroD1和GFP的表达载体(AAV_GFAP_Neurod1_列号1所示的表达载体AAV_GFAP_Neurod1_IRES_GFP的碱基序列中，第171位～第1842位的碱基序列相当于人GFAP启动子的碱基序列(序列号14)，第2355位～第3428位的碱基序列4033位～第4752位的碱基序列(序列号3)相当于GFP基因的碱基序列(CDS)，编码GFP(序列NeuroD1基因的碱基序列、IRES和GFP基因的碱基序列，由此制作pAAV质粒(pAAV_hGFAP_进一步培养约72小时。向产生AAV9载体的细胞培养液中添加TritonX‑100(Merck公司、化吸附AAV9，利用50mM甘氨酸‑HCl(pH2.7)洗脱，回收多个级分。回收液用2MTris‑HCl照表1)和NHPSS(参照表2)不产生组间差异的方式分为2组(分别为N＝3)。各组设为给药NeuroD1表达载体的AAV‑NeuroD1组和给药对[0580]在各组的脑梗死模型个体中，在实施例2中制作脑梗死模型时注入内皮素‑1的合[0582]对于实施例4中用AAV载体处置的AAV‑N